1、一 标本的采集和送检原则二 病原菌的检验程序（一）病原学诊断（二）病原菌成分检测（三）血清学诊断1.菌的形察细态结构观2.分离培养3.生化试验4.血清学试验5.物动试验6.物敏感药试验（一）病原学诊断 大小、形、排列、染色、及其有无特态殊结构 程序：涂片 染色 镜检 （1）不染色本的标检查 （2）染色本的标检查1.菌的形察细态结构观（1）不染色本的标检查 不染色本一般用于察菌标观细力动及情运动况（因不染色本直接在普通光微为标学显镜下，无色透明,不能楚看到菌的形清细态与特征结构,主要靠菌的折射率周境细与围环不同行察进观）。有鞭毛的菌在下呈活细镜泼有方向的运动，无鞭毛的菌呈不细则规则布朗运动。（不
2、停地做无的象规则运动现）（2）染色本的标检查 无色透明,直接不易察其形观态结构;染料荷带电;菌的等点在细电pH 2-5之间,通常带负电;常用的染色染法单染法复特殊染色法a.染法单染色通常只用一染色，使菌整简单种剂细个胞染上色。细颜 常用染料:美、晶紫或石酸等蓝结碳复红碱性染料 因看不。所以只便于菌的形为清结构检查细、大小和排列方式等。不能察其特殊态观构造和性定属鉴.b.染色法复 用两种或两种以上的染料染色的方法，称为复染色法或鉴别染色法 革兰氏染色法:最经典的方法 抗酸染色：是检查结核分枝杆菌和麻风杆菌的重要方法。菌的革氏染色法细兰 革氏染色是菌定上一最重要和广泛兰细鉴个用的方法。应 染色步骤
3、:初染-媒染-色脱-染复 理和意论实际义 分为 G+和 G-菌细 了解菌的致病性细 指床用导临药 抗酸染色 抗酸染色原理:分枝杆菌胞壁含脂多细质较,其中主要成分分枝菌酸为,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸合牢固复红结,能抵抗酸性乙醇的色作脱用,因此抗酸菌能保持的色复红颜,到染色目的达。步骤:染色苯酚复红,加促使菌体着色温;3%酸盐乙醇色脱;氏美染吕蓝复,未色菌呈色抗脱细红为酸性菌细,色染呈色的菌非抗酸性脱经复蓝细为细菌。只要用于核杆菌和麻杆菌结风c.特殊染色 芽孢 鞭毛 膜等特殊的察大多需荚结构观特殊染色光染色法荧 2.分离培养 分离培：所有本均作分离培得培养标应养获纯后一步定养进鉴.培后根据菌
4、落的大小、形、色、表面性养态颜、透明度和溶血性做出初步判。状断 3.生化试验：各菌所具有的酶不完全相同，种细对物的分解能力亦不一致，因而其代物有营养质谢产，藉此可不同致病菌行（如道杆菌）别对进鉴别肠 4.血清学试验：含特抗体的免疫血未知异清纯种菌行血，可确定致病菌的和型。常细进清学实验种有凝集、沉淀反等。见试验应 5.物动试验：主要用于分离、定致病菌，定菌鉴测株毒性等。产 常用物：小鼠、豚鼠、家 动兔 接途：皮、皮下、腹腔、肌肉、脉等种径内静 6.物敏感药试验：定本中致病菌物的敏感测标对药程度。指床用及控制感染有重要意。常对导临药义用碟法和管稀法。纸试释 1.抗原检测：免疫技学术 2.核酸检测
5、 （1）核酸交技：分固相和液相。有原杂术为位交、杂检测 D N A的 Southern印迹，检测RN A的 N orthern印迹 （2）PCR技：快速、敏、特性强。术灵异 （3）D N A指：染色体和粒指或分析纹质纹图谱 （4）其成分的：利用液相色法它检测气谱检测菌的代物等。细谢产（二）病原菌成分检测（三）血清学诊断 用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。主要适用于抗原性较强的致病菌和病程较长的感染性疾病。常用有：直接凝集实验、沉淀实验、补体结合实验、中和试验、ELI SA等。自然主免疫：动患病、性感染隐 主免疫动 人工主免
6、疫：接疫苗、毒素等动种类 自然被免疫：通胎、初乳动过盘 被免疫动 人工被免疫：注射抗毒素、丙球蛋动种 白、移因子转 第三节 细菌感染的特异性防治 得性免疫的生方式获产 一、人工主动免疫 念：人工主免疫是人地疫苗或概动为将类毒素接于人体，使机体主生特性免疫力的种动产异程。是一防治微生物感染的措施，主要用于过种预防。常用的人工自免疫制有以下动剂2：种 （一）疫苗（二）毒素类 （一）疫苗 1 死疫苗：用理化方法免疫原性强的菌死制将细杀成的。如百日咳、寒、霍、斑疹寒、伤乱伤流行性膜炎、端螺旋体病等脑钩 2 活疫苗：用度或无毒的病原体制成减,如BCG、鼠疫和炭疽等的疫苗 活疫苗与死疫苗的比较 活疫苗 活
7、疫苗灭 接次 种数1次 2-3次 接量 小 大种较 接反 重种应轻 免疫效果 好较,持维1-5年 差,持维0.5-1年 毒力回升 有可能 不可能 安全性 有潜在危性 安全性好险 疫苗定性 相不定 相定稳对稳对稳 保存 不易保存 易保存 3 基因工程疫苗 有效抗原分的目的基因入适将编码组插体当载,形成重组D N A,再入宿主胞导细,目的基因重随组D N A制而制复复,宿主胞分裂随细而增扩,使目的基因表大量有效抗原成分达,由此制的疫苗基因工程疫苗备称为 如把H BsAg基因入酵母胞中，成功插细表制达并备H BsAg疫苗 4 亚单位疫苗 利用有菌保性免疫原的分制成的疫带细护组苗。如肺炎球菌膜多糖疫苗
8、、端螺旋体外链荚钩膜蛋白疫苗等。5 核酸疫苗或称D N A疫苗、基因疫苗 是能引起保性免疫答的病原体免将编码护应疫原基因片段和粒体直接注射入宿主体以表质载目的免疫原，而生特性体液免疫和胞达进产异细免疫的新型疫苗 6 治疗疫苗 慢性性感染患者可注射病原体疫苗以复发增强其免疫答，示不同程度的效。疫苗应显疗物起同作用，促康，目前一新与药协进复这领域正于究中。处研（二）类毒素（toxoid）毒素是外毒素类经 0.3-0.4%甲理后，醛处失去毒性仍保持抗原性的生物制品加入适量的磷酸或化等制成精制的毒素在铝氢氧铝类体吸收慢免疫效果好。内缓较 如白喉毒素、破毒素等类伤风类 二、人工被动免疫二、人工被动免疫
9、人工被免疫：入含有特性抗体免疫动输异血或制好的免疫胞，使机体立即得免清备细获疫力的程，人工被免疫过称动 可用于某些急性染病的急防和治传应预疗，但持短。常用的人工被免疫制有维时间动剂：（一）抗毒素（二）抗菌血清（三）胎丙球蛋白和血丙球蛋白盘种清种 三 其他免疫制剂 目前床常用的有以下几：临种 干素 主要扰为I N F-通生炎症反过产应和活化M 增强机体胞寄生抗染的能力对内 I L-2 能刺激T胞增殖 增强胞免疫功细细能 集落刺激因子LAK胞等细 些胞免疫制在抗菌免疫中用不多。这细剂应主要用于一些病毒性疾病和瘤试肿 人工自动免疫和人工被动免疫的比较 要点 人工主免疫 人工区别动被免疫动 免疫物 抗
10、原 抗体或胞因质细子 接次 种数1-3次 1次 免疫出 现时间慢 2-4周 快 立即 免疫持 月续时间长 数-年 短 数2-3周 主要用途 防 治或急防预疗紧预 四 生物制剂的使用及注意事项（一）接种对象：根据发病的年龄、职业、流行地区确立接种对象（二）接种途径：死疫苗、类毒素接种量大，常用皮下注射；活疫苗接种量小，常用皮肤划痕、皮内注射、口服及喷雾等；丙种球蛋白、动物血清和抗毒素采用肌肉注射 （三）接种剂量、次数及间隔时间 死疫苗接种剂量大，常分 2-3次注射，间隔时间随免疫力建立情况而定，伤寒疫苗产生免疫力快，间隔 7-10天，类毒素吸收较慢，间隔 3-4周。一般需 1-2年后再接种一次 （四）接种反应及预防接种禁忌症 1.一般反应：2.异常反应：3.应用生物制品的禁忌症五、菌感染的治细疗（一）抗菌物药种类 1、抗生素（anti bi oti cs）2、化合成物学药（二）抗菌物作用机制药 1、影胞壁合成响细 2、影胞膜功能响细 3、影蛋白合成响质 4、影核酸代响谢
