1、洁净区间空气消毒效果及周期验证验证文件工艺验证文件名称: 洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证 文件编号: SX/YZ6.4-06版 本 号: 2013版本编制: 日期： 年 月 日审核: 日期： 年 月 日 批准: 日期： 年 月 日天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂TianTai Double-star Medical Machinery Factory1概述1 2验证目的1 3验证围1 4验证方案制定的依据1 5验证人员职责分工16验证仪器设备26.1验证所需仪器设备仪表26.2仪器仪表校验记录确认27验证材料27.1材料的选取27.2材料的用量27.3材料的主要用途27.4材料的确
2、认28验证方法28.1熏蒸消毒方法28.2熏蒸参数38.3熏蒸时间周期38.4生物指示剂试验方法38.5物体表面菌试验方法48.6沉降菌试验方法49验证环境49.1无菌实验室检测环境确认49.2洁净车间环境确认59.3洁净车间的清洁510验证检测 510.1生物指示剂检测 510.2物体表面菌检测 510.3沉降菌检测 510.4 验证标准611验证结果的综合评价 612 再验证周期6附件1 人员资格确认表 附件2 计量器具确认记录附件3 洁净车间空气消毒剂的确认记录附件4 洁净车间空气消毒剂的确认记录附件5 洁净车间熏蒸消毒方法确认记录附件6 消毒试验方法确认记录附件7 检测环境确认报告附件
3、8 生物指示剂检测记录 附件9 洁净车间消毒后物体表面菌检测记录 附件10 洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录 附件11 洁净车间消毒后沉降菌检测记录附件12 洁净车间消毒后30天沉降菌检测记录附件13 验证结果 附件14 验证结果分析及评价附件15 验证结论附件16 验证报告附件17 验证证书天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂编 号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本2013验证方案页 数第1页 共6页1概述 甲醛是常用的消毒剂，其35%的水溶液或乙醇溶液能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒，使其蛋白质、酶类变性。甲醛熏蒸消毒法是洁净厂房消毒灭菌的常用方法
4、，当相对湿度在65%以上、温度在2440时，甲醛的消毒效果最好。每立方米空间用3440%甲醛液10ml，加热熏蒸，密闭一定时间后，通风，置换室空气中的甲醛。2验证目的 为确认熏蒸消毒法能够对洁净室（区）空气进行有效的消毒，选择最安全合理的熏蒸时间和空气消毒周期，制定特制订本验证方案，进行验证。3验证围 适用于本厂洁净室（区）的空气消毒效果及周期的验证。4验证方案制定的依据 GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准YY0033-2000无菌医疗器具生产管理规GBT16294-2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法5验证人员职责分工小组职务岗位职责组长质管科长1.负责验证方案的审批
5、。2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。3.负责验证数据及结果的审核。4.负责验证报告的审批。5.负责发放验证证书。6.负责再验证周期的确认。组员生技科长1.负责洁净厂房的清洁。2.负责熏蒸消毒前物料的转移或密封。3.负责熏蒸消毒的实施。4.负责验证所需仪器。组员办公室1.负责对人员资质的确认。组员专职检验员1.负责验证所需的试剂、试液等的准备。2.负责仪器、仪表、量具等的校正。3.负责取样及样品的检验。4.负责拟订再验证周期。确认结果记录于附录1 人员资格确认记录 天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂编 号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版
6、本2013验证方案页 数第2页 共6页6验证仪器设备6.1验证所需仪器设备仪表温控仪(干燥箱) SX-JQ-007温控仪 (细菌培养箱) SX-JQ-009电子天平 SX-JS-001手提式压力蒸汽灭菌器（压力表） SX-JQ-004尘埃粒子计数器 SX-JS-011温湿度表 SX-JQ-010温湿度表 SX-JQ-012微压表 SX-JQ-0276.2仪器仪表校验记录确认。确认结果记录于附录2计量器具确认记录7验证材料7.1消毒材料的选取熏蒸材料选取：甲醛溶液与高锰酸钾生物指示剂挑战性试验：黑色枯草变种芽孢杆菌7.2材料的用量：甲醛（40%）10毫升立方米、高锰酸钾5克立方米计算用量生物指示
7、剂：注挤吹车间、中转库、组装车间远离风口处各两组。7.3材料的主要用途：甲醛（40%）：对细菌、病毒、霉菌、芽孢有强大的杀灭作用。生物指示剂：验证对耐受菌种的杀灭作用。7.4材料的确认：应对消毒品种的合格供方、产品牌号等进行确认，见附件3洁净车间消毒剂确认记录。8验证方法8.1熏蒸消毒方法1. 根据洁净区待消毒区域的空间容积，计算消毒剂用量并准确称量。2. 关闭洁净室与外界联系的全部门和传递窗，并确认洁净室调配室人员全部撤离，停止空气净化系统运转。天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂编 号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本2013验证方案页 数第3页 共6页3.
8、熏蒸前对检查洁净室关键房间的温湿度，应达到甲醛消毒的最佳条件。4.先将甲醛倒入容器中，后加入高锰酸钾，人立即离开。5.对房间进行熏蒸消毒。启动空调机，使甲醛气体循环约30分钟，关闭空调机，熏蒸试验时间为10小时。6.启动空调机，25%氨水加入组合风柜排风口不锈钢容器中，总用量为12.5L/次，打开送排风系统排风中和12小时。记录见附件4洁净车间熏蒸消毒方法确认记录。8.2熏蒸参数版本验证参数2011版验证2013版再验证熏蒸时间810小时810小时（选取10小时为例）消毒周期30天30天药品计量甲醛（35%-40%）15ml/m高锰酸钾7.5g/m甲醛（35%-40%）15ml/m高锰酸钾7.
9、5g/ m枯草黑色变种芽孢生物指示剂七组（一组阳性对照）温湿度相对湿度在65%以上、温度在2440相对湿度在65%以上、温度在24408.3熏蒸时间与周期：本次再验证选取熏蒸10小时并通风12小时后；下个消毒周期30分钟前的2种情况下进行生物指示剂试验（只做消毒后）、物体表面菌和沉降菌检测，对消毒效果及周期进行再验证。8.4生物指示剂试验方法：在消毒前将枯草黑色变种芽胞生物指示剂放入注挤吹塑车间、中转库、组装车间远离风口各两处。在消毒结束，新风循环12小时后，检验人员将菌片放入培养液中（培养液浸透菌片）。然后置3748小时培养，另取一支未经消毒的指示剂作阳性对照。8.5物体表面菌试验方法：天
10、台 县 双 星 医 疗 器 械 厂编 号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本2013验证方案页 数第4页 共6页在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时后分别对洁净室（区）的各种表面进行取样、培养，检测是否有菌生长。8.5.1取样点：分别包括设备、操作台、墙壁、地面等的开放表面与死角、缝隙处。 8.5.2准备：灭菌的生理盐水、灭菌的1ml刻度吸管、灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、无菌的棉签、试管、酒精灯。8.5.3取样方法：将径为5cm5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10mL
11、灭菌生理盐水的采样管中。8.5.4阴性对照的确认将本次未用完的，稀释液、棉拭子、培养基等分别设阴性对照，按规定方法进行接种并培养。8.6沉降菌试验方法：在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时候将制备好的营养琼脂培养基平皿按洁净室（区）沉降菌日常监测布点图放置，打开培养皿盖，暴露30分钟后，盖好皿盖倒置装入密封装置后转至培养室，将培养皿倒置于恒温培养箱，在3035中培养48小时。8.6.1准备： 灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、酒精灯、恒温培养箱、高压灭菌锅。8.6.2取样方法测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经规定时间，在适宜的生长条件下让其
12、繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度是否符合标准要求。8.7试验方法确认对生物指示剂消毒方法、物体表面菌试验方法、沉降菌试验方法进行确认，见附录5消毒试验方法确认记录9验证环境天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂编 号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本2013验证方案页 数第5页 共6页9.1无菌实验室检测环境确认检查并确认无菌实验室检测环境应符合YY0033-2000标准的相应的洁净要求。见附件6无菌实验室检测环境确认记录。9.2洁净车间环境确认检查并确认洁净车间环境应符合YY0033-20
13、00标准的相应的洁净要求。见附件见附件6无菌实验室检测环境确认记录。9.3洁净车间的清洁熏蒸消毒前，将净化车间物料转移或密封，进行清洁，减少药物对产品的污染，见附件6无菌实验室检测环境确认记录。10验证检测10.1生物指示剂检测：经48小时培养后，若培养液变浑浊，颜色由红色变黄判为阳性。培养液澄清，颜色不变为阴性，继续培养至七天。见附录7生物指示剂检测记录10.2物体表面菌检测：将每个采样管振打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度(取3个稀释度)，分别用灭菌的刻度吸管取1ml将浸出液放于灭菌的培养皿（每个稀释度2个平皿）,并注入20ml的40-45的普通营养琼脂培养基，待凝固后，在30-
14、35下倒置培养24小时,观察结果，取菌落数为30-300的平板计算，求出平均菌落数。平均菌数稀释倍数采样面积（cm2）结果计算： 菌数/ cm2 =见附录8-1洁净车间消毒后物体表面菌检测记录；8-2洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录。10.3沉降菌检测：10.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值。10.3.2平皿进入被测房间前要先灭菌，采样时使用规定为90mm15mm培养皿；由微生物检测员按培养基配制的要求配制营养琼脂培养基，培养基于121湿热灭菌30分钟，冷却天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂编 号SX/YZ
15、6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本2013验证方案页 数第6页 共6页至45后灌注培养皿，培养24h观察是否无菌；检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用,将带培养基的培养皿密封转至监测区域(密封装置应进行消毒)。 10.3.3进入洁净室（区）监测时，采样者必须穿戴与被测洁净区域相应的工作服， 操作人员将制备好的营养琼脂培养基按采样点布点（沉降菌采样点分布图）位置离地0.81.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。10.3.4盖好皿盖倒置装入密封装置后转至培养室，将培养皿倒置于恒温培养箱，在30
16、35中培养48小时，并用3只培养皿作对照。10.3.5用肉眼直接观察平皿计数，若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或下面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 10.3.6结果计算计算平均菌落数 =（M1M2Mn）n，式中 M1：1号培养皿菌落数，M2：2号培养皿菌落数，n： 培养皿数。见附录9-1洁净车间消毒后沉降菌检测记录；9-2洁净车间消毒后30天沉降菌检测记录。10.4 验证标准A生物指示剂培养七天后仍无菌生长为消毒合格。B物体表面细
17、菌总数20cfu/cm2。C沉降菌：百级操作台：沉降菌1个/皿。一万级区域：沉降菌3个/皿。十万级区域：沉降菌10个/皿。三十万级区域：沉降菌15个/皿。见附录10验证结果11验证结果的综合评价 对工位器具清洗消毒效果及周期验证的结果进行分析与综合评价，详见附录12验证结果的分析及评价、验证结论附录13验证报告、附录14验证证书。12 再验证周期12.1当更换消毒剂时应进行再验证。12.2 当沉降菌和物体表面菌超过标准规定要求时应进行再验证。附件1 天台县双星医疗器械厂人员资格确认表 NO.001 验证目的： 确认参加验证的人员具备正确从事验证活动的资格 验证要求：1、至少有两人经培训合格的验
18、证人员。2、参与验证的人员与培训记录或相关证书相符。验证依据：YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规.验证（操作）人员：人员专业：操作人员 检验人员 文件管理 计量器具管理验证项目： 确认记录 1、文件管理 合格 不合格 1、计量器具管理 合格 不合格 2、检验员资质 合格 不合格 验证方法： 1.检查相关文件是否完整。 2.检查相关计量器具是否符合要求。3.检查检测人员的培训记录或证书不合格描述： 无 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 年 月 日审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： 年 月 日附件2： 天台县双星医疗器械厂计量器具确认记录仪器、仪表名称编号检定日期有效
19、期校验结果温控仪(干燥箱)SX-JQ-0072010年11月16日1年合格温控仪 (细菌培养箱)SX-JQ-0092010年11月16日1年合格电子天平SX-JS-0012010年11月16日1年合格手提式压力蒸汽灭菌器（压力表）SX-JQ-0042010年12月13日1年合格尘埃粒子计数器SX-JS-0112010年10月29日1年合格温湿度表SX-JQ-0102010年12月02日1年合格温湿度表SX-JQ-0122010年03月17日1年合格微压表SX-JQ-0272010年11月29日1年合格结果评价确认人： 年 月 日附件3-1： 天台县双星医疗器械厂洁净车间空气消毒剂的确认记录序号
20、确 认 名 称检查结果结 论1消毒剂名称甲醛符合规定2供方富强化工仪器符合规定3牌号和为符合规定4主要成分及含量分析纯符合规定5用途熏蒸、消毒符合规定6使用方法熏蒸符合规定结果评价确认人： 年 月 日附件3-2 天台县双星医疗器械厂洁净车间空气消毒剂的确认记录序号确 认 名 称检查结果结 论1消毒剂名称高锰酸钾符合规定2供方富强化工仪器符合规定4主要成分及含量99.5%符合规定结果评价确认人： 年 月 日附件4 天台县双星医疗器械厂 洁净车间熏蒸消毒方法确认记录熏蒸消毒方法与确认（确认结果打勾或者填写） 1. 根据洁净区待消毒区域的空间容积，计算消毒剂用量并准确称量。确认记录：待消毒空间体积
21、；高锰酸钾重量 ；甲醛溶液体积 ；2.关闭洁净室与外界联系的全部门和传递窗，并确认洁净室调配室人员全部撤离，停止空气净化系统运转。确认记录：门窗关闭 人员撤离 空气净化系统停止运转 2. 熏蒸前对检查洁净室关键房间的温湿度，应达到甲醛消毒的最佳条件。确认记录：温度 ；湿度 。3. 先将甲醛倒入容器中，后加入高锰酸钾，人立即离开。确认记录：操作顺序与方法 4. 对房间进行熏蒸消毒。启动空调机，使甲醛气体循环约30分钟，关闭空调机，熏蒸试验时间为10小时。确认记录：（1）启动空调机，循环气体30分钟 开启时间： （2）关闭空调机，熏蒸10小时 关闭时间： 5. 启动空调机，25%氨水加入组合风柜排
22、风口不锈钢容器中，总用量为12.5L/次，打开送排风系统排风中和12小时。确认记录：（1）启动空调机，排风口不锈钢容器中加25%氨水，用量12.5l/次 （2）打开送排风系统排风中和12小时 开启时间： 确认结果评价：操作人： 年 月 日确认人： 年 月 日附件5 天台县双星医疗器械消毒试验方法确认记录生物指示剂试验方法确认：1.采样方法：在消毒前将枯草黑色变种芽胞生物指示剂放入注挤吹塑车间、中转库、组装车间远离风口各两处，在消毒结束，新风循环12小时后，检验人员将菌片放入培养液中（培养液浸透菌片）。然后置3748小时培养2.阴性对照确认物体表面菌试验方法确认：在达到设定的熏蒸消毒时间（10小
23、时），通风12小时候分别对洁净室（区）的各种表面进行取样、培养，检测是否有菌生长。1取样点：分别包括设备、操作台、墙壁、地面等的开放表面与死角、缝隙处。 2准备：灭菌的生理盐水、灭菌的1ml刻度吸管、灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、无菌的棉签、试管、酒精灯。3取样方法：将径为5cm5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的采样管中。4阴性对照的确认将本次未用完的，稀释液、棉拭子、培养基等分别设阴性对照，按规定方法进行接种并培养。沉降菌试验方法：在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时候将制备
24、好的营养琼脂培养基平皿按洁净室（区）沉降菌日常监测布点图放置，打开培养皿盖，暴露30分钟后，盖好皿盖倒置装入密封装置后转至培养室，将培养皿倒置于恒温培养箱，在3035中培养48小时。1准备： 灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、酒精灯、恒温培养箱、高压灭菌锅。2取样方法：测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经规定时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度是否符合标准要求。方案确认： 方案符合 GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准YY0033-2000无菌医疗器具生产管理规GBT16294-2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法确认人： 年 月 日附件6 天台县双星医疗器械厂检测环境确认报告确认项目检测结果确认结论 室百级操作台洁净车间温度符合 不符合 湿度符合 不符合 压差符合 不符合 沉降菌符合 不符合 换气次数符合 不符合 风速符合 不符合 尘埃粒子符合 不符合 清场记录：熏蒸消毒前，将净化车间物料转移或密封，进行清洁符合 不符合 确认结果评价：确认者：确认日期：检测日期报告日期检验依据GB15980-1995 、YY0033-2000检测区域1.操作步骤：在消毒前将枯草黑色变种芽胞生物
