1、综合化学实验综合化学实验实验报告实验名称： 侧柏叶中黄酮的提取及其在功能化 妆品中的应用 姓 名： 专 业： 同 组 人： 指导教师： 指导教师： 开题时间： 2014年 11月 11日 河北科技师范学院理化学院综合化学实验室目 录摘要.21 绪论.32 实验原理.33 实验仪器和药品.4 3.1 实验仪器.4 3.2 实验药品.44 实验过程.4 4.1 侧柏叶中黄酮的提取及定性分析.4 4.2 侧柏黄酮洗发香波的配制及性能定.6 4.3 侧柏黄酮雪花膏的配制及性能测定.75 结果与讨论.7 5.1 侧柏叶中黄酮的含量.7 5.2 侧柏叶黄酮提取物的紫外可见分析.8 5.3 洗发香波和雪花膏
2、的性能测定.96 结论.10参考文献.11摘 要黄酮类化合物是植物经光合作用产生的一大类化合物。存在形式主要有两种：游离的苷元以及与糖等结合的苷。本实验采用超声波法、索氏提取法等方法从侧柏叶中提取黄酮类化合物。并根据不同溶度的黄铜提取液对应不同的吸光度，作出标准曲线，得出吸光度关于浓度的方程，然后再测得侧柏提取液的吸光度，根据方程计算黄酮类化合物的含量。黄酮类化合物主要用于激活毛母细胞和促进血液循环，使毛发生长能力衰退的毛囊复活和促进血液循环后补充营养成分而发挥出养发、生发的作用。去屑止痒的机理在于抑制头发表皮细胞蜕化的速度，延迟脱落，减少脂溢性皮肤病的产生。同时它还有很好的美白效果。因此，广
3、泛应用于洗发香波和雪花膏的制备中。关键词：侧柏；黄酮类化合物；洗发香波；雪花膏1 绪论侧柏系柏科侧柏属常绿乔木，别名扁柏、香柏、片柏、片松。喜生于湿润肥沃的山坡1，分布于全国大部分地区。现代医学研究证明，侧柏叶对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、宋内氏痢疾杆菌有明显的抑制作用，能缩短出血和凝血时间，对肺炎、痢疾、高血压等多种疾病有一定的疗效。侧柏叶的疗效作用主要是通过存在其中的黄酮类物质起作用的。黄酮类化合物是一类具有2-苯基色原酮结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以
4、游离态（苷元）的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用。最初，这类物质的粗制品仅作为染料应用，20世纪20年代，国外把槲皮素、芦丁用于临床后，才引起人们的关注。60年代末，人们发现黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和镇痛等作用。到70年代，又发现它们有抗氧化、抗衰老、免疫调节和抗肿瘤等作用。黄酮还具有明显的美白功效，其美白功效的药理作用主要在于抑制酪氨酸酶的活性，从而抑制黑色素的合成。侧柏叶总黄酮作为美容护肤化妆品的添加剂，具有药性稳定，药力持久，对皮肤作用温和、刺激性小、安全性高、疗效显著等特点。将其制成水包油
5、型的乳化产品，安全性好，使肌肤自然、美白亮泽2。且成本低廉，原料易得，无副作用，在国际化妆品界中具有广阔的市场前景。在雪花膏中加入侧柏叶提取液组分，与表面活性剂等配制成美白雪花膏，是一种兼具美白、保湿功效和调理性能的天然植物功能性雪花膏。同时，黄酮类化合物主要用于激活毛母细胞和促进血液循环，使毛发生长能力衰退的毛囊复活和促进血液循环后补充营养成分而发挥出养发、生发的作用3。广泛用于洗发香波的生产中。2 实验原理黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末。苷元难溶或不溶于水，易溶甲醇、乙醇等有机溶剂。黄酮、黄酮醇等平面性强的分子，难溶于水，二氢黄酮及二氢黄酮醇等非平面分子溶解度稍
6、大。花青素以离子形式存在，水溶度较大。黄酮成苷后，黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中；难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。植物有效成分种类多，结构复杂，溶解性能差异较大。如侧柏叶中含有能在水和乙醇中有一定溶解性的黄酮类、鞣质类、酯溶性的挥发油等。根据主要有效成分总黄酮与提取溶剂的溶解度参数相似相溶原理4，本文选用1:1乙醇-水混合溶剂提取，增加总黄酮在溶剂中的溶解度，以达到提高有效成分提取率的目的5。3 实验仪器和药品3.1 实验仪器752N紫外可见分光光度计 722S可见分光光度计 数显恒温水浴锅KQ300VDE型双频数控超声波清洗器 DZTW调温电热套 索氏提取器3.2 实验药品乙
7、二胺四乙酸二钠(EDTA) 苯甲酸钠 柠檬酸 香精 色素 饱和氯化钠 氢氧化钾 氢氧化钠 硬脂酸 单甘酯 十八醇(十六醇) 液体石蜡 三氯化铝 侧柏叶 乙醇 蒸馏水 脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES) 脂肪酸二乙醇酰胺(6501、尼纳尔) 十二烷基硫酸钠(K12) 珠光剂 甘油 羊毛脂 4 实验过程4.1 侧柏叶中黄酮的提取及定性分析4.1.1 采样将侧柏叶洗净自然阴干后于60 恒温烘干4 h，粉碎后过筛（40目）。4.1.2 提取(1)超声波法提取侧柏叶中黄酮类化合物称取5 g左右的样品，按照110的料液比加入50%乙醇水溶液浸泡0.5 h，然后在70 下超声波40 Hz时超声处理40 min
8、。趁热过滤，过滤后将滤渣再按上述方法超声处理一次，过滤，合并滤液定容250 ml，测定含量。(2)索氏提取侧柏叶中黄酮类化合物以乙醇作提取剂，称取5.0 g样品，加50%的乙醇约100 mL，浸提时间2 h。250 ml容量瓶定容，测定含量。(3) 水浴恒温震荡法：称取5.0 g样品，浸泡0.5 h后，在70 和超声频率40 kHz下处理40 min后，趁热过滤，过滤后将滤渣再按上述方法处理一次，过滤，合并滤液，定容250 ml，得到总黄酮。4.1.3 黄酮含量测定芦丁质量：25 mg，50%乙醇于50ml容量瓶中定容，浓度C=0.5 mg/ml。a 标准曲线的绘制：精密吸取芦丁对照品液 (0
9、.5 mg/ml)1、2、3、4、5 ml分别用50%乙醇稀释至10 ml，准确加入1%三氯化铝溶液1 ml，于50 ml容量瓶定容，摇匀，同法制成空白对照，在415 nm处测定吸度.以吸收度值为纵坐标，以浓度值为横坐标绘制标曲线。数据如下：V芦丁1ml2ml3ml4mlC（mg/ml）0.010.020.030.04A0.2010.3760.5600.740图1 吸光度随浓度的变化曲线A =18.32C +9.210-3， r = 0.99956式中: A为吸光度， C为芦丁的浓度(mg/mL)。b 含量测定：精密吸取上层清液5 ml，准确加入1%三氯化铝溶液1 ml，于50 ml容量瓶定容
10、，摇匀，同法制成空白对照，在415 nm处测定吸度A，计算含量。总黄酮含量% = C稀释倍数V/W 100%公式中: V 处理前溶液的体积(mL) C 芦丁溶液的浓度(mg/mL) W 侧柏叶质量(mg)4.1.3 定性分析（1）将侧柏黄酮提取液稀释20倍，定溶于50ml容量瓶中。采用紫外可见分光光度计，测定不同波长的吸光度，并绘制吸收曲线。按上述步骤加入1ml显色剂后，再次测定。（2）显色反应：盐酸- 镁粉反应是鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。吸取定容好的提取液1ml于试管中，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，12min即可显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至紫红色
11、，少数显紫至蓝色。以氢氧化钠为显色试剂作定性分析溶液呈棕黄色，因此可以确定侧柏叶中黄酮类化合物主要为黄酮醇类。4.2 侧柏黄酮洗发香波的配制及性能测定 表1 洗发香波的配方配方作用用量脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)乳化、去污10g脂肪酸二乙醇酰胺(6501、尼纳尔)泡沫稳定剂，稳泡、增效、除油垢4g十二烷基硫酸钠（K12）发泡、润湿、去污3g珠光剂光亮1g甘油保湿剂2g羊毛脂营养1g乙二胺四乙酸二钠EDTA螯合剂，与金属离子螯合使硬水软化适量苯甲酸钠防腐剂适量侧柏提取液激活毛母细胞和促进血液循环10ml柠檬酸调节pH适量饱和氯化钠调黏度适量去离子水溶剂60g香精调香适量将一定量的脂肪醇聚氧乙
12、烯醚硫酸钠(AES)、脂肪酸二乙醇酰胺(6501、尼纳尔)、十二烷基硫酸钠（K12）加入250 ml烧杯中，并加入30ml去离子水充分混合，再加入60 ml去离子水，水浴加热80 ，缓慢加入珠光剂，溶解，灭菌40min。降温至60 ，加入甘油、羊毛脂、EDTA、苯甲酸钠，溶解。然后缓慢降温至室温，加入柠檬酸、香精、色素。搅匀，调pH为6.0左右。最后加氯化钠调节黏度。静置得产品。 检验产品的起泡性、去污力和黏度。4.3 侧柏黄酮雪花膏的配制及性能测定 表2 雪花膏配方配方作用质量分数/%硬脂酸乳化剂，使其变成洁白的膏体15单硬脂酸甘油酯使膏体细腻润滑1.0液体石蜡（白油）固化作用10十六醇或十
13、八醇保湿作用1.0甘油保护柔软皮肤、防止水分挥发、防止干燥10.0氢氧化钠调黏度0.05氢氧化钾调硬度0.6苯甲酸钠防腐剂适量香精芳香剂适量蒸馏水溶剂加至100 ml按配方中的量分别称量硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白油、十六醇和丙三醇于250 mL烧杯中，水、碱和侧柏叶黄酮提取液20 ml称量后加入另一250 mL烧杯中。分别加热至90 ，使物料熔化、溶解均匀。装水的烧杯在90 下保持20 min灭菌。然后在搅拌下将水慢慢加入到油相中，当温度降至50 时，加人防腐剂。温度降至40 加入香精，搅拌均匀。静置、冷却至室温。调整膏体的pH，使其在要求的范围内。得到柔软的乳白色膏体，即成品。5 结果与讨论
14、5.1 侧柏叶中黄酮的含量在415nm处测得侧柏黄酮提取液的吸光度A=0.665根据公式：A =18.32C +9.210-3 得C=0.0358 mg/mL。总黄酮含量% = C稀释倍数V/W 100% = 0.035810250/5000 100 %=1.79%5.2 侧柏叶黄酮提取物的紫外可见分析将侧柏叶黄酮提取液，稀释20倍，于50 ml容量瓶中定容，然后采用752N紫外可见分光光度计测定不同波长下溶液的吸光度。根据以下数据绘制吸光度随波长变化的曲线，见图2：表3 侧柏叶黄酮提取液，稀释20倍，50ml容量瓶定容。测A波长吸光度波长吸光度波长吸光度2501.7723400.900430
15、0.1292601.7593500.9154400.1002701.6953601.1234500.0792801.4243700.8494600.0692901.2133800.7244700.0523001.0403900.5564800.0493100.9804000.3804900.0493200.9054100.2645000.040330根据以上数据绘制吸光度随波长变化的曲线，见图2：0.9204200.177图2 侧柏黄酮提取液的紫外可见吸收曲线（不加显色剂）由上图可知侧柏叶黄酮提取物在270nm、360nm处各有一吸收峰。初步推测侧柏叶中黄酮类化合物主要为黄酮、黄酮醇类(220
16、280 nm，300400 nm) 将侧柏叶黄酮提取液，稀释20倍，加入1 ml显色剂，50 ml容量瓶定容，然后采用752N紫外可见分光光度计测定不同波长下溶液的吸光度。表如下：表4 侧柏叶黄酮提取液，稀释20倍，加显色剂AlCl31ml，50ml容量瓶定容。测A波长吸光度波长吸光度波长吸光度2501.5203400.7754300.6662601.7353500.7504400.5552701.9103600.7224500.4232801.7693700.7084600.2872901.3003800.6804700.1943001.0663900.7224800.1353100.906
17、4000.7694900.0933200.8104100.7855000.0763300.8624200.756根据以上数据绘制吸光度随波长变化的曲线如下，见图3：图3 侧柏黄酮提取液的紫外可见吸收曲线（加显色剂） 图3所示可以看出，加入显色剂后，270 nm处峰没有变化，360 nm左右的峰(桂皮酰峰带)红移至415 nm处。5.3 洗发香波和雪花膏的性能测定侧柏叶总黄酮功能性洗发香波具有很好的去屑防脱功效，综合性能较好。侧柏叶总黄酮提取液与香波中其他组分有很好的相容性，对香波的稳定性、泡沫高度、光泽和气味等影响不大；pH值和黏度稍有上升；洗发香波的颜色变化明显；且该中草药功能性香波无副作用
18、。该侧柏叶黄酮功能性雪花膏对光照较为稳定；耐热、耐寒效果良好；侧柏黄酮对雪花膏的光泽、气味、颜色、粘度、pH值影响不大，故所研制的功能性雪花膏稳定性较好；且侧柏黄酮雪花膏不含汞、铅、砷重金属元素，无副作用，是一种较好的天然植物功能性雪花膏。6 结论侧柏系柏科植物，其中的黄酮类化合物具有凉血止血、生发止咳等功效，可以治疗各种出血症、风湿痹病、高血压及肺热咳嗽等疾病，还可外用治疗烧伤、烫伤6。因侧柏叶廉价易得，其中的黄酮含量较多(17%左右)，故侧柏叶中黄酮类化合物的提取对于食品科学和医学的发展有很重要的影响。侧柏叶总黄酮作为美容护肤化妆品的添加剂，具有药性稳定，药力持久，对皮肤作用温和、刺激性小
19、、安全性高、疗效显著等特点7,8。制成水包油型的乳化产品，其安全性好，使肌肤自然、美白亮泽。具备了天然化、营养化、疗效化等国际化妆品的优良特点，发展前景广阔。参考文献1程秋月，郭菁，张成义.黄酮类化合物药理作用研究J.北华大学学报.2011，12(2):180-183.2赵会芝，赵莹，张建平等.侧柏叶黄酮雪花膏配方研制及美白功效评价J.安徽农业科学，2010，3(19):10262-10263.3赵永光，赵莹，张建平等.侧柏叶总黄酮在功能性洗发香波中的应用研究J.安徽农业科学，2008，36(24):10295-10296.4Hildebrand J H，Scott R L. Reg ular So lutions. Englewood eliffs: Dr entica-Hall，1962.5王康，张效林，薛伟明等.侧柏叶有效成分提取过程研究J.化学工程，1998，26(3):21-25.6赵永光，常立新，周永国等.超声波法提取侧柏叶片中黄酮类化合物的研究J.河北农业大学学报， 2005(2):58-60.7赵景联.功能性化妆品药物研究及其应用J.陕西化工，1998，2(27):3-6.8蔺国敬.多功能香波的添加剂J.日用化学工业，1995(3): 52-53.
