1、实验室常规试剂配制实验室常用试剂、缓冲液的配制1 TriCl(pH.4， 7。， 8。0)组份浓度 1MTis-HCl配制量 L配制方法 1。 称量1.1 g i置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解.3。 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 将溶液定容至1 L.5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定p值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1,溶液的H值大约降低.3个单位。5M TrisHl(H8）组份浓度 .5 MTsHCl配制量 配制方法 1。 称量181。7 r置于1 L烧杯中。2。加入约00l的去离子水,充
2、分搅拌溶解。3。 用浓盐酸调节pH值至8。8。将溶液定容至 L。. 高温高压灭菌后,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为is溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1，溶液的p值大约降低。0个单位。1TEuffr(pH。4,7。6, 。0)组份浓度 100 mM TrisCl， 10 mM ED配制量 L配制方法 1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。2. 向烧杯中加入约800 l的去离子水,均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。. 室温保存。3 醋酸钠 （p5。2）组份浓度配制量配制方法PS Buff组份浓度 17mM aC, 2.7 mM Cl, 10
3、m Na2HPO4, 2 mM K24配制量 1 L配制方法 1。 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 2.向烧杯中加入约80 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3。 滴加浓盐酸将pH值调节至7。4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L.4。 高温高压灭菌后,室温保存注意:上述S Bffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM Mgl。10 M 醋酸铵组份浓度 0 醋酸铵配制量 100 ml配制方法 1。 称量7.1 g醋酸铵置于200 m烧杯中，加入约0ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至0 l。. 使用0. m滤膜过滤除菌。.密封瓶口于室温保存。注
4、意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。ris-Hl平衡苯酚配制方法 1。使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等.因此,苯酚的质量对DNA、A的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验.2。 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
5、3。 苯酚平衡:因为在酸性H条件下DA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7。8以上，苯酚平衡操作方法如下: 液化苯酚应贮存于-20,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在8水浴中使苯酚充分融解加入羟基喹啉（8Qunoliol）至终浓度.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。 加入等体积的1 riHl（p.)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤。加入等体积的0。1M TrisHC(8。)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使
6、其充分分层后,除去上层水相。重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。使用pH试纸确认有机相的p值大于7.8。将苯酚置于棕色玻璃瓶中避光保存.苯酚/氯仿/异戊醇(25 ： 4： )1。 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚氯仿异戊醇（25 ：24 :1）。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2。 配制方法:将rsHl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（4 ：1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。10 (W/V)SDS N aH组份浓度 2 N aH配制量 100 ml配制方法 1 量取80 ml去离子水置于10200 l塑料烧杯中（NaOH溶解
7、过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。2。 称取 NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。 待OH完全溶解后,用去离子水将溶液定容至100 ml。4。 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存.2。5 N Hl组份浓度 2。 HCl配制量 100ml配制方法 1。 在78.4 l的去离子水中加入21。6 m的浓盐酸(1。6 N），均匀混合。2。 室温保存5 M Na组份浓度 MNaCl配制量 1 L配制方法 1. 称取292 gaCl置于1L烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2。 加去离子水将溶液定容至1 L后,适量分成小份.3.高温高压灭菌后,4保存。20%(W/) Gluco
8、s组份浓度 2% (W/V) Glucose配制量 10 ml配制方法1称取20g Glucose置于1000 ml烧杯中,加入约8m的去离子水后,搅拌溶解。. 加去离子水将溶液定容至1 ml。3。 高温高压灭菌后,保存。Solution I(质粒提取用)组份浓度 25 mMTis-C（pH8。0),10 m EDTA， 50 lse配制量 1 L配制方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中 2。 高温高压灭菌后，4保存。 使用前每l的Soltion I中加入ml的Nae A（20m/l）。Solution I (质粒提取用)组份浓度 配制量 配制方法 SolutionII (质粒提取用)组份
9、浓度 3 M KAc, 5 M H3C配制量 500 ml配制方法 1。 称量下列试剂,置于500 m烧杯中。 2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至0 ml。 高温高压灭菌后,4保存。0。5 M EDT （H.0)组份浓度 0.5M DTA配制量 1配制方法 。 称取18.1 Na2EDTA2,置于 L烧杯中.。 加入约80 l的去离子水,充分搅拌。3 用aO调节pH值至8.0(约20 g NaOH)注意：H值至。0时,EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。6. 室温保存.1M DT组份浓度 1 M T配制量 2
10、0 ml配制方法 1。 称取。0 g DTT,加入到50 ml塑料离心管内。2. 加2 l的0。1M NaO（p5。2),溶解后使用0.22mm滤膜过滤除菌.3. 适量分成小份后,2保存1 mM ATP组份浓度 10 m ATP配制量 20 l配制方法 1。称取12mg Na2AT3H2,加入到50 l塑料离心管内。2。 加20 l的2mTisCl（p8.0),搅拌溶解。 适量分成小份后，2保存。组份浓度 10 mM配制量 2m配制方法 1. 称取121 m Na2ATP3H2O，加入到0 ml塑料离心管内。2. 加2 ml的25 mM TrisC(pH8。0)，搅拌溶解. 适量分成小份后,2
11、0保存。蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30 (/V) Acylamide组份浓度 30%（/)Acrylmide配制量 配制方法 1。 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。 2。 向烧杯中加入约600 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 加去离子水将溶液定容至1 ，用0.4 m滤膜滤去杂质。4 于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。40% (/V) Acrlmie组份浓度 0%（W/)Aryamide配制量 1 L配制方法 1。称量下列试剂,置于1 L烧杯中. 2。
12、 向烧杯中加入约0的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1 L,用0。45 mm滤膜滤去杂质。 于棕色瓶中4保存.注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。 (W/V） 过硫酸铵组份浓度 配制量 配制方法 5Tris-lyine fer(SDSPAG电泳缓冲液)组份浓度 。125 M Tr, 1。25 M Glyine, 。5%（W/V）SDS配制量 1 L配制方法 。 称量下列试剂,置于1 L烧杯中. 2. 加入约00 ml的去离子水，搅拌溶解。3。 加去离子水将溶液定
13、容至1 L后，室温保存。5SDSPAGE Loadiguffer组份浓度 配制量 5 ml配制方法 1.量取下列试剂,置于10 ml塑料离心管中。 2 加去离子水溶解后定容至 ml。3.小份（50l/份)分装后，于室温保存。4。 使用前将25ml的ME加到每小份中。 加入2ME的LodngBufe可在室温下保存一个月左右.考马斯亮蓝R-2染液组份浓度 0。1（W/V)考马斯亮蓝R25， 25(VV) 异丙醇， 10%(VV) 冰醋酸配制量 1L配制方法 1. 称取 g考马斯亮蓝R-25,置于 烧杯中。2. 量取2m的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。3。 加入10 m的冰醋酸,搅拌均匀。4 加入
14、65ml的去离子水,搅拌均匀。5. 用滤纸除去颗粒物质后,室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度 10%（V/）醋酸, 5（V/V)乙醇配制量 1 配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中. 。 充分混合后使用凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用)组份浓度 50（/V)甲醇， 10%（V/）醋酸配制量 L配制方法 . 量取下列溶液,置于1 L烧杯中 2.均匀混合后室温保存.凝胶处理液(SSAE银氨染色用）组份浓度 配制量 配制方法凝胶染色液（SDSE银氨染色用）组份浓度 0.（W/V）AgNO3， 1%（V/V）浓3H2O, 0。04%（/V）O配制量 10 ml配制方法 .量取下列试
15、剂,加入10200 l的试剂瓶中。 2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状,此时应补加浓氨水,直至透明。3. 本染色液应现用现配，不宜保存.显影液(SDS-AE银氨染色用)组份浓度 0。005%(W/）柠檬酸, 。0（/V）甲醛配制量 1 配制方法 。 称量下列试剂,置于1L试剂瓶中. 加入 L去离子水后,摇动混合溶解。室温保存。核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法0 Bufer(p8.5）组份浓度 2 Trs-醋酸， 0mM DTA配制量 1 L配制方法 . 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。 2。 向烧杯中加入约800 l的去离子水,充分搅拌溶解。3 加入571 m
16、l的醋酸,充分搅拌.4。加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。1TE Buffr （pH8。3）组份浓度 配制量 配制方法0MOPS fr组份浓度 200mM MS, mM Oc， 1 mM EDTA配制量 1L配制方法。 称量1。8 MOPS,置于1 L烧杯中。2. 加约0ml DEC处理水,搅拌溶解.3。 使用N NaOH调节H值至7。4. 再向溶液中加入下列试剂。5. 用DPC处理水将溶液定容至1。6用0。45 um滤膜过滤除去杂质。.室温避光保存。注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用,但变黑时不要使用。溴乙锭（10mg/l)组份浓度 0 mgml溴乙锭配制量 10 l配制
17、方法1。 称量1 溴乙锭,加入到100ml容器中.2 加入去离子水100 m，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。3 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存.4溴乙锭的工作浓度为0.5 mg/ml注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。groe凝胶1。 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5TE或1AE）.2。 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉,加入适当的锥形瓶中。 加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。4。 在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜,并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热
18、手套,小心摇动锥形瓶,使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化,否则,会造成电泳图像模糊不清.5. 使溶液冷却至0左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液（终浓度0mg/ml），并充分混匀。注:溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套.6。 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3 5 mm之间。7.在室温下使胶凝固（大约3分钟 1小时），然后放置于电泳槽中进行电泳。注
19、:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4下保存,一般可保存25天。琼脂糖凝胶浓度与线形N的最佳分辨范围Loadig uffer(DNA电泳用）组份浓度 配制量 配制方法 1Loading uffe (RNA电泳用)组份浓度 配制量 10ml配制方法 1。 称量下列试剂，置于1 ml离心管中。 .向离心管中加入约4 ml的EPC处理水后,充分搅拌溶解。3 加入5 ml的甘油（Glycerol)后,充分混匀。4. 用DEPC处理水定容至10 ml后,室温保存.核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法2SSC 组份浓度 3。0MNaCl， 0。3 M柠檬酸钠配制量 L配制方法 1 称量下列
20、试剂,置于1 L烧杯中。 向烧杯中加入约0 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3。 滴加1N HCl，调节pH值至7。后，加去离子水将溶液定容至1 L.。 高温高压灭菌后，室温保存2SSPE uffer组份浓度 3。0 M NaCl, 0.2 NaH2PO4, 0。0 M EDT配制量 1 L配制方法 。 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。2。 向烧杯中加入约0 ml的去离子水，充分搅拌溶解.3。 加aOH调节H值至。（约6。5 l的1 NaO)。4。加去离子水将溶液定容至15。 高温高压灭菌后,室温保存。50Denart溶液组份浓度 配制量 50ml配制方法 1.称量下列试剂，置于50 m烧杯中。
21、2。 加去离子水约00 ml，充分搅拌溶解3. 加去离子水将溶液定容至500 ml.。 用0。4 mm滤膜过滤后，分装成每份5 .5 20保存。1.5磷酸盐Buffer组份浓度 0.5 MNaO4配制量 1L配制方法 1 称量134g a2HPO4H2置于 L烧杯中。.加入约800l的去离子水充分搅拌溶解。. 加入85%的HPO4（浓磷酸)调节溶液值至7.2.4。加去离子水定容至1 L. 高温高压灭菌后，室温保存。组份浓度 10 g/mlSalmon DNA配制量 约10 ml配制方法 . 称取鲑鱼精DNA 2 g置于50 ml烧杯中，加入约200 ml的 Bufer。2用磁力搅拌器室温搅拌小
22、时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl,使其终浓度为.1 M.3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4 回收水相溶液后,使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次,以切断DNA。5。 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。6。离心回收DN后，溶解于00的去离子水中,测定溶液的O2值。7. 计算溶液的DNA浓度后,稀释N溶液至10m/m。8. 煮沸10分钟后，分装成小份（1m/份）.-20保存。9。 使用前在沸水浴中加热5分钟后,迅速冰浴冷却。组份浓度 配制量 配制方法 组份浓度 配制量 约100ml配制方法 1.称量下列试剂,置于200l烧杯中。组份浓度 配制量 10 l配制方法 1.称量下列试
23、剂，置于200 m烧杯中. 充分混匀后，使用0。45um滤膜滤去杂质后使用。组份浓度 39 mM Gycie, mM Trs,0。037(W/)SD， 2%（V/V） 甲醇配制量 1 L配制方法 。 称量下列试剂,置于1 烧杯中。2。 向烧杯中加入约60ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至00 m后,加入00 m的甲醇。 室温保存。组份浓度 20m TiHC,150 mM aCl, 05%(V/）Te 20配制量 1 L配制方法。 称量下列试剂，置于1 烧杯中2.向烧杯中加入约800 m的去离子水,充分搅拌溶解.3 加入0。 ml Teen 20后充分混匀。4。 加去离子水
24、将溶液定容至1L后，4保存.组份浓度 5（W/V)脱脂奶粉/TT Bufer配制量 10 ml配制方法1. 称量5 g脱脂奶粉加入到10 m的BT Bufer中,充分搅拌溶解。2.4保存待用(本封闭液应该现配现用).实验室常用培养基的配制方法Ampicillin （10 m/ml）组份浓度 10 m/ml Apicillin配制量 0 ml配制方法 1。 称量5g Ampicilin置于5 ml离心管中。2。 加入4 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至5 ml.3。 用0.22 m过滤膜过滤除菌。 小份分装（1 ml/份)后,-20保存.IPT（4 mg/m）组份浓度 4 mg/l PG配制量
25、 50m配制方法 1.称量1。2 IG置于50ml离心管中。2. 加入4 m灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 l。3. 用0.2 mm过滤膜过滤除菌。4 小份分装(1 ml/份）后，20保存。Xal(2g/ml）组份浓度 配制量 配制方法-20避光保存。组份浓度 配制量 配制方法 组份浓度 配制量 1L配制方法 。 称取下列试剂,置于L烧杯中。2 加入约0 的去离子水,充分搅拌溶解。3. 滴加5 NNaOH（约0.2 ml），调节pH值至。0。4。 加去离子水将培养基定容至 L。5 高温高压灭菌后，冷却至室温.6。 加入1 m Ampiillin（1 mg/ml）后均匀混合。7。 4保存。组
26、份浓度 配制量 1配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17MK2PO4,0.72 M HPO4）00l。溶解2.31 g KH2PO4和。54 g 2HPO4于0 l的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。2。 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。3 加入约80 ml的去离子水，充分搅拌溶解。4。 加去离子水将培养基定容至1 L后，高温高压灭菌5。待溶液冷却至60以下时,加入100l的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 4保存组份浓度 配制量 L配制方法 组份浓度 配制量 1L配制方法. 配制2 M Kl溶液。在90 m的去离子水中溶解1.6g KCl后,定容至10 。2 配制2 MgCl2溶液。在90 m去离子水中溶解19 gCl后，定容至100 l，高温高压灭菌。3. 称取下列试剂,置于L烧杯中。加入约800 l的去离子水，充分搅拌溶解。5。量取10 ml 250 M K
