1、疫苗制备工艺疫苗制备工艺 在发展中国家，死亡总在发展中国家，死亡总人数的人数的30%50%死于传染死于传染病。病。在发达国家，传染病死在发达国家，传染病死亡人数仅占死亡总人数的亡人数仅占死亡总人数的4%8%，主要得益于，主要得益于疫苗疫苗的广的广泛应用。泛应用。第一部分第一部分 疫苗疫苗概述概述疫苗与药物的不同点一般药物一般药物疫苗疫苗对象年龄目的种类结果病人健康人群不同年龄段的患者婴幼儿和儿童治疗疾病/减轻病人的症状通过免疫机制使健康人预防疾病天然药物、化学合成药物、生物药品等生物制品减轻病痛彻底控制消灭某一种疾病（如：天花、脊髓灰质炎）第一节第一节 疫苗概念的产生及其背景疫苗概念的产生及其
2、背景一、一、疫苗疫苗的的产生及其背景产生及其背景12世纪，中国开始用人痘接种预防天花世纪，中国开始用人痘接种预防天花 -疫苗可预防疾病的流行病学与预防学疫苗可预防疾病的流行病学与预防学 第第6版版（2000年年）美国疾病控制与预防中心出版美国疾病控制与预防中心出版天花（天花（Smallpox）临床表现：临床表现：主要为严重毒血症状（寒战、高热、乏力、头痛、主要为严重毒血症状（寒战、高热、乏力、头痛、四肢及腰背部酸痛，体温急剧升高时可出现惊厥、四肢及腰背部酸痛，体温急剧升高时可出现惊厥、昏迷）、皮肤成批依次出现斑疹、丘疹、疱疹、昏迷）、皮肤成批依次出现斑疹、丘疹、疱疹、脓疱，最后结痂、脱痂，遗留
3、痘疤。脓疱，最后结痂、脱痂，遗留痘疤。传播途径传播途径：飞沫吸入或直接接触；：飞沫吸入或直接接触；来势凶猛，发展迅速，对未免疫人群感染后来势凶猛，发展迅速，对未免疫人群感染后15-20天内致死率高达天内致死率高达30。天花（天花（Smallpox）由由天花病毒天花病毒引起的一种引起的一种烈性传染病烈性传染病，患者在，患者在痊愈后脸上会留有麻子，故名痊愈后脸上会留有麻子，故名“天花天花”。天花病毒天花病毒：外观外观：呈砖形（：呈砖形（200纳米纳米300纳米）纳米）抵抗力较强：抵抗力较强：能对抗干燥和低温，能对抗干燥和低温，在痂皮、尘土和被服上，可生存数在痂皮、尘土和被服上，可生存数月至一年半之
4、久月至一年半之久天花天花的防治的防治-中国中国宋真宗时期宋真宗时期(998-1023年年)：人痘法人痘法-预防天花预防天花医者从医者从症状轻微的天花病人症状轻微的天花病人身上进行人工接染到健康身上进行人工接染到健康儿童，使其通过产生轻微症状的感染获得免疫力，避儿童，使其通过产生轻微症状的感染获得免疫力，避免天花引起的严重疾病甚至死亡免天花引起的严重疾病甚至死亡明朝隆庆年间明朝隆庆年间(1567-1572年年)：人痘法人痘法-趋于完善趋于完善人痘衣法、痘浆法、旱痘法和水苗法人痘衣法、痘浆法、旱痘法和水苗法等多种接种方法等多种接种方法人痘法的缺点人痘法的缺点：有时也会引起严重的天花有时也会引起严重
5、的天花天花天花的防治的防治-欧洲欧洲1721年，人症接种法传入英国年，人症接种法传入英国英国医生英国医生E.Jenner(1749-1823)1796年年，利用，利用牛痘牛痘防治防治天花天花1798年，医学界年，医学界正式承认正式承认疫苗接种确实是一种行之疫苗接种确实是一种行之有效的免疫方法有效的免疫方法。1980年，世界卫生组织年，世界卫生组织(WHO)宣布宣布:全球消灭了天花全球消灭了天花疫苗之父疫苗之父-法国免疫学家法国免疫学家 Louis Pasteur细菌的分离培养细菌的分离培养技术技术减毒菌株减毒菌株的获得的获得连续传代培养法连续传代培养法（1870年年）鸡霍乱弧菌鸡霍乱弧菌减毒株
6、减毒株（第一个细菌减第一个细菌减毒活疫毒活疫苗）苗）高温培养法高温培养法（1881年年）炭疸菌苗炭疸菌苗异体传代法异体传代法：将将狂犬病毒狂犬病毒在在兔兔体体内经连续传代内经连续传代，获得了减毒株获得了减毒株 巴氏减毒菌苗的发明巴氏减毒菌苗的发明：为实验免疫学建立了基础为实验免疫学建立了基础疫苗的定义疫苗的定义一切一切通过通过注射注射或或黏膜黏膜途径途径接种接种，可以诱导，可以诱导机体产生机体产生针对针对特定致病原特定致病原的的特异性抗体特异性抗体或或细胞免疫细胞免疫，从而，从而使机体获得使机体获得保护或消灭该保护或消灭该致病原致病原能力能力的生物制品，统称为疫苗的生物制品，统称为疫苗包括包括
7、:蛋白质、多糖、核酸、活载体或感染蛋白质、多糖、核酸、活载体或感染因子等因子等二、二、疫苗的种类疫苗的种类1 1.按按所用材料所用材料分类：分类：细菌性疫苗细菌性疫苗（旧称：旧称：菌苗菌苗）病毒性疫苗病毒性疫苗（旧称：疫苗旧称：疫苗）类毒素类毒素2 .按按疫苗研制技术疫苗研制技术分类：分类：传统疫苗传统疫苗灭活疫苗灭活疫苗减毒活疫苗减毒活疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗：用天然微生物的某些成分制成用天然微生物的某些成分制成新型疫苗新型疫苗项目项目减毒活疫苗减毒活疫苗灭活疫苗灭活疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗抗原抗原用减毒或无毒的全病原体用减毒或无毒的全病原体作为抗原作为抗原用化学或物理方法将病用化学或物理方
8、法将病原体杀死原体杀死以化学方法获得病原体以化学方法获得病原体的某些具免疫原性的成的某些具免疫原性的成分分免疫机免疫机理理接种后病原体在体内有一接种后病原体在体内有一定生长繁殖能力，类似隐定生长繁殖能力，类似隐性感染，产生细胞、体液性感染，产生细胞、体液和局部免疫和局部免疫病原体失去毒力但保持病原体失去毒力但保持免疫原性，接种后产生免疫原性，接种后产生特异抗体或致敏淋巴细特异抗体或致敏淋巴细胞胞接种后能刺激机体产生接种后能刺激机体产生特异性免疫效果特异性免疫效果优缺点优缺点接种次数少，反应小，免接种次数少，反应小，免疫效果持久。疫效果持久。稳定性较差，并应考虑减稳定性较差，并应考虑减毒株毒力返
9、祖问题毒株毒力返祖问题一般要接种一般要接种2 2-3 3次，反次，反应较大，维持时间较短。应较大，维持时间较短。稳定性好，较安全稳定性好，较安全制品纯度较高，副反应制品纯度较高，副反应小，需多次接种小，需多次接种常用疫常用疫苗苗卡介苗、麻疹、鼠疫、脊卡介苗、麻疹、鼠疫、脊髓灰质炎减毒活疫苗髓灰质炎减毒活疫苗伤寒、霍乱、百日咳、伤寒、霍乱、百日咳、乙脑、脊髓灰质炎灭活乙脑、脊髓灰质炎灭活疫苗疫苗白喉、破伤风类毒素，白喉、破伤风类毒素，A A群脑膜炎球菌多糖疫苗群脑膜炎球菌多糖疫苗新型疫苗新型疫苗基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗基因工程载体疫苗基因工程载体疫苗核酸疫苗核酸疫苗基因缺失活疫苗基因
10、缺失活疫苗重组疫苗重组疫苗合成肽疫苗合成肽疫苗抗独特型抗体疫苗抗独特型抗体疫苗新型疫苗新型疫苗基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗-灭活疫苗灭活疫苗基因工程载体疫苗基因工程载体疫苗-活疫苗活疫苗核酸疫苗核酸疫苗-特殊的疫苗特殊的疫苗基因缺失活疫苗基因缺失活疫苗-灭活疫苗灭活疫苗重组疫苗重组疫苗-灭活疫苗灭活疫苗合成肽疫苗合成肽疫苗-灭活疫苗灭活疫苗抗独特型抗体疫苗抗独特型抗体疫苗-灭活疫苗灭活疫苗疫苗的发展疫苗的发展经典的病毒疫苗和细菌疫苗经典的病毒疫苗和细菌疫苗 寄生虫疫寄生虫疫苗、肿瘤疫苗、避孕疫苗等苗、肿瘤疫苗、避孕疫苗等;预防性疫苗预防性疫苗 治疗性疫苗。治疗性疫苗。三、疫苗的基本成分
11、、性质和特征三、疫苗的基本成分、性质和特征1 1.疫苗的基本成分疫苗的基本成分抗原抗原佐剂佐剂防腐剂防腐剂稳定剂稳定剂灭活剂灭活剂缓冲液、盐类等非活性成分缓冲液、盐类等非活性成分（1）抗原抗原:疫苗最主要的有效活性成分疫苗最主要的有效活性成分基本条件基本条件异物性异物性一一定的理化特性定的理化特性特异性特异性灭活病毒或细菌灭活病毒或细菌活病毒或细菌活病毒或细菌/减毒株减毒株病毒或菌体提纯物病毒或菌体提纯物有效蛋白成分有效蛋白成分类毒素类毒素细菌多糖细菌多糖合成多肽合成多肽DNA。（2）佐佐 剂剂理想的佐剂理想的佐剂：增强抗原免疫应答增强抗原免疫应答无毒、安全无毒、安全在非冷藏条件下保持稳在非冷
12、藏条件下保持稳定定作用作用机制机制改变抗原的物理形状，延改变抗原的物理形状，延长抗原在机体内长抗原在机体内保留时间保留时间；刺激单核吞噬细胞对抗原刺激单核吞噬细胞对抗原的提的提呈呈能力；能力；刺激淋巴细胞分化，增加刺激淋巴细胞分化，增加扩大免疫应答能力扩大免疫应答能力。常规免疫佐剂：常规免疫佐剂：常规免疫佐剂：铝盐类佐剂、蜂胶常规免疫佐剂：铝盐类佐剂、蜂胶佐剂、油水乳剂。佐剂、油水乳剂。新型免疫佐剂：新型免疫佐剂：新型免疫佐剂：细胞因子、新型免疫佐剂：细胞因子、CpGCpG DNADNA、基因工程减毒素、免疫刺激复合物、基因工程减毒素、免疫刺激复合物(ISCOM)(ISCOM)、脂质体。脂质体
13、。按物理性质生物学性质佐剂在体内的存留时间颗粒性佐剂非颗粒性佐剂微生物及其组分非微生物物质贮存型佐剂非贮存型佐剂其他分类：其他分类：1.1.铝盐类佐剂铝盐类佐剂2.2.蜂胶佐剂蜂胶佐剂3.3.油水乳剂油水乳剂（一）常规免疫佐剂（一）常规免疫佐剂常规佐剂1：铝盐类佐剂 1 1）氢氧化铝胶：）氢氧化铝胶：铝胶铝胶。2 2）明矾：硫酸铝钾制成）明矾：硫酸铝钾制成10%10%溶液，高压灭菌；调菌溶液，高压灭菌；调菌液液pHpH至至8 80.10.1，加入明矾液，加入明矾液12%12%，充分混匀。，充分混匀。3 3）磷酸三钙：在疫苗中加入氯化钙和磷酸氢二钠，）磷酸三钙：在疫苗中加入氯化钙和磷酸氢二钠，使
14、在疫苗中化合成磷酸三钙，吸附抗原后沉淀。使在疫苗中化合成磷酸三钙，吸附抗原后沉淀。常规佐剂常规佐剂2 2：蜂胶：蜂胶(propolispropolis)蜜蜂采自柳树、杨树、栗树和其它植物幼芽分泌的树脂，蜜蜂采自柳树、杨树、栗树和其它植物幼芽分泌的树脂，并混入蜜蜂上颚腺分泌物，以及蜂蜡、花粉、其它一些有机并混入蜜蜂上颚腺分泌物，以及蜂蜡、花粉、其它一些有机和无机物的一种天然物质。是一种天然的免疫增强剂。和无机物的一种天然物质。是一种天然的免疫增强剂。常规佐剂常规佐剂3 3：油水乳剂佐剂：油水乳剂佐剂 由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂，是制由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂，是制
15、备兽用灭活疫苗时广泛运用的备兽用灭活疫苗时广泛运用的另一种佐剂另一种佐剂。免疫刺激复合物免疫刺激复合物细胞因子类细胞因子类CpGCpG DNA DNA（二）新型免疫佐剂（二）新型免疫佐剂（3）防腐剂防腐剂目的：目的：防止外来微生防止外来微生物的污染物的污染大多数的灭活疫苗都大多数的灭活疫苗都使用防腐剂使用防腐剂硫柳汞硫柳汞硫柳汞硫柳汞副作用：副作用：接触性皮炎接触性皮炎、变应性变应性结膜炎结膜炎、耳毒性耳毒性（4）稳定剂稳定剂保证作为抗原的病毒或其他微生物存活保证作为抗原的病毒或其他微生物存活，并保持免疫原性并保持免疫原性；冻干疫苗中常用的乳糖、明胶、山梨醇等。冻干疫苗中常用的乳糖、明胶、山梨
16、醇等。灭活（灭活（inactivationinactivation）：）：破坏微生物的生物学活破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但不损害其免疫原性，用以性、繁殖能力和致病性，但不损害其免疫原性，用以制备灭活疫苗。制备灭活疫苗。灭活方法：灭活方法：物理方法：加热、紫外线和射线照射物理方法：加热、紫外线和射线照射 化学方法：化学试剂，如甲醛，化学方法：化学试剂，如甲醛，-丙内酯等。甲醛是最常用的灭活剂。丙内酯等。甲醛是最常用的灭活剂。灭活剂（灭活剂（inactivatorinactivator）：）：用于灭活微生物的化用于灭活微生物的化学试剂如甲醛溶液、烷化剂、苯酚、结晶紫、学试剂如甲醛溶
17、液、烷化剂、苯酚、结晶紫、-丙丙酰内脂等。酰内脂等。（5）灭活剂灭活剂(一一)甲醛溶液甲醛溶液 (Formaldehyde solution)(Formaldehyde solution)甲醛为无色气体，有强烈的刺激性，对眼、鼻黏膜和上甲醛为无色气体，有强烈的刺激性，对眼、鼻黏膜和上呼吸道有刺激性。易溶于水合乙醇。其水溶液（呼吸道有刺激性。易溶于水合乙醇。其水溶液（36%36%40%40%）称）称为福尔马林为福尔马林(Formalin)(Formalin)。甲醛甲醛最古典的灭活剂，但也是目前最主要的灭活剂。最古典的灭活剂，但也是目前最主要的灭活剂。灭活机理：灭活机理：甲醛的醛基与蛋白质的氨基、
18、羧基、羟基和甲醛的醛基与蛋白质的氨基、羧基、羟基和巯基反应，分别形成羟甲基胺、亚甲基二醇单酯、羟甲基酚巯基反应，分别形成羟甲基胺、亚甲基二醇单酯、羟甲基酚和硫代亚甲基二醇等，使病毒、细菌等微生物的蛋白质构象和硫代亚甲基二醇等，使病毒、细菌等微生物的蛋白质构象发生改变，从而使其失活。但对其免疫原性无明显影响。发生改变，从而使其失活。但对其免疫原性无明显影响。另外，甲醛还可以与核酸中的碱基（另外，甲醛还可以与核酸中的碱基（A A、G G和和C C）上的氨基）上的氨基反应，与核糖体蛋白的氨基反应，从而影响核酸和核糖体的反应，与核糖体蛋白的氨基反应，从而影响核酸和核糖体的功能。功能。无囊膜的二十无囊膜
19、的二十面体对称病毒面体对称病毒有囊膜的二十有囊膜的二十面体对称病毒面体对称病毒有囊膜的螺旋对称病毒甲醛与蛋白的氨基结甲醛与蛋白的氨基结合形成羟甲基或二羟合形成羟甲基或二羟甲基衍生物，后者与甲基衍生物，后者与酰胺或胍基团反应导酰胺或胍基团反应导致蛋白变性。致蛋白变性。甲醛与核酸中含氨基的A、G、C反应使核酸变性。灭活用甲醛浓度：灭活用甲醛浓度：基本原则：浓度随不同微生物而异。基本原则：浓度随不同微生物而异。1 1）需氧菌：）需氧菌：0.1%0.1%0.2%0.2%。2 2）厌氧菌：）厌氧菌：0.4%0.4%0.5%0.5%。3 3）病）病 毒：毒：0.05%0.05%0.4%0.4%。其他灭活条
20、件：其他灭活条件：3737，24244848hrshrs。有时灭活时间会更。有时灭活时间会更长，如破伤风类毒素用长，如破伤风类毒素用0.4%0.4%的甲醛，的甲醛，3737需灭活需灭活2121 2323天。天。（二）烷化剂（二）烷化剂(alkylating agent)1.AEI：N-乙酰基乙烯亚胺2.BEI：二乙烯亚胺 3.GDA：缩水甘油醛烷化剂的灭活机制：烷化剂的灭活机制：1 1）烷化）烷化DNADNA分子中的分子中的G G或或A A，引起单链断裂或双链交联，引起单链断裂或双链交联，改变改变DNADNA的结构而破坏其功能。的结构而破坏其功能。2 2）可与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢
21、。）可与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。这类灭活剂能破坏病毒的核心，使病毒完全丧失感染这类灭活剂能破坏病毒的核心，使病毒完全丧失感染力，一般不损害其衣壳蛋白，故能维持其免疫原性。力，一般不损害其衣壳蛋白，故能维持其免疫原性。灭活机制：使微生物的蛋白质变性，或抑制灭活机制：使微生物的蛋白质变性，或抑制微生物的特异酶系统，使其失去活性。微生物的特异酶系统，使其失去活性。制备疫苗时的用量：制备疫苗时的用量：0.3%0.3%0.5%0.5%。（三）苯酚（三）苯酚 (phenol)(phenol)（四）结晶紫（四）结晶紫 (crystal violet)(crystal violet)一种碱性染料。
22、一种碱性染料。灭活机制：其阳离子与微生物蛋白质带负电的羟基形成灭活机制：其阳离子与微生物蛋白质带负电的羟基形成弱电性化合物，妨碍微生物的正常代谢。弱电性化合物，妨碍微生物的正常代谢。（五）（五）-丙内酯丙内酯(propiolactonepropiolactone,-PL)-PL)一种良好的病毒灭活剂，但具有致癌性一种良好的病毒灭活剂，但具有致癌性 作用机理：可能是作用于病原体的作用机理：可能是作用于病原体的DNADNA和和RNARNA，而不直接，而不直接作用于蛋白，有利于维持病毒的免疫原性。作用于蛋白，有利于维持病毒的免疫原性。19841984年被选为狂犬病灭活苗的制备。年被选为狂犬病灭活苗的
23、制备。筛选灭活剂的基本原则：筛选灭活剂的基本原则：选择合适的灭活剂，或研发更为优良的灭活剂是生物制选择合适的灭活剂，或研发更为优良的灭活剂是生物制品行业的一项重要工作。目前，甲醛最常用，品行业的一项重要工作。目前，甲醛最常用，N-N-乙酰基乙烯乙酰基乙烯亚胺亚胺(AEI)(AEI)和二乙烯亚胺和二乙烯亚胺 (BEI)(BEI)也被使用。也被使用。筛选原则：筛选原则：1 1）病原体完全灭活：安全性好）病原体完全灭活：安全性好 2 2）最大限度的保持病原体的抗原性：在消除病原体感染）最大限度的保持病原体的抗原性：在消除病原体感染性的同时，维持其蛋白质天然的三维结构和抗原表位等。性的同时，维持其蛋白
24、质天然的三维结构和抗原表位等。3 3）灭活步骤更为简单有效。）灭活步骤更为简单有效。（6）缓冲液、盐类缓冲液、盐类 缓冲液的缓冲液的种类种类、盐类的、盐类的含量含量都可影响疫都可影响疫苗的效力、纯度和安全性，因此都有严格苗的效力、纯度和安全性，因此都有严格的质量标准的质量标准第二部分第二部分 疫苗制备工艺疫苗制备工艺 菌种的选择 菌液培养 灭活 配苗 浓缩 菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养灭活灭活浓缩浓缩配苗配苗细菌性灭活疫苗简称灭活菌苗，种类、苗型甚多，但制造的基本程序差别不大。一、细菌性疫苗制备工艺一、细菌性疫苗制备工艺细菌性灭活疫苗制造细菌性灭活疫苗制造（一）菌种与种子一）菌种与种子
25、 1.菌种 制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个品系，均由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、冻干保存和供应。各种用于制造菌苗的菌种应按规定定期复壮，并进行形态、培养特性、菌型、抗原性和免疫原性鉴定，合格菌种准许用于制苗。2.2.种子培养种子培养 将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定的培养基进行增殖培养，经检查、活菌计数达到标准后即为种子液，用于菌苗生产。种子液通常保存于2-8C冷暗处，不得超过规程规定的使用期限。菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养灭活灭活浓缩浓缩配苗配苗（二）菌液培养二）菌液培养 大量生产的细菌培养方法甚多，既有手工式的，也
26、有机械化或自动化的培养方式。机械化或自动化的培养方式通称为反应缸培养法，可供选择的菌液培养法有：液体静置培养法、液体深层通气培养法、透析培养法及连续培养法等。菌液培养也可采用固体培养法，该方法易获得高浓度的细菌悬液，易稀释成不同浓度，且含培养基的成分较少，所以比较适用于制备诊断用的抗原。菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养灭活灭活浓缩浓缩配苗配苗（三）灭（三）灭 活活 灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取最适当的灭活条件进行，几种灭活菌苗的灭活方法如表所示。表表 几种灭活菌苗的灭活方法几种灭活菌苗的灭活方法 菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养灭活灭活浓缩浓缩配苗配苗（四）浓（四
27、）浓 缩缩 为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高菌数的基础上，再通过浓缩方法达到目的。常用的浓缩方法：氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法 以上方法可使菌液浓缩一倍以上。菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养灭活灭活浓缩浓缩配苗配苗（五）配苗与分装五）配苗与分装 由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧化铝胶配制；也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。有的厂油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂135m110号白油、11.4m1Span-85、3.6ml Tween80混合液中，在边搅拌下加入等量甲
28、醛灭活菌液配制。配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字。菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养灭活灭活浓缩浓缩配苗配苗弱毒菌种多系冻干品，由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、保存与分发，少数由国家指定单位鉴定、保存与供给。菌种使用前应按规程规定进行复壮、挑选，并作形态、特性、抗原性和免疫原性鉴定，符合标准后方可用于制苗。将检定合格的菌种接种于规定的培养基，按规定的条件增殖培养，经检查合格者即可作为种子液。种子液通常在04C可保存2个月，在保存期内可作为菌苗生产的批量种子使用。细菌性活疫苗多指弱毒菌苗，尽管种类与苗型甚多，但基本制造程序相同。（一）菌种与种子（一）菌种与种子细
29、菌性活疫苗制造细菌性活疫苗制造菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养浓缩浓缩配苗配苗按1%3%量将种子液接种于培养基，然后依不同菌苗要求进行培养。如猪丹毒弱毒菌须在在深层通气培养中加入适当植物油作消泡剂，通入过滤除菌的热空气进行培养制造菌液如人用炭疽活疫苗、卡介苗经固体表面培养完成后须按规定要求将菌苔洗下制成菌液菌液于04C暗处保存，待抽样经活菌数等检查合格后使用。（二）菌液培养二）菌液培养菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养浓缩浓缩配苗配苗 经检验合格的菌液，按规定比例加入保护剂配苗，充分摇匀后随即进行分装，分装量必须准确。分装好的菌苗迅速送入冻干柜进行预冻、真空干燥，冻于完毕后立即加塞、抽空
30、、封口，移入冷库保存，并由质检部门抽样检验。（四）配苗与冻干（四）配苗与冻干 为提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可进行浓缩，以提高单位活菌数，常用的依缩方法有吸附剂吸附沉降法、离心沉降法等，如于猪丹毒菌液内加入0.2%0.25%羧甲基纤维素(CMC)进行浓缩，也可用离心沉淀浓缩。浓缩菌液应抽样作活菌数等检查。（三）浓缩（三）浓缩菌种的选择菌种的选择菌液培养菌液培养浓缩浓缩配苗配苗流程图流程图1细菌疫苗制造工艺流程细菌疫苗制造工艺流程蛋白质、肉浸液等原料蛋白质、肉浸液等原料培养基培养基细菌分离细菌分离菌菌 种种弱毒菌种弱毒菌种配置、灭菌鉴定减毒检验配制灭菌检验配制灭菌原原 料料佐佐 剂剂灭活菌液灭活
31、菌液配苗、乳化配苗、乳化灭活疫苗灭活疫苗培培 养养菌苗原液菌苗原液配配 苗苗活疫苗活疫苗保护剂保护剂菌菌 液液分装、冻干分装、冻干分分 装装灭活原原 料料活化活化种子种子举例 白喉疫苗外毒素外毒素对神经对神经系统损系统损害害细菌产生细菌产生的外毒素的外毒素对心肌损对心肌损害害外毒素外毒素对肾脏对肾脏损害损害白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病主要临床表现为上呼吸道发炎，主要临床表现为上呼吸道发炎，常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管，常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管，白喉
32、流行三个特点传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类的传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类的 细菌没有中间宿主，病人及带细菌没有中间宿主，病人及带 菌者是一的传染原。菌者是一的传染原。传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也 可通过被污的器具和食物传可通过被污的器具和食物传 播。播。易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿1 1 岁时白喉易感性达高峰。岁时白喉易感性达高峰。二、病原学白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈棒状，有白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈棒状，有 着着色色 较深的异染颗粒，革兰氏染色阳性，白喉杆菌较深的异染颗粒，革兰氏染色阳性，白喉杆
33、菌无动力，无荚膜，不行成芽孢。无动力，无荚膜，不行成芽孢。白喉杆菌是需氧菌，最适温度为白喉杆菌是需氧菌，最适温度为3435。能分。能分解葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原解葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原硝酸盐，不产生吲哚，不消化蛋白。硝酸盐，不产生吲哚，不消化蛋白。白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感，对青霉素和白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感，对青霉素和红霉素极敏感；对消毒剂抵抗力弱，红霉素极敏感；对消毒剂抵抗力弱，1石碳酸石碳酸1min或或3苯酚苯酚10min可将该菌杀死。不耐热，可将该菌杀死。不耐热，58 10min或或100 1min即可被杀死。白喉是由白即可被杀死。白喉是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的三、白喉毒素白喉毒素对人和动物都引起致死性毒性，白喉毒素对人和动物都引起致死性毒性，如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织如心脏、肾上腺、
