1、实验室指标测定方法实验常规指标测定及实验仪器的使用采后生理实验室1、Vc（mg/100g）采用碘量法测定 12、可滴定酸（%）参考国标(GB/T 1245690)NaOH滴定法 33、可溶性固形物（%） 54、呼吸强度（mgCO2Kg-1FWh-1）的测定 65、乙烯生成速率（LKg-1h-1） 76、氧气生成速率测定 87、叶绿素含量测定 108、果实硬度（kgcm-2） 119、细胞膜相对透性：电导仪法测定 1210、乙醇、乙醛含量测定 1311、丙二醛（MDA）硫代巴比妥酸比色法 1412、多酚氧化酶（PPO） 1513、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定 1614、过氧化物酶活性(POD
2、)测定 1715、多酚类物质 1816、总酚含量的测定 1917、超氧化物歧化酶（SOD）测定 2018、聚半乳糖醛酸梅活性的测定 2219、果胶甲酯酶(PE)活性：酸碱滴定法-朱广廉 2420、过氧化氢酶(CAT)活性的测定 2521、GSH的测定 2622、PAL活性测定 2723、1氨基环丙烷1羧酸含量(ACC content)的测定： 2824、ACC合成酶活性(ACC synthase activity)测定： 2925、ACC氧化酶活性(ACC oxidase activity)的测定: 3026、游离脯氨酸含量的测定-磺基水杨酸法书180页 3127、脂氧合酶活性(OD234/g
3、 FWmin): 3328、乙醇酸氧化酶活性的测定 3429、果胶含量（中国农牧渔业部部标准果胶的测定 NY 82.11-1988） 3630、PE 3831、PG （植物生理学实验手册-144） 3932、纤维素测定方法酸性洗涤法 4033、霉变指数 4134、带菌率 4235、褐变度 4336、病害体积（PVD）： 4437、果皮颜色的测定 4538、显微镜操作 4639、色差计使用方法 471、Vc（mg/100g）采用碘量法测定仪器：三角瓶；容量瓶；滴定管；移液管；脱脂棉；漏斗试剂：1%淀粉：取1g可湿性淀粉，先用10ml蒸馏水调匀，然后加90ml蒸馏水煮沸，边煮边搅拌，使其透明为止。
4、1%草酸：取草酸10g，用蒸馏水定容至1000ml备用。0.01 mol/L碘液的配制与标定：配制：取碘化钾（化学纯）3g，置于1000ml容量瓶中，少量蒸馏水溶解后，加入碘（化学纯）2.5g，振荡溶解后用蒸馏水定容至1000ml。（注：用时需适当稀释，以便于读数。）标定：取抗坏血酸（化学纯）0.02g（20mg）置于250ml容量瓶，用1%草酸溶液定容，吸取10ml抗坏血酸标准液，置于100ml三角瓶中，加1%淀粉1ml，再加1%草酸20ml，用标准碘液滴定至蓝色，同时吸取10ml蒸馏水按同样方法做空白滴定，15s不褪色为止。按公式计算碘液的滴定度：H(mg/ml)=(WP/Q)/(V1V2
5、)式中：H每毫升碘液相当于抗坏血酸的毫克数mg/ml;W抗坏血酸的重量mg;P用来滴定得抗坏血酸得毫升数ml;Q抗坏血酸用草酸定容的毫升数ml；V1滴定时消耗碘液的毫升数ml;V2空白滴定时消耗碘液的毫升数ml。方法：称取匀浆15g，移入100ml容量瓶中，用1%草酸定容至刻度，用脱脂棉过滤。吸取10ml滤液，置于100ml三角瓶中，加1%淀粉1ml，再加1%草酸20ml，用标准碘液滴定至蓝色，15s不褪色为止，记下消耗碘液的毫升数。每个样品重复滴定3次，取其平均值，并做空白实验。X=H(V1V2)F100m式中：X每100g样品中Vc的mg数，mg/100g；H碘液的滴定度，mg/mL；V1
6、滴定时消耗碘液的毫升数mL；V2空白滴定时消耗碘液的毫升数mL；F试液的稀释倍数；m试样质量，g。注明：芦笋试验中：称5g匀浆，用草酸定容到50mL，吸取10mL滤液，加淀粉1mL，20mL草酸。黄瓜(油菜、西芹等)：取匀浆20g,用草酸定容到100mL，吸取30mL滤液，加淀粉指示剂1mL，20mL草酸。樱桃：取15g,用草酸定容到100mL，吸取20mL滤液，加淀粉1mL，20mL草酸。葡萄：枣：2、可滴定酸（%）参考国标(GB/T 1245690)NaOH滴定法试剂：0.1mol/L NaOH溶液：称取NaOH 4g，溶于1000ml煮沸并冷却的蒸馏水（用时适当稀释）1% 酚酞指示剂：称
7、取1g酚酞，溶于100ml 95%的乙醇中仪器：碱式滴定管（25 ml）；容量瓶（250 ml）；移液管（20 ml）；三角瓶（100 ml）；漏斗；纱布组织捣碎机；分析天平操作步骤：称取打成匀浆的均匀样品20g，用漏斗转入250 ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，放置30min(摇动2-3次)，混合均匀后，用六层纱布过滤。吸取20ml滤液与三角瓶中，加酚酞指示剂2滴，用0.005mol/LNaOH溶液滴至粉红色，持续1分钟不褪色，记下NaOH溶液用量。每个样品重复滴定3次，取其平均值。结果处理：含酸量X（%）=VNK(25020)100=83.75VNWW式中：X以苹果酸计的总算百分含量（%）；V
8、滴定时消耗NaOH溶液的毫升数；NNaOH溶液浓度(mol/L)；W样品鲜重（g）；K换算系数，取0.067（以苹果酸计）注意：1、有些果蔬容易榨汁，而其汁液含酸量能代表果蔬含酸量，可以榨汁取定量汁液（10ml）稀释后（加蒸馏水20ml），直接用0.1mol氢氧化钠溶液滴定。2、本实验配制溶液用水及稀释定容用水均为去二氧化碳的蒸馏水3、各种有机酸当量值：苹果酸0.067；柠檬酸0.064；酒石酸0.065。因食品中含有多种有机酸,总酸度测定结果通常以样品中含量最多的那种酸表示。一般分析葡萄及其制品时，用酒石酸表示，其K=0.075；分析柑橘类果实及其制品时，用柠檬酸表示，K=0.064或0.0
9、70(带一分子水)，分析苹果，核果类果实及其制品时，用苹果酸表示，K=0.067，分析乳品，肉类，水产品及其制品时，用乳酸表示，K=0.090，分析酒类，调味品时，用乙酸表示，K=0.060。4、0.1mol/L NaOH标准溶液：称取氢氧化钠(AR)120g于250ml烧杯中，加入蒸馏水100ml，振摇使其溶解，冷却后置于聚乙塑料瓶中，密封，放置数日澄清后，取上清液5.6ml加新煮沸过并已冷却的蒸馏水至1000ml，摇匀。标定：精密称取0.6g(准确至0.0001g)在105110干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾,加50ml新煮沸过的冷蒸馏水,振摇使其溶解,加二滴酚酞指示剂,用配制的NaOH标
10、准溶液滴定至溶液呈微红色30秒不褪.同时做空白实验.计算：c =m1000(V1-V2)204.2式中：c氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度，mol/L；m基准邻苯二甲酸氢钾的质量，g；V1标定时所耗用氢氧化钠标准溶液的体积,，mL；V2空白实验中所耗用氢氧化钠标准溶液的体积，mL;204.2邻苯二甲酸氢钾的摩尔含量，g/mol。5、原理：食品中的有机弱酸在用标准碱液滴定时，被中和生成盐类。用酚酞作指示剂，当滴定至终点（PH=8.2，指示剂显红色）时，根据耗用标准碱液的体积，可计算出样品中总酸含量。注明：芦笋试验中：取10g匀浆，加50mL蒸馏水，滤纸过滤，取20mL滤液，加入2滴酚酞指示剂，用0.0
11、5mol/LnaOH滴定至粉红色。黄瓜(油菜、西芹等)： 樱桃： 取10g匀浆，用蒸馏水定容到100mL的容量瓶，脱脂棉过滤，吸取滤液20mL，加3滴石蕊，每个样品重复3次（NaOH浓度0.05mol/L）葡萄：枣：3、可溶性固形物（%）仪器：洗瓶；大烧杯；脱脂棉；镊子方法：采用pocket refractometer PAL-1测定，每次取4个果，单果重复4次用镊子取汁测定。4、呼吸强度（mgCO2Kg-1FWh-1）的测定方法1：呼吸强度采用GXH-3051型便携式红外线分析测定仪测定；方法2：用气相色谱法测定。取大小一致鸭梨果实9个，分别称重后，分三组置于经空气平衡的8L玻璃真空干燥器中
12、，密闭30min，用10ml注射器从干燥器顶部取出部分气体，再从注射器中取1ml气体，用气相色谱测定，根据制作的CO2标准曲线计算果实呼吸释放出的CO2含量，果实呼吸强度以mL CO2kg-1h-1表示，重复3次。气相色谱（GC7890F，上海天美公司）配置有CO2转化炉、氢火焰检测器( FID)和不锈钢填充柱(Porapak 80-100)，柱长2m，载气N2，进样温度120 oC，柱温60，检测温度360。呼吸强度（ml CO2Kg-1h-1）=测得的CO2含量（玻璃罐体积-果实体积）果实总重量密闭时间5、乙烯生成速率（LKg-1h-1）采用岛津2010型气相色谱仪法测定；每次将5个葡萄果
13、实置于350ml干燥瓶内，密闭4h后取样20ml，用岛津2010气相色谱仪程序升温法测定乙烯含量。采用外标法计算，标样的体积分数为50LL-1色谱柱与条件：Agilent，DB-5（长30m，内径0.25mm，膜厚0.25m）；检测器：FID，温度230；进样口：温度120oC；升温程序：80保持2min，6/min升温至230，保持1min。载气：N2，流速24ml/min；尾吹气：N2，流速30ml/min。尾吹：30ml/min。乙烯的体积分数（LL-1）样品峰面积标样的体积分数标样峰面积乙烯的生成速率（LKg-1h-1）=乙烯的体积分数（玻璃罐体积果实体积）（密封时间样品质量）6、氧气
14、生成速率测定仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴或恒温箱；真空泵。药品：1 50nmol/L 磷酸缓冲液pH7.8：取A液（3.12gNaH2PO42H2O配成100ml）8.5ml，B液（7.17gNa2HPO412H2O配成100ml）91.5ml混合后定容至400ml即可；2 10mmol/L盐酸羟胺：称取6.9mgNH2OHHCL用磷酸缓冲液pH7.8配成100ml(现用现配)；3 17mmolL1对氨基苯磺酸：称取0.2944g对氨基苯磺酸，用30%乙酸微加热溶解后定容成100ml；4 100molL1亚硝酸钠：取6.9mg亚硝酸钠用蒸馏水配制成100ml。(1)NO2标准曲线的制作：
15、取7支试管，按表1加入各试剂用量，加完试剂摇匀，10分钟后测A530，以1号试管溶液调零。以NO2浓度能够为横坐标，A530值为纵坐标绘制标准曲线。见表：试管号1234567亚硝酸钠00.10.20.40.60.81.0磷酸缓冲液21.91.81.61.41.21.0对氨基苯磺酸1111111萘胺1111111NO2浓度（nmol/ml）02-5510152025(2)样品测定：NO2-培育：取试材样1g，放入10ml试管中并加入5ml 10mmolL-1盐酸羟胺，真空渗入后，将试管置于30温箱中温育45分钟，以使样品体内产生的O2-与NH2OHHCL充分反应，生成NO2-。显色测定：样品温育
16、结束后，从样品试管中吸取2ml溶液，与1ml对氨基苯磺酸和1ml-萘胺充分混合，约10分钟完成显色反应，显色后的混合液，如有混浊可在2500g条件下离心10分钟，取上清液测A530。以50mmolL-1磷酸缓冲液2ml PH7.7,对氨基苯磺酸1ml,-萘胺1ml混合后调零。(3)结果计算：测得样品A530值后，在标准曲线上查出相应的NO2浓度，然后进行O2计算。O2-产生速率（O2-nmol/mingFw）=O2-产生量NH2OH育温时间（min）样品重（g）=NO2-24V/amingFw式中：4为反应体系毫升数V：为样品提取液总量（ml）a：为测定用样品提取液量（ml）7、叶绿素含量测定
17、（1） 材料：新鲜（或烘干）的植物叶片（2） 仪器设备：分光光度计；研钵2套；剪刀；玻棒；25ml棕色容量瓶3个；小漏斗3个；直径7cm定量滤纸；吸水纸；擦境纸；滴管；电子顶载天平（1/100g感量）。（3） 试剂：95%乙醇（或80%丙酮）；石英砂；碳酸钙粉 （4） 实验步骤：1）取新鲜植物叶片（或其他绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。2）称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及23ml 95%乙醇（或80%丙酮）研成匀浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白，静置35min。3）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液
18、倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。5）把叶绿体色素提取液倒入比色杯内。以96%乙醇为空白，在波长665nm、649nm和470nm下测定光密度。6）、如用95%乙醇计算公式：Ca = 13.95D665 6.88D649Cb = 24.96D649 7.32D665Cxc=（1000D470 2.05Ca 114.8Cb）/ 245如用80%丙酮计算公式：Ca = 12.21D663 2.81D646Cb =
19、 20.13D646 5.03D663Cxc=（1000D470 3.27Ca 104Cb）/ 229式中：Ca、Cb分别为叶绿素a和b的浓度；CxC为类胡萝卜素的总浓度；D663、D646和D470分别为叶绿体色素提取液在波长663nm、646nm和470nm下的光密度，叶绿素a、b在95%乙醇中最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，类胡萝卜素为470nm。7）求得色素的浓度后再按下式计算组织中各色素的含量（用mg/g鲜重或干重表示）：色素的浓度X提取液体积X稀释倍数叶绿体色素含量=-（mg/g）样品鲜重（或干重）注明：芦笋试验中：称1g匀浆，加20mL95%乙醇，滤纸过滤在波长66
20、5nm,649nm,470nm下测定吸光值。 樱桃： 葡萄：枣：8、果实硬度（kgcm-2）仪器：去皮器方法：采用英国产TA.XT.Plus物性测定仪测定，每次取4个果在胴部去皮测定，单果重复4次取最大力，最后取其平均值；测试深度为10mm，P/2柱头（2mm），测试速度为2 mm/sec。（1） 双击Texture Exponent 32（2） 关闭Not Regosterel（3） Select a user 点OK（4） 进入TEE32界面，进入过程中，将其他所有窗都关闭（5） 点File选择New，双击Graph，最大化该窗口（6） 点TA（7） 将所测物品在载物台上放好（8） 点Qu
21、ick Test Run（9） 点Library选Return to Start SeQ（10） 点Up data project（11） 点File选SAVE9、细胞膜相对透性：电导仪法测定用DDS- A型电导仪 上海雷磁仪器厂生产 测定,采用1cm直径的打孔器在5个果实赤道线上,去皮后即刻切取1mm厚薄片15个,置小烧杯中,加30mL去离子水,立即测其电导率P0,10min后测其电导率P1,然后煮沸5min,冷却至室温,并加水至刻度,测其电导率P2膜相对透性=P1-P0/P2-P0100%膜相对透性测定重复3次,取其平均值.硬果率以每次测定时果肉硬度大于3.0Kgcm-2的果实数目占最初总
22、果实数目的百分比表示.。（1）果皮相对电导率：电导仪法测定仪器：小烧杯；三角瓶；洗瓶；纱布；电炉方法：用DDS- 11A型电导仪测定，取大小一致的果皮 20片（做2个重复），蒸馏水冲洗2次用干净纱布吸干水分置三角瓶中，加30mL蒸馏水，在振荡器上30振荡1h后测其电导率P1，然后倒入烧杯中煮沸10min以杀死植物组织，冷却至室温加水至刻度并在室温下平衡10min，测其电导率P2，重复3次，取其平均值。膜相对电导率=P1-P0/P2-P0P0空白电导率（蒸馏水的电导率）（2）果肉相对电导率：电导仪法测定仪器：小烧杯；三角瓶；洗瓶；纱布；电炉方法：用DDS- 11A型电导仪测定，取大小一致的果肉
23、20片（做2个重复），蒸馏水冲洗2次用干净纱布吸干水分置三角瓶中，加30mL蒸馏水，在振荡器上30振荡1h后测其电导率P1，然后倒入烧杯中煮沸10min以杀死植物组织，冷却至室温加水至刻度并在室温下平衡10min，测其电导率P2，重复3次，取其平均值。膜相对电导率=P1-P0/P2-P0P0空白电导率10、乙醇、乙醛含量测定取20粒葡萄，去皮去核后打浆后，称取20g 匀浆样品，用200ml蒸馏水转入烧瓶中，用电热套加热蒸馏出100ml混合液。气相色谱条件：(岛津2010型)配置FID检测器和毛细管玻璃柱(DB-WAX )。载气N2，流速14ml/min，进样量为1l。柱温100，气化室温度15
24、0 ，检测器温度100。11、丙二醛（MDA）硫代巴比妥酸比色法作者：郝再彬等，植物生理实验哈尔滨工业大学出版社，哈尔滨，2004，9。试剂：0.6%硫代巴比妥酸(TBA):称0.6g硫代巴比妥酸用100ml 10%三氯乙酸溶液定容或用热的蒸馏水溶解后定容(现配现用)。10%三氯乙酸（TCA）：10g TCA用水定容至100ml。方法：称取试样5g，加10ml质量分数为10%三氯乙酸溶液，研磨至匀浆，10000 r/min 下离心20 min；取上清液2ml（对照加3ml 10% TCA溶液），加入2ml 质量分数为0.6%硫代巴比妥酸(TBA) 溶液，混匀后沸水浴上反应30min，迅速冷却后
25、再离心(如澄清可以不离心)。取上清液测定450、532、600nm波长下的吸光度。计算：按下式计算MDA的含量（%）：c111.71A450c26.45(A532A600)0.56A450 式中：c1可溶性糖的浓度，mmolL-1c2MDA浓度， molL-1 A450、A532、A600分别代表450、532和600nm波长下的吸光度值。按下式算出MDA的浓度（molg -1）：MDA质量摩尔浓度（molg -1）cNW-1式中：cMDA的浓度，molL-1；N提取液体积，ml；W植物组织鲜重，g12、多酚氧化酶（PPO）方法一：1)0.05mol/LpH6.5磷酸缓冲液2)0.1mol/L
26、儿茶酚（邻二甲苯）：称取1.101g溶于100ml蒸馏水中酶液提取：5g样品于预冷的研钵中，加入适量0.05mol/L PH6.5的磷酸缓冲液（总用量10ml），冰浴研磨成匀浆，410000g离心20分钟，上清夜即为酶提取液。活性测定：（做两组重复实验）3.9ml 0.05mol/LPH6.5的磷酸缓冲液+1ml 0.1mol/L儿茶酚+2ml酶提取液，以煮过失活的酶液为对照。37水浴保温10分钟，立即在420nm下测定吸光度值, 30秒读一次，记录5min内得值。计算：酶活力=AD0.01t酶的比活力(0.01Ag-1FWmin-1)=AD0.01tW式中：A反应时间内吸光度的变化D稀释倍数
27、即提取的总酶液为反应系统内酶液体积的倍数t反应时间(min)W果肉重(g)方法二：比色法21,22,23酶液提取：取5g果肉，于10ml的0.05mol/l磷酸缓冲液中(pH=6.5)，冰浴研磨，在4下10000r/min进行冷冻离心20min，取上清液进行酶活测定。酶活测定方法：参照Galeazzi（1981）的方法，并加以改进：向试管中加入3.9ml0.05mol/l pH=6.5磷酸缓冲液，加2ml粗酶提取液，对照用煮沸5min的酶液，于37水浴中平衡10min,取出试管向其中1ml 0.1mol/l的儿茶酚，立即计时，记录随后3min 内溶液在420nm处的吸光度变化，每30s读数一次
28、。重复三次。以每分钟变化0.1吸光度值所需酶量为一个酶活单位，用A420nmmin-1g-1FW表示：13、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定参照薛应龙等人的方法进行，略有改进。定期取果5个，去皮去核，剪碎混匀后取1g 果肉于预冷的研钵中，加入0.1克聚乙烯吡咯烷酮（PVP），加入10ml含5mmol/L巯基乙醇的0.05mmol/L的0.05M硼酸缓冲液（pH8.8），冰浴研磨，10000转/分离心20分钟，上清液用于酶活测定。取上清液1mL酶液，加入2ml的0.1M硼酸缓冲液（pH8.8）,0.02M L-苯丙氨酸1mL，混匀后立即用分光光度计测OD290初始值，38水浴30min后测定终止
29、值。重复三次。14、过氧化物酶活性(POD)测定样品提取与PPO同，测定参照蒋跃明152的方法(1997)。反应体系：2.9mL磷酸缓冲液，1mL愈创木酚和2mL酶液，以煮过失活的酶液为对照，加入酶液后，立即于37水浴中保温10min，取出试管向其中1ml2%的H2O2，于470nm波长下比色，30秒读一次，记录5min内得值。重复三次。酶比活力（0.01A/gFWmin）=A0.01wtD15、多酚类物质1）酒石酸铁溶液的配制：取0.1 g FeSO4.7H2O，含有4个结晶水的酒石酸钾钠0.5g，加蒸馏水溶解定容到100ml。2）酶液提取：取20g 果肉，冰浴研磨，假如PH7.8磷酸缓冲液定容至100ml，沸水浴加热10 min，过滤，冷却至室温，滤液为供试液。3）比色测定：5ml供试液，加5ml磷酸缓冲液，加5ml酒石酸铁溶液，充分摇匀后立即测定OD540nm，空白：蒸馏水5ml多酚%(以茶多酚计)=A7.826V11001000V2m式中：V1-供试液总量V2-供试液吸取量m-样品质量16、总酚含量的测定(1)药品：75甲醇
