1、此时所生成的富马酸没有干扰。2. 经水解后测定法 1）碱水解后测定法 在含卤素的有机药物中，卤素原子一般以共价键与有机碳或芳环相连，因此在分析之前，需将有机卤素原子转变为无机卤素离子，然后采用银量法、碘量法等适宜方法进行含量测定。常用的本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，在碱性条件下，加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Volhard法）测定。本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物（如卤原子和脂肪碳原子相连者）。例6-2 中国药典 （2010年版）收载的三氯叔丁醇的测定取本品约0.1g，精密称定，加乙醇5ml ，溶解后，加20氢氧
2、化钠溶液5ml，加热回流15分钟，放冷至室温，加水20ml与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液（0.1mol/L）30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于6.216mg 的C4H7Cl3O.1/2H2O。三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl -生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。CCl3-C（CH3）
3、2OH + 4NaOH （CH3）2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3Fe3+ + SCN - Fe （SCN）2+ （淡棕红色）2）酸水解后测定法本法是将含卤素有机药物溶于适当的矿酸（如盐酸）加热回流使其水解，将不溶性金属盐类水解置换为可溶性盐，然后选用配位滴定或剩余酸碱滴定法测定。例6-3 硬脂酸镁的测定 中国药典 （2010年版） 取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L） 50ml，煮沸至油滴澄清，继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙
4、指示液12滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于2.016mg的MgO。Mg（C17H35COO）2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O3. 经氧化还原后测定法1）碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时,由于分子中卤素的结合较牢固,需在碱性条件下加还原剂（如锌粉）加热回流，使结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Fajans法）测定。本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。例6-3 泛影酸的测定 中国药典 （2010年版）
5、 取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。ChP（2010）收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。NaI + AgNO3AgI + NaNO32）酸性还原后测定法例6-4 碘番酸的测定 日本药局方 （13版）取本品的干燥品约0.4g，精密称定，加锌粉1g及冰醋酸10ml，加
6、热回流30min，放冷，冷凝管用水30ml洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤2次，每次20ml，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于19.031mg的C11H12 I 3NO2。6.1.2 经有机破坏的分析方法某些含金属原子、卤素的有机药物结构中的待测原子与碳原子结合牢固，用上述的水解或氧化还原的方法难以将有机药物中待测原子转变为无机形式。因此必须采用有机破坏的方式将药物分子中有机结构部分完全破坏，使得结合的待测原子转变成为可测定的无机形式。一般有机破坏被分为湿法破坏、
7、干法破坏和氧瓶燃烧法。1. 湿法破坏（湿法消解） 本法主要用于含氮化合物的前处理，在生物制品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷及氯化钠测定法的前处理。另本法亦用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除。分解剂（消解剂或消化剂）主要使用硫酸，加入一些氧化剂（如硝酸、硫酸盐、高氯酸等）作为辅助消化剂，根据消解剂的组合不同，可有如下表3-1中几类常见类型：表6-1 湿法消解常用类型 类型特 点HNO3- HClO4反应激烈，破坏力强。适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，所得金属离子一般为高价态，不适宜含氮杂环类药物的处理。HNO3- H2SO4适用于大多数有机药物的破坏，所得金属离子一般为高价态，不适于
8、碱土金属药物。H2SO4- SO42-常用于含砷、锑元素的有机药物的前处理，所得金属离子为低价态。凯氏定氮法就是以硫酸硫酸盐为基础的含氮有机化合物定量分析的常用方法。即将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，将其中含碳的有机结构被氧化分解成二氧化碳和水，有机结合的氮则转化成为无机氨，并进一步与过量的硫酸反应生成硫酸氢铵或硫酸铵，直到混合物变得无色透明后分解完成。接着向溶液中加入氢氧化钠进行碱化后释放氨气，并随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收，最后用标定过的酸或碱滴定液滴定，从而计算出总氮量。凯氏定氮法又可分为常量法、半微量法、微量法三种，而实际运用中主要使用前两种，实际流程即为消解、蒸馏、
9、滴定、计算。消解过程反应一般较缓慢，因此，常在硫酸中加入硫酸钾或硫酸铵以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，提高反应速度，促进反应。常用的催化剂有汞或汞盐、硒粉、铜盐、二氧化锰等。其中汞或汞盐虽催化作用最强，但是由于汞盐易与氨生成硫酸铵汞配位化合物，所以不使用；另因样品中有卤素存在时，卤素可与汞结合成难离解的卤化汞而失去催化作用，所以使用时要特别注意。另外，值得注意的是，辅助氧化剂的使用应慎重，不能在高温时加入，应待消解液放冷后加入，并再次加热继续消解。仪器装置 凯氏烧瓶为30-50ml（半微量）或500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬质茄形烧瓶；蒸馏装置（半微量法）由1000ml的
10、圆底烧瓶（A）、（B）、连有氮气球的蒸馏器（C）、漏斗（D）、直形冷凝管（E）、100ml锥形瓶（F）和橡皮管夹（G、H）组成，见图6-1。常量法 取供试品适量（约相当于含氮量25-30mg），精密称定，若供试品为固体或半固体，滤纸称取，并连同滤纸置于干燥的500ml凯氏烧瓶中，然后依次加入硫酸钾（或无水硫酸钠）10g和硫酸铜粉末0.5g，再沿瓶壁缓缓加入硫酸20ml；在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使凯氏烧瓶成45斜置，用直火缓缓加热，使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，强热至沸腾，使溶液成澄清的绿色后，除另有规定外，继续加热30分钟，放冷，沿瓶壁缓缓加水250ml，振摇使混合，放冷后，加入4
11、0%氢氧化钠溶液75ml，注意使沿瓶壁流至瓶底，自成一液层，加锌粒防止暴沸，使用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接；末端500ml锥形瓶中装入2%硼酸溶液50ml，另滴入甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴；将冷凝管的下端插入硼酸液的液面下，轻轻振摇凯氏烧瓶，是溶液混合均匀，直接加热蒸馏，至接收液的总体积约为250ml时将冷凝管尖端提出液面，使蒸气冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏；馏出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。半微量法 消解操作基本同于常量法，不同的是所取的供试样约相当于含氮量1.0-2.0mg，使用30-50ml的干燥凯氏烧瓶，
12、硫酸钾（无水硫酸钠）的量0.3g与30%硫酸铜5滴，沿壁流下的硫酸2.0ml。蒸馏与滴定操作如下：取2%硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管的下端插入液面下，将凯氏烧瓶的内容物经由漏斗进入蒸馏瓶，使用少量的水淋洗凯氏烧瓶及漏斗，再加入40%氢氧化钠溶液10ml，用少量水再次漏斗数次，即开始进行蒸气蒸馏，至硼酸溶液开始由酒红色变为蓝绿色起，继续蒸馏10分钟后，将冷凝管提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。馏出液用硫酸滴定液（0.005mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定结果用空白试验校正。图6-1 半微量氮测定法装置
13、图应用范围 中国药典中应用本法用于测定含氨基或酰胺结构的药物含量，对于以偶氮或肼架构存在的含氮药物，在消解过程中易于生成氮气有所损失，则在消解前加锌粉还原后再处理；杂环中的氮，难断裂，可用氢碘酸或红磷还原为氢化杂环后再进行消解。某些含氮量较高的样品（超过10%），可在消解液中加入少量多碳化合物，如淀粉、蔗糖等作为还原剂，以利于氨转变为氨。2. 干法破坏1）高温炽灼法 本法系将有机药物灼烧灰化以达分解的目的。本法主要适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机物）以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物，不适合用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏。 高温炽灼法主要用于含卤素药物的鉴别，
14、亦用于含磷药物的定量测定和药物中砷盐的检查。根据分析对象的不同，常使用无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氢化锌等辅助灰化，方法如下：（1）含碘药物的鉴别：将样品置于坩埚中直火灼烧，或与无水碳酸钠混匀后，炽灼成紫色的碘蒸气产生。（2）含氟、氯、溴等元素药物的鉴别：将适量样品置于坩埚中，加入无水碳酸钠（或碳酸钠-碳酸钾混合物）混合，灼烧直至完全灰化，加水溶解后鉴别。（3）含磷药物的定量测定：如甘油磷酸钠注射液的含量测定：精密量取本品稀释液1ml，置坩埚中，加氧化锌1g，加热碳化后在600。炽烧1h，放冷，加水与盐酸各5ml，加热煮沸时溶解后，用钼蓝比色法测定。（4）砷盐的检查：有机结合的砷经与无水碳酸
15、钠共热转化成为无机砷盐，依法检验。主要用于高分子化合物（如右旋糖酐铁）或植物提取物（如大豆油）中砷盐的检验，亦应用于少数有机药物（如布美他尼等）。操作中应注意炽烧温度不宜超过700.，温度过高导致砷酸盐挥发。2）氧瓶燃烧法 本法适用于含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴定、限度检查或含量测定，同时应用于药物中杂质硒的检测。系将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的待测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据待测物质的性质，采用适宜的分析方法进行分析、测定。 本法是快速分解有机物的简单方法，不需要复杂设备，就能使有机化合物中的待测元素定量分解为离子型。该方法被各国药典所收载。（1
16、）仪器装置 燃烧瓶为500ml、1000ml、或2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞严密、空心、底部熔封铂丝一根（直径为1mm），铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的23 ，如下图6-2所示。 燃烧瓶容积大小的选择，主要取决于被燃烧分解样品量的多少。通常取样量为10-20mg，使用500ml燃烧瓶；加大样品取样量（200mg）使可选用1000ml或2000ml的燃烧瓶。燃烧瓶在使用之前要检查瓶塞是否严密。图6-2 A-F氧瓶燃烧装置及样品包装操作图（2）吸收液的选择：适当的吸收液使样品经燃烧分解产生所需的各种价态的形式，定量地将其吸收并转变为一定的便于测定的单一价态，以选择适应的分析
17、方法。如下几类药物选择的常用吸收液： 含氟药物一般选用茜素氟蓝比色法检测氟含量，一般燃烧产物为单一的氟化氢，可直接选水作为吸收液。 含氯药物采用银量法测定氯含量，燃烧产物亦为单一的氯化氢，但氯化氢在水中的溶解度较低，所以选用水-氢氧化钠溶液作为吸收液。 含溴药物采用银量法测定溴含量，分解产生的溴化氢可与氧气氧化成单质溴，故其燃烧产物为单质溴与溴化氢的混合物，运用水-氢氧化钠溶液构成的吸收液中加入还原剂二氧化硫饱和溶液，将单质溴还原为溴负原子。 含碘药物的测定过程中，分解产生的碘化氢继续与氧作用，生成少量的五价碘（HIO3）、一价碘（HIO）和微量的负一价碘（HI），以单质碘为主要产物。当使用硝
18、酸银滴定法测定含量时，可用水-氢氧化钠-二氧化硫饱和溶液作为吸收液，均转化成碘化钠（NaI）；若使用间接碘量法测定，用水-氢氧化钠溶液做吸收液，此时待测元素转化成为碘酸钾（NaIO3）与碘化钠，可用溴-醋酸溶液将其氧化成为碘酸（HIO3）后，再加碘化钾使之定量生成单质碘，再用硫代硫酸钠滴定液滴定生成的碘。 含硫药物的燃烧产物主要为三氧化硫，可使用浓过氧化氢溶液与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经吸收后转变成为硫酸，加入盐酸溶液并煮沸出去剩余的过氧化氢后，加入氯化钡试液，使硫酸生成硫酸钡，以重量法测定含量。 含磷药物（有机膦酸类）的燃烧产物为五氧化二磷，以水为吸收液，加少量的硝酸溶液并经加热煮沸使
19、焦磷酸（H4P2O7）和偏磷酸（HPO3）n转化为磷酸后，采用钼蓝（磷钼蓝）比色法测定含量。 含硒化合物在有机物燃烧分解的同时转化SeO2（含有少量的SeO3），经硝酸溶液吸收后转变为硒酸（H2SeO4），再用二氨基萘比色法测定。（3）称样 固体样品：研细后，精密称取各药品项下的规定量，置于在无灰滤纸（亦称定量滤纸）（图3-1B）中心，按虚线折叠（图3-1C）后，固定于铂丝下端的网内或螺旋处，使尾部露出；液体样品：将供试品滴在透明胶纸和无灰滤纸做成的纸袋中。纸袋的制法：将透明胶纸胶纸剪成规定的大小和形状（如图3-1D），中部贴一条约为16mm 6mm的无灰滤纸条，并于其突出部分贴一6mm 35
20、mm的无灰滤纸条（图3-1E），将透明胶纸对折，紧粘住底部及另一边，并使伤口敞开（图3-1F）；精密称定质量，用滴管将供试从上口滴在无灰滤纸条上，立即捏紧粘住上口，精密称定质量，两次质量之差即为供试样品量；软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹。（4）操作方法 在燃烧瓶中加入规定的吸收液，并将瓶口用水润湿；小心急速通氧气约1分钟（通气管口应接近液面,使瓶内空气排尽），立即用表面皿覆盖瓶口，备用。点燃包有样品的滤纸包或纸袋尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，用水少量封闭瓶口，待燃烧完毕（无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全被吸收液吸收，放置15分钟，用少量
21、水冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液。同法另需做空白试验。例6-5 盐酸胺碘酮的含量测定 中国药典（2010年版） 取供试品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水10ml为吸收液，俟吸收完全后，加溴醋酸溶液（取醋酸钾10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成100ml）10ml，密塞，振摇，放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口并通入空气流约35分钟以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示剂1ml，继续滴定至蓝色消失。并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫代硫酸钠滴定液（
22、0.02mol/L）相当于0.423mg的碘。盐酸胺碘酮用氧瓶燃烧分解，转化为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物和碘酸盐，加入溴-醋酸溶液，使全部转化为碘酸盐，过量的溴以加酸及通空气除去。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点。反应式如下：C25H29I2NO3HCl I2I2 + 6NaOH NaIO3 + 5NaI + 9H2ONaI + 3Br2 + H2O HIO3 + NaBr + 5HBrIO3 + 5KI +3H2SO4 3I2 + 3SO4 + 5K+ + 3H2OI2 + 6Na
23、2S2O3 2NaI + Na2S4O66.2 药物含量测定方法 药物的含量测定需在有效成分鉴别无误和杂质检查合格的基础上进行，是评价药品质量的重要内容之一。用化学方法或物理化学方法测定药物中有效成分的含量，称为“含量测定”，测定的结果原料药用含量百分比表示，制剂用含量占标示量的百分比表示。用生物学方法或酶法测定药物的效价，称为“效价测定”，测定的结果一般用效价单位（U）表示。本节仅对前种依据药物的理化测定法进行简要介绍，含量测定方法多种多样，其中容量分析法、光谱分析法和色谱法是中国药典（2010年版二部）收载最多的方法，下面分别加以概述，这些方法的具体应用将见诸于后续各章各类药物的分析中。6
24、.2.1 容量分析法1. 容量分析法的特点容量分析法（也称滴定分析法）是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到待测药物的溶液中，直到所滴加定液与被测药物按化学计量反应为止（通过适量方法指示），然后根据滴定液的浓度和消耗的体积，按化学计量关系就可以计算出被测药物含量的分析方法。药典中常用的容量分析法有酸碱滴定、非水滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法、氧化还原滴定法等。滴定分析的终点与化学计量点是两个即相互关联又各自独立的概念。当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计量点。但在滴定过程中反应体系常常无外观现象的变化，必须借助适当的方法指示化学计量点的到达。最常用的方法是借助指示剂的颜色变
25、化来判断化学计量点。即，在滴定过程中，当反应体系中的指示剂的颜色发生发生变化时终止滴定。指示剂的颜色变化点通常被称为滴定终点。但滴定终点与反应的化学计量点不一定恰好符合，它们之间总会存在微小差别，即“滴定误差”，当滴定误差小于0.2%时，分析结果的准确度符合定量分析的要求。容量分析法所用的仪器价廉易得，操作简便、快速、方法耐用性高，测定结果准确，通常情况下其相对误差在0.2%以下。但本法的专属性较差，一般适用于含量较高的式样分析。所以，容量分析法被广泛应用于化学原料药的含量测定。常用的滴定分析方式一般有三种。1）直接滴定法 当化学反应能够满足滴定分析的要求时，可用滴定剂直接对被测样品溶液进行滴
26、定。例如，中国药典以碘滴定液滴定维生素C。2）剩余滴定法 又称返滴定法。当滴定剂与被测组分的反应速度较慢或被测物质难溶于水时，不能直接滴定，这时可以先加入定量过量的第一种滴定剂，让被测物与该滴定剂完全反应，待反应结束后，再用第二种滴定剂返滴剩余的过量的第一种滴定剂。被测组分的量由定量过量的第一种滴定剂量与剩余的第一种滴定剂量之差来计算。例如，白矾中Al3+的测定，由于Al3+与二乙胺四乙酸盐（EDTA）配位反应速度较慢，不能采用直接滴定法测定Al3，可在Al3溶液中先加入定量过量EDTA标准溶液并加热促使反应加速完成，剩余的EDTA标准溶液再用ZnSO4滴定剂滴定。3）间接滴定法 当滴定剂与被
27、测物之间因存在有副反应的缘故，不能按照某一个确定的方程式进行反应时，可以先使被测物与某一试剂作用，定量地置换出另一种物质，该物质再进一步用滴定液滴定。例如，Na2S2O3不能直接滴定过氧苯甲酰等强氧化剂，因为在酸性条件下，这些强氧化剂将S2O3 氧化为S4O62 和SO42 等混合物，使反应没有确定的化学计量关系而无法进行计算。但是如在过氧苯甲酰的丙酮溶液中加入过量KI，使产生一定量的I2，然后由Na2S2O3滴定液滴定生成的I2，即可计算出过氧苯甲酰的量。2. 容量分析法的有关计算1）滴定度 系指每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量，以T来表示。中国药典用毫克（mg）表示。例如，用
28、碘量法测定维生素C的含量时，中国药典规定：每1ml点滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的维生素C（C6H8O6）2）滴定度（T）的计算 在容量分析中，被测药物分子（A）与滴定剂（B）之间按一定的摩尔比进行反应，反应可表示为： aA + bB cC+ dD 当反应完全时，被测药物与滴定剂之间存在化学计量关系（摩尔比）是，故被测物的量与滴定剂所消耗的量之间存在关系为，若滴定液浓度为（mol/L），则当其消耗体积为1ml时，所相当的被测物的量为： （6-1）式中为被测组分的摩尔质量。可见使用T可使滴定结果的计算简化，即WA=TVB 。故此被各国药典所采用。3）含量的计算 容量分析法常用的含量测定方法主要有直接滴定法和间接滴定法，其测定结果的计算方法分述如下。（1）直接滴定法：本法是用滴定液直接滴定被测药物，则被测药物的百分含量的计算式为： 含量（%）=100% （6-2） 在中国药典收载的容量分析法中，均给出了滴定度值。根据供试品的称取量（W）.滴定体积（滴定液被消耗的体积，V）合滴定度（T），即可计算出被测药物的百分含量。在实际工作中，所配置的滴定液的摩尔浓度与中国药典中规定的摩尔
