1、超高效液相色谱课件,目 录,1.绪论,超高效液相色谱的发展,站在当今世界科技前沿的液相色谱用户现在又有了新的需求。首先是改进生产力的需求，因为大量的样品需要在很短的时间内完成；其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求；第三是在与质谱等检测技术联用时，也提出了更高的要求。因此，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行，或者说必须从理论高度对液相色谱重新认识。由此，UPLC（超高效液相色谱）概念得以提出，将HPLC的极限作为自己的起点。,超高效液相色谱技术的实现，主要是依靠以下几个方面的进步：（1）小颗粒、高性能微粒固定相的出现；（2）超高压
2、输液泵的使用；（3）高速采样速度的灵敏检测器；（4）使用低扩散、低交叉污染自动进样器，配备了针内进样探头和压力辅助进样技术；（5）仪器整体系统优化设计：色谱工作站配备了多种软件平台，实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。,分析速度快,灵敏度高,分离度好,超高效液相色谱的优点,0.00,0.04,0.08,0.12,0.16,0.00,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00,3.50,4.00,4.50,5.00,5.50,6.00,1.Thiourea-0.430,2.toluene-1.034,3.propylbenzene-1.742,4.butylben
3、zene-2.413,5.hexylbenzene-5.058,样品的组份数：55m颗粒度完全分离时间：6.00分钟,0.20,0.24,UPLC,AU,0.00,0.10,0.20,Minutes,0.05,0.10,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.40,0.45,0.50,0.55,0.60,UPLC,HPLC,样品的组份数：51.7m颗粒度完全分离的时间：0.60分钟,UPLC的速度提高了！,增加了样品的通量,0.00,AU,使用1.7m颗粒度的填料增加灵敏度,可看到更多的样品信息,恒定柱长时；UPLC的灵敏度提高1.7倍（170%）！,恒定L/dp时；UPLC的灵
4、敏度提高三倍（300%）！,Ultra Performance LC 速度、灵敏度与分离度的结合,AU,0.000,0.010,0.020,0.030,0.040,0.050,Minutes,0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00,6.00,7.00,AU,0.000,0.010,0.020,0.030,0.040,0.050,Minutes,0.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00,12.00,15.00,60%更快30%更灵敏70%更高分离度,在改进获得信息质量的前提下提高分析速度,Ultra Performance LC 速度、灵敏度与分离度的结合
5、,HPLC3.5m,UPLC1.7m,对流出时间接近的色谱峰有更好的分离度及更高的灵敏度,生产力：每次实验得到更多信息,AU,AU,2.理论基础,在高效液相色谱速率理论中，Van Deemter方程式的简化表达式：如果仅考虑固定相的粒度 对 的影响，其简化方程式可表达为：,van Deemter 曲线带来的承诺,如果填料的颗粒继续演变,更小的颗粒度,填料颗粒尺寸的演变,前景：2.1100mm色谱柱1.7m杂化填料颗粒可达到15,000psi通常有每米200,000理论塔板数的柱效,速度、灵敏度及分离度的完美结合,3.UPLC仪器介绍,检测器：光学及/或质谱检测器 可调紫外或光电二极管矩阵 为U
6、PLC专门优化的流动池 高速检测,色谱柱管理：创新的枢轴转动设计 置色谱柱出口直接到检测器,样品管理器：低扩散XYZZ形式 快速进样周期 低交叉污染 样品盘及/或样品瓶 可选样品组织器,两元溶剂管理：高压混合 两元梯度 四溶剂选择 在线脱气 低扩散设计 UPLC的耐压能力,3.1 超高效液相色谱的C18色谱柱,固定相粒度直径可达1.7m色谱柱长可达3-5cm,3.1.1 色谱柱颗粒化学,在杂化的碳-硅基质内具有桥式乙烷的1.7m颗粒三官能团键合C18配体,改善了高pH稳定性改善了硅胶的柱效和反压改善了低pH稳定性,3.1.2 色谱柱硬件,筛板、柱管和连接件，可在超过140MPa压力下装填，保证
7、色谱柱高柱效和长寿命。,可记录进样次数、最大反压及温度智能芯片自动下载关键参数到色谱柱历史文件信息不可删除含有该色谱柱独特的分析证书,eCord 装置,3.2 超高效液相色谱的输液系统,3.2.1 二元溶剂管理系统,高压混合二元梯度四溶剂选择在线脱气低扩散设计耐高压,3.2.2 UPLC超高压输液泵的特性,与普通HPLC的高压梯度系统相比，UPLC的梯度性能极佳,当梯度陡度为1%，梯度范围为90%-100%时，超高压输液泵的梯度运行曲线,UPLC的重现性,UPLC 34次进样分析烷基芳酮混合物保留时间的重现性,其精确度、可靠的梯度性能与HPLC的重现性不相上下,UPLC的耐受性,稳定性试验的条
8、件：从10到90%甲醇的1分钟梯度1000次进样温度：55C最大压力：8500psi流速：1.3ml/min.,ACQUITY UPLC C18 色谱柱2.130mm 1.7m黑色：第一次进样红色：第1000次进样,3.3 超高效液相色谱的高速检测器,UPLC光导检测器流通池示意图,采样速度快能减少谱带扩展以保持柱效灵敏度比HPLC提高2-3倍,流通池体积小、池壁全折射而不损失光能量,3.4超高效液相色谱的自动进样器,针内针装置,外针刺破密封，内针插入样品容器底部吸取样品可达到微量取样（L取样）,减少死体积，降低谱带扩展快速自动取样低扩散、低交叉污染,4.1 超高效液相色谱的应用,药物分析 如
9、天然产物中复杂组分的分析 生化分析 如蛋白质、多肽、代谢组学等生化样品食品分析 如食品中农药残留的检测环境分析 如水中微囊藻毒素的检测其他 如化妆品中违禁品的检测,高分辨串联质谱QTOF micro,灵敏度高(pg-fg级)和选择性强得到的质谱谱图数据完整、品质高。因而，在天然产物，新药开发，药代研究和蛋白质组学领域的定性、定量分析研究方面占有重要地位。,从HPLC-MS到UPLC-MS 灵敏度明显提高,Ultra Performance LC 先进的MS入口技术 代谢物ID,HPLC,UPLC,4.2 超高效液相色谱的展望,UPLC可以更快的速度和更高的质量完成以往HPLC的工作，为用户节省宝贵的时间和日常溶剂消耗，从而获得最大的投资回报。UPLC的高分离度可从容面对复杂组份（如蛋白质与代谢组学等生化领域、天然产物）分离的挑战。UPLC的高灵敏度可检测更加痕量的目标化合物。UPLC的快速分析大量样品，实现高通量。,The EndThank you,
