1、知识回顾知识回顾？再分化再分化？植物细胞杂交植物细胞杂交技术利用什么技术利用什么原理？原理？用什么方法可用什么方法可以诱导植物细以诱导植物细胞融合？胞融合？一、原理：一、原理：细胞膜具有流动性细胞膜具有流动性细胞的全能性细胞的全能性二、诱导方法：二、诱导方法：电刺激、聚乙二醇电刺激、聚乙二醇植物细胞杂交植物细胞杂交技术有什么用技术有什么用途？途？三、用途：三、用途：获得杂种植株获得杂种植株脱分化一、动物细胞融合一、动物细胞融合有些细胞的融合是正常的生命活动。如有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。精子与卵细胞的结合。两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用(一一)动物
2、细胞融合的概念动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。个动物细胞结合形成一个细胞的过程。（二）动物细胞融合的过程（二）动物细胞融合的过程与植物原生质体融合原理相同，方法类似。与植物原生质体融合原理相同，方法类似。杂交细胞杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。多个细胞遗传信息的单核细胞。.原理：原理：1、动物细胞融合的基本原理、动物细胞融合的基本原理是什么？是什么？2、动物细胞融合的诱导、动物细胞融合的诱导方式是什么？与植物细胞方式是什么？与植物细胞融合的诱
3、导方式有什么不融合的诱导方式有什么不同？同？与植物原生质体融合的基本原理相同，与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。即细胞膜的流动性。.诱导方式：诱导方式：物理法：物理法：电激、振动、离心电激、振动、离心电激、振动、离心电激、振动、离心化学法：化学法：聚乙二醇（聚乙二醇（聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒例如：仙台病毒例如：仙台病毒仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性（诱导细胞融合）（诱导细胞融合）细胞细胞A A细胞细胞B杂交细胞杂交细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法
4、灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）(三三)动物细胞融合的应用动物细胞融合的应用1.1.突破有性杂交方法的局限突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为使远缘杂交成为可能。可能。2.2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。新品种培育等的重要手段。鼠鼠鸡、鼠鸡、鼠兔、鼠兔、鼠猴、人猴、人鼠、人鼠、人兔、兔、人人鸡、人鸡、人蛙、蛙、酵母菌酵母菌鸡鸡 、人、人胡萝卜胡
5、萝卜等等3、重要用途：、重要用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体。二、单克隆抗体二、单克隆抗体 什么是抗体？什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。三、单克隆抗体三、单克隆抗体1、抗体是由何种细胞产生的？、抗体是由何种细胞产生的？浆细胞（效应浆细胞（效应B细胞）细胞）2、抗体是如何产生的？、抗体是如何产生的？B B淋巴细胞淋巴细胞抗原抗原增殖分化成浆细胞增殖分化成浆细胞3、一种、一种B淋巴细胞能产生淋巴细胞能产生几种抗体？几种抗体？一种一种（一）获得抗体的传统方法（
6、一）获得抗体的传统方法1 1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。从动物血清中分离出所需的抗体。2 2、缺点：、缺点：产量低，纯度低，产量低，纯度低，特异性差特异性差。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的体内的B B淋巴细胞可以产生多达百万种以上淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个的特异性抗体，但是每一个B B细胞只分泌一细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的必须克隆单一的B B淋巴细胞，形成细胞群淋巴细
7、胞，形成细胞群。1 1、请、请从从以上文字资料中找出以上文字资料中找出单克隆抗体单克隆抗体的概念的概念用用单个单个B B淋巴细胞淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同基因型相同的的细胞群能够分泌一种细胞群能够分泌一种化学性质单一化学性质单一、特异性强特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。思考：思考：1、在体外培养的条件下，一个、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没淋巴细胞有没有可能无限增殖？有可能无限增殖？不可能不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？、我们学过的什么细胞具有这样的能力？癌细胞癌细胞3、有什么办法让
8、、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？淋巴细胞也具有这样的能力？细胞融合细胞融合一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞杂种细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术、实验原理：、实验原理：动物细胞融合动物细胞融合创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量繁殖体，又能大量繁殖柯勒柯勒柯勒柯勒如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？利用利用B B淋巴细胞产生抗体的功能。淋巴细胞产生抗体的功能。利用肿瘤细胞无限
9、增殖的特性。利用肿瘤细胞无限增殖的特性。利用细胞融合的技术将两种细胞融利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有合获得具有B B淋巴细胞和肿瘤细胞淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。特性的杂交瘤细胞。利用利用动物细胞培养动物细胞培养技术大量培养杂技术大量培养杂交瘤细胞。交瘤细胞。应用：应用：动物细胞融合动物细胞融合设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强杂种细胞杂种细胞单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点：单克隆抗体的制备过程
10、单克隆抗体的制备过程3.3.过程：过程：免疫动免疫动物物注射抗原的目的是什么？获得能产生相应抗体的B淋巴细胞（浆细胞）诱导细胞融合常用方法是什么？灭活的仙灭活的仙台病毒台病毒如何进行筛选？具有筛选作用的培养基（HAT培养基）？种？种BB、B瘤瘤、瘤瘤瘤瘤、杂交细胞杂交细胞如何获得大量的单克隆抗体？免疫免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制细胞和骨髓瘤细胞的制备备细胞融细胞融合合杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞的筛选分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备？抗原抗原 效应效应B细胞细胞筛选筛选 筛选筛选 （AA
11、AA型、型、BBBB型）型）AB型杂交瘤细胞型杂交瘤细胞能产生所需抗体的细胞能产生所需抗体的细胞过程：过程：抗原抗原小鼠小鼠效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选多孔培养板单个细胞培养，筛选多孔培养板单个细胞培养，筛选能产生特定抗体的能产生特定抗体的细胞群细胞群体外培养体外培养 体内培养体内培养提取出单克隆抗体提取出单克隆抗体1.1.在制备单克隆抗体的过程中，选用在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？两种细胞？浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞能产生浆细胞能产生单一抗体
12、单一抗体，但不能无限，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖，但不，但不能产生单一抗体。能产生单一抗体。2 2、在这过程中进行了几次筛选？分、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？别在哪个步骤进行筛选？两次筛选。第一次在两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。所需抗体的杂交瘤细胞。四、单克隆抗体的应用四、单克隆抗体的应用 请同学们根据自己所收集请同学们根据自己所收集的资料，谈谈单克隆抗体的应的资料，谈谈单克隆抗
13、体的应用。用。可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于疾病治疗可用于疾病治疗可用于运载药物（作为可用于运载药物（作为运载运载对应疾病的药物的对应疾病的药物的“生生物导弹物导弹“。）。）“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物 细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合细胞融合 浆浆筛选筛选 瘤细胞瘤细胞 杂交杂交细胞培养细胞培养选出能产生选出能产生特定抗体的特定抗体的细胞群继续细胞群继续培养培养体外培养体外培养 体内培养体内培养从培养液或小从培养液或小鼠腹水中取出鼠腹水中取出 单克隆抗体单克隆抗体植物体细胞杂交、植物体细胞杂交、动物细胞融
14、合的比较动物细胞融合的比较四四.细胞工程比较细胞工程比较主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学法物理、化学法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜流动性细胞膜流动性细胞增殖细胞增殖细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目
15、克服远缘杂交不克服远缘杂交不亲和性的障碍亲和性的障碍练习：练习：1 1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是（在动物细胞融合中有特殊性的是（）A A、融合的原理、融合的原理 B B、融合的优点、融合的优点C C、融合的诱导手段、融合的诱导手段 D D、融合的过程、融合的过程练习：练习：2 2、动物细胞融合的目的中最重要的是（、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A A、克服远缘杂交不亲和、克服远缘杂交不亲和 B B、制备单克隆抗体、制备单克隆抗体C C、培育新物种、培育新物种 D D、生产杂种细胞、生产杂种细胞练习：练习：3 3、
16、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A A、经过免疫的、经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B B、不经过免疫的、不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 C C、经过免疫的、经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D D、不经过免疫的、不经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞练习：练习：4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融淋巴细胞自身融 合细胞合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C D 练习：练习：5 5、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A A利用单克隆抗体特异性地对抗癌
