1、食品微生物实验报告食品微生物实验报告 （1）了解培养基的配置原理和方法，掌握别离培养微生物的有关准备工作。 （2）掌握高压灭菌方法及原理 （1）培养基的制备原理： 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。 从营养角度分析： 营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；?适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力；?一定的氧化复原电位；?适宜的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98100下融化，于45以下凝固，不容易被微生物污染。但屡次反复融化，其凝固性降低。 （2）湿热灭菌原理高压蒸汽灭菌 在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升
2、，使水的沸点不断提高，从而锅内温 度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 实验材料与方法 配制培养基所需器材 实验设备：高压蒸汽灭菌器。 实验器材：500ml三角烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、 称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。 培养基等集中放讲台前高压桶内，送到洗刷室统一高压灭菌条件及本卷须知 高压灭菌条件：121.3，15min。含糖培养基113，15min。 倒平板电炉加热灭菌好的培养基翻开平皿包装倒平板（10块）本卷须知：空气环境无菌（应在
3、酒精灯火焰周围无菌区）。 a.在酒精灯火焰处，倾斜翻开瓶口。 b.瓶口要过火焰。 c.左手掀开平皿小口。 d.倾注满皿底再多一点，约10ml（7cm直径平皿）。 e.推放一边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。 f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4备用。 （1）如何证明培养基灭菌是否彻底? 把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置2530培养一周左右进展检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的构造不合理等原因所致，应根据上述情况进展改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌
4、，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明能彻底灭菌后，以后按同样条件灭菌的那么不必进展检查。 经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的那么不必进展检查。 （2）为什么说消毒与灭菌是微生物学和临床医学必不可少的根本知识?由于病原生物广泛存在于自然界，可通过不同途径和媒介进入人体，引起感染或造成疾病流行。因此，杀灭或去除存在于体外传播媒介上的病原生物，对于切断传播途径、预防和控制其感染具有重要意义。自古以来，人们就利用煮沸、火烧、日晒等方法杀灭或去除微生物，到达预防疾病的目的。实际上，除了在临床医疗实践中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物学实验室、
5、食物保存、饮水净化、药品与生物制品生产等过程中都需要防止微生物的污染。 接种是微生物实验及科学研究中一项根本操作技术。根据实验目的和要求， 选择适宜的接种工具与接种方法，接种工具有接种环、接种针、接种铲、接种钩、吸管、滴管、棉签等。常用接种方法有：斜面接种，液体接种，穿刺接种，平板接种和固体接种。接种的关键是无菌操作。 无菌操作的原那么：在酒精灯火焰旁进展，所有器皿均须严格消毒，培养基应事先做无菌试验， 接种工具使用前后须经火焰烧灼灭菌，棉塞不能乱放，始终夹在手指中。在培养四大类微生物时应注意选择适宜的培养条件。多数细菌为专性需氧菌与兼性需氧菌，少数为厌氧菌。多数食品腐败菌和工业用菌种，以及人
6、和动物病原菌的最适生长温度为37，并且在近中性（PH6.57.5）条件下生长良好。多数放线菌为好氧菌，少数为厌氧菌，最适生长温度为2830，多数适宜在偏碱性环境中生长（PH7.58.5）。 （1）实验材料：实验设备：温箱。 实验器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假丝酵母、新生隐球酵母菌、细黄链霉菌、PDA平板、高盐察氏平板、高氏合成I号平板、塑料筐、20%甘油水溶液、镊子、接种铲、无菌盖玻片、无菌滤纸、无菌载玻片、石棉网、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐等。 （2）实验方法：平板接种：毛霉PDA平板（点植法） 啤酒酵母PDA平板（五区别离划线法）青霉、曲霉PDA平板（连续划线法） 1、取
7、灭菌后小室平皿。 2、取无菌PDA琼脂薄层平板，用镊子夹住盖玻片切割成0.51.0cm2的琼脂块，并将其移至培养小室中的载玻片上，制作过程注意无菌。 3、用接种环取少量霉菌的孢子接种于培养基四周，用无菌镊子 将盖玻片覆盖在琼脂块上，并(转载于:l灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，标记，置2830培养35d 1.取粮食样品20g,放入无菌烧杯，加无菌水洗涤， 反复10次，弃去水后，将粮粒倒于平皿内备用2.镊子取粮食种入PDA琼脂内，每皿可接种5-10粒。 放线菌的接种：取细黄链霉菌划线法接种，在接种的划线处，无 菌操作斜插入盖玻片数张。 1.空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区） 2
8、.在酒精灯火焰处，倾斜翻开瓶口。 3.接种环使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。 4.接种环使用后，先在火焰周围把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。5.金属杆快速通过火焰23次，杀灭外表微生物 1、粮食中产毒真菌的种类及产生毒素？ 青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、细黄链霉菌（放线菌）青霉素、丝生毛霉素、黄曲霉素、根霉素、白念菌素。细黄链菌素 2、常用霉菌培养基有哪些？ 马铃薯蔗糖培养基 豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基察氏培养基 3、霉菌的接种方法有何不同？为什么？ （1）连续划线法（青霉、曲霉） 青霉与曲霉为局限性生长的霉菌。应采用连续划线接种
9、法接种。（2）点植法（根霉、毛霉） 根霉与毛霉生长区域比较大，应采用点植法。（3）小室载玻片培养法（青霉、毛霉、根霉、曲霉） 实验三霉菌的制片与形态观察 实验目的：学习并掌握观察霉菌形态的根本方法； 了解四类常见霉菌的根本形态特征。了解放线菌的根本形态特征。 实验原理：霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为3-10m）,常是细 菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易枯燥，能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉兰具有一定的
10、染色作用，染液的蓝色能增大反差。 （一）菌种：在马铃薯琼脂平板上培养34天的青霉(Penicilliumsp.)、曲霉(Aspergillussp.)、毛霉（Mucorsp.）、根霉； （二）器材及用具：镊子、载玻片、盖玻片、显微镜。 （一）直接制片观察 于干净载玻片上，用镊子取霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝，然后小心地盖上盖玻 片。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜（二）小室培养观察 将载玻片直接放低倍镜下观察，再换高倍镜观察。 观察原那么： 毛霉：用低倍镜观察孢子囊梗、囊轴等。用高倍镜观察孢子囊孢子的形 状、大小。 根霉：菌丝、孢子同毛霉，注意观察有无假根。 曲霉：在高倍镜下
11、观察菌丝有无隔膜，分生孢子着生位置，识别分生孢 子梗、顶囊、小梗和分生孢子。 青霉：在高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生 孢子的形状等。实验结果： 分析与讨论： 青霉和曲霉的形态有哪些异同？ 青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬菜、粮食和皮革等物体上，菌体直立菌丝的顶端长有扫帚状的构造，构造的每一个分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青绿色，进展孢子生殖。 曲霉广泛分布在谷物、空气和土壤中，曲霉直立菌丝的顶端膨大成球状，球状构造的外表放射状地生有成串的孢子，孢子随曲霉种类的不同而呈黄色、橙色或黑色。 从皮肤取材查真菌如何检查？ 1.目的 本方法规定了食品中菌落总数的测定方法。 本
12、方法适合于各类食品中菌落总数的测定。 2.设备和材料 温箱：361。恒温水浴：461。电炉吸管。广口瓶或三角瓶：容量为500ml玻璃珠：直径约5mm。平皿：直径为90mm。试管。酒精灯。试管架。灭菌刀或剪子。灭菌镊子。 3.测定步骤 检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成110的均匀稀释液。 （2）用1mL灭菌吸管吸取110稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成11
13、00的稀释液。 （3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。 （4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基(可放置于461水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照 （6）待琼脂凝固后，翻转平板，置361温箱内培养482h。菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用
14、放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 菌落计数的报告 （1）平板菌落数的选择 选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，那么不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，假设片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界限)，假设仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同的几条链，那么应将每条链作为一个菌落计。 （2）稀释度的选择 应选择平均菌落数在30300之间
15、的稀释度，乘以稀释倍数报告之。 假设有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，那么视两者之比方何来决定。假设其比值小于或等于2，应报告其平均数；假设大于2那么报告其中较小的数字。 假设所有稀释度的平均菌落数均大于300，那么应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 假设所有稀释度的平均菌落数均小于30，那么应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 假设所有稀释度均无菌落生长，那么以小于1乘以最低稀释倍数报告之。 假设所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，那么以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 菌落数的报告 菌落数在10
16、0以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩 4.出现的问题 接种过程操作速度太慢，导致培养基与接种液无法充分混合。平板划线不规律。仪器使用不熟练，配合不够默契。 5.参照国标得出结论部分食品国标 短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。 瓶（桶）装饮用水菌落总数限量是20CFUmL，/总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出，耐热大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出，大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出常温液态奶10cfu/ml。 6.结论： 自来水（或啤酒
17、）的培养基均未培养出菌落，表示自来水（或啤酒）中菌落总数合格。土壤（或污水）的培养基中发现有大量菌落，那么自来水和啤酒中无超标现象，符合卫生标准。 学习金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌涂片制作、枯燥和固定技术。掌握细菌的简单染色和革兰氏染色技术 菌种 大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。 溶液和试剂 草酸铵结晶紫染液，革兰氏碘液，95%乙醇，番红复染液等。仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻片夹子，滤纸，滴管和无菌生理盐水等。 1、细菌涂片制作 （1）涂片。用接种环从试管培养
18、液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层即可，或先滴一滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面挑出少许 （2）枯燥。涂片后自然枯燥，也可在酒精灯上略加热，使之迅速枯燥。 （3）固定。固定的方法主要取决于勇什么染色方法，常用的有火焰固定法和化学固定法，火焰固定法的主要操作要领是：手持载玻片一端，标本面向上，在灯的火焰外侧迅速来回移动34次，约34s. 2、革兰氏染色法 涂片枯燥草酸铵结晶紫（60s）水洗革兰氏碘液媒染（60s）95%酒精脱色（30s）水洗番红（2min）水洗枯燥镜检。 脱色是革兰氏染色关键的一步，可直接用95%酒精冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色为止。然后，应立即用水冲洗，以防止脱色时间过长而影响最终染色结果。另外，挑菌量、固定温度、染色时间也是影响结果的重要因素，只有通过反复实践，才能获得满意的结果。
