1、微生物的实验室培养的教学设计和习题一、选择题、 1下列有关培养基的叙述正确的是( ) A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌 2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含( ) A碳源、磷酸盐和维生素 B氮源和维生素 C水、碳源、氮源和无机盐 D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 3获得纯净培养物的关键是( ) A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B接种纯种细菌 C适宜环境条件下培养 D防止外来杂菌的入侵 4下列常用的无菌操作中错误的
2、是( ) A用酒精擦拭双手 B用氯气消毒水源 c实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 5制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( ) A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 6有关倒平板的操作错误的是( ) A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 7有关平板划线操作正确的是( ) A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取
3、出菌种后需马上塞上棉塞 c将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可 D最后将平板倒置，放人培养箱中培养 8有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( ) A首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C再放在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落 9涂布平板操作需要用到( ) A接种环、滴管、酒精灯 B接种环、移液管、酒精灯 C涂布器、移液管、酒精灯 D涂布器、接种环、酒精灯 10将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是( ) A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基是否被杂菌污染 C没必要放人未接
4、种的培养基 D为了下次接种时再使用 11关微生物营养物质的叙述中，正确的是 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 12作为自养生物唯一碳源的是（ ） A糖类 B 石油 C 二氧化碳 D 花生粉饼 13大肠杆菌的代谢类型是（ ） A 自养需氧 B异氧严格厌氧 C异养需氧 D 异养兼性厌氧 14菌种保藏应控制的条件是（ ） （1）湿度 （2） 低温 （3） 干燥 （4） 有光 （5）隔绝空气 （6）适当有氧 A（1）（4）（6） B（2）（3）（6） C（1）（5）（6） D（2）（3）（5） 15下列物质中，不能用作酵
5、母菌碳源的是（ ） A含碳有机物 B蛋白胨 C含碳无机物 D花生粉饼等天然物质 16平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ） A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染 C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基 17。含C、H、O、N的大分子化合物可以作为（ ） A异养微生物的氮源、能源 B异养微生物的碳源、氮源 C自养微生物的氮源、能源、碳源 D自养微生物的氮源、能源、碳源 二、非选择题 18鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在 中保温1-2天看有无 ，如果没有 说明制作合格，反之则不合格。 19请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 (1
6、)培养细菌用的培养基与培养皿 (2)玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3)实验操作者的双手 (1) 、 (2) 、 (3) 2019世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。 (1)根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么? (2)由此得出研究和应用微生物的前提是防止 21在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么? 22在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 参考答案： 一、1A 2C 3D 4D 5C 6C 7D 8D 9C 10B。 11D
7、12。C。13。D。14。B。15。C。16。D。17。B。 二、18 恒温箱 菌落生长，菌落生长 19(1)需要灭菌 (2)需要灭菌 (3)需要消毒 20(1)导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。(2)杂菌入侵，获得纯净的培养物。 21不能 因空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 22因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，这样最终就能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 一：教学目标1知识目标：了解培养基的用途和种类识记培养基制作中的一般成分掌握培养基制作的一般的步骤
8、掌握微生物分离中的划线法和涂布法2能力目标掌握微生物的生活史，对接种的微生物进行鉴别学会一般的消毒、灭毒的方法学会实验的后期处理的方法3情感目标培养学生环保的意识体验微生物与现代生物技术之间的密切的关系二：教学中的难重点重点：培养基的制备、微生物的培养的操作难点：培养基的制备和微生物的分离三：教学过程说明：本实验，我准备安排在选修一开始就进行。原因：如果开展选修一，我准备开设“腐乳的制作”，用到大量的根霉菌和毛霉菌。准备让技术比较好的两组同学接种创设情景，引入新课确定目标，引导自学展示几个问题，让学生整理什么叫培养基？有几种类型？培养基一般需要的营养成分？了解牛肉膏蛋白胨培养基的营养成分无菌操
9、作包括几部分？小组讨论，分别让不同小组展示“如何进行无菌操作”三：给出目标，动手实践大屏幕展示： 马铃薯培养基：牛肉膏蛋白胨培养基：给出配方，将学生分组自主选择制作的培养基。具体步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。要求学生在课上完成计算、称量、溶化、灭菌操作，然后利用之前学生或教师已经完成灭菌的培养基倒平板。（2）倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约1020mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需
10、510min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。一二组完成根霉菌、毛霉菌（带上口罩操作） ，三四组完成大肠杆菌的 操作课下思考课本上的思考课题目标临沭县实验中学刘长明2010年7月29日 16:11（一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感、态度与价值观 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神课题重点无菌技术的操作课题难点 无菌技术的操作教学方法 启发式教学教学工具 多媒体课件教学过程（一）引入新课
11、在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。（二）进行新课1基础知识11 培养基的种类包括 固体 培养基和 液体 培养基等。思考1琼脂是从红藻中提取的 多糖 ，在配制培养基中用作为 凝固剂 。【补充】培养基的类型及其应用：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养
12、基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离 12 培养基的化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 四类营养成分。思考2从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97以上。【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代
13、谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。13 培养基除满足微生物生长的 pH 、 特殊营养物质 和 氧气 等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。思考3牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供 糖 、 维生素 和 有机氮 等营养物质。思考4培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ，培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ，培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：14 获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 。15 无菌技术包括：（1）对实验操作
14、空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。16 比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能 思考5无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是 防止感染实验操作者 。17 消毒方法：（1）日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏 消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒
15、 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，然后使用 紫外线 进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒；（5）饮水水源用 氯气 进行消毒。18灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱 ；（3）培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法，所用器械是 紫外灯 。思考6对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。思考7利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。思考8
16、物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 有利于锅内温度升高 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 100k Pa，温度为 121 ，并维持 1530 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 零 时打开锅盖，其目的是防止 容器中的液体暴沸 。【补充】培养基的配制原则：目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比41时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为31时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈
17、酸性。2实验操作21 计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。22 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。23 溶化：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠继续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。24 调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。25 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。26 倒平板：待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉
18、塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。思考1锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。思考2倒平板的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。思考3若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。思考4配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染。思考5试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。27 接种271微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法，另外还有穿刺
19、接种和斜面接种等。272平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划35条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。将平板倒置放在培养箱中培养。思考6
20、取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。思考7在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。273稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。274系列稀释操作：取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入
21、编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。思考8操作中试管口和移液管应在离火焰12cm处。整个操作过程中使用了1支移液管。3结果分析与评价31培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。32在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。33培养12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。思考9在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或
22、杂菌感染等。思考10频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，每36个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在20冷冻箱中。（三）课堂总结、点评微生物的实验室培养培养基无菌技术纯化大肠杆菌培养基的配制配制培养基的原则配制培养基的方法计算称量溶化调pH分装加棉塞灭菌倒平板平板划线法稀释涂布法系列稀释平板涂布 （四）实例探究例1关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量解析：
23、不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHC O3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D例2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌
24、 D.灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B综合应用例3右表是某微生物培养基成分，请据此回答：编号成分含量粉状硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gMgSO49.25gFeSO40.5gCaCl20.5gH2O
25、100ml（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入 ，用于培养 。（3）若除去成分，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。（4）表中营养成分共有 类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。（6）右表中各成分重量确定的原则是 。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。解析：对于一个培养基，它能培养何种微生物，要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基，如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物质的类型出发。右表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类
26、，缺乏碳源和特殊营养物质。对特殊营养物质，有的微生物是不需要的，但没有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源，说明培养的微生物是从空气中获得碳源的，即可培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中加入了过量食盐，就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培养基，但金黄色葡萄球菌是异养型微生物，这个培养基就还需要加入有机碳源。该培养基若加入（CH2O），培养基中就有了碳源，但除去成分，却使培养基中没有了氮源，这时就只能用于培养固氮微生物了。对于菌种鉴定，往往用的是固体培养基，而表中没有凝固剂，需要加入常见的凝固剂琼脂。答案：自养型微生物 含碳有机物 金黄色葡萄球菌 固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要
27、确定 琼脂（或凝固剂）（五）巩固练习1不可能作为异养微生物碳源的是A牛肉膏 B含碳有机物 C石油 D含碳无机物2根瘤菌能利用的营养物质的组别是ANH3，（CH2O），NaCl BN2，（CH2O），CaCl2C铵盐，CO2，NaCl DNO2，CO2，CaCl23配制培养基的叙述中正确的是A制作固体培养基必须加入琼脂 B加入青霉素可得到放线菌C培养自生固氮菌不需氮源 D发酵工程一般用半固体培养基4自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是A碳源 B氮源 C无机盐 D特殊营养物质5下表是有关4种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述。其中正确的是( )生 物硝化细菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒状杆菌能 源氧化NH3
