环境中有机污染物遗传毒性检测的样品前处理方法.docx

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环境中有机污染物遗传毒性检测的样品前处理方法

第一篇大气可吸入颗粒物样品前处理

   可吸入颗粒物：

能长期悬浮在空气中，空气动力学当量直径≤10µm的、能进入人体呼吸道的颗粒物。

1范围

   本方法适用于大气可吸入颗粒物中非挥发性有机物，不适用于大气可吸入颗粒物的气态及半气态有机物。

2试剂

2.1纯水：

符合GB6682实验室用水规格中一级水标准的水，即电导率≤0.01µS/cm（25℃），吸光度≤0.001（254nm，1cm光程）二氧化硅含量≤0.01mg/L。

可用去离子水（加少量KMnO4）经全玻璃器皿重蒸馏制得。

2.2溶剂：

等级不得低于分析纯，且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方能使用。

2.2.1二氯甲烷。

2.2.2二甲基亚砜（DMSO）。

2.3氢氧化钠：

с（NaOH）=1mol/L。

2.4盐酸：

с（HCl）=1mol/L。

2.5无水硫酸钠。

3仪器

3.1采样系统：

符合GB6921大气瓢尘浓度测定方法（见FHZHJDQ0156）的要求。

3.2超细玻璃纤维滤膜：

过滤效率不低于99.99%。

3.3索氏提取器：

500mL容量。

3.4超声波清洗器：

250W功率。

3.5分液漏斗。

3.6旋转蒸发器。

3.7KD浓缩器。

3.8钢瓶。

3.9减压阀。

3.10高纯氮气。

3.11一般实验室器具及玻璃器皿。

为避免其他有机物质的干扰，所有玻璃器皿及直接接触样品的器具均需洗净，并经纯水及纯有机溶剂冲洗。

4采样

   按GB6921大气瓢尘浓度测定方法（见FHZHJDQ0156）的方法采集一定量的大气可吸入颗粒物，记录流量及采样时间。

采样前，将滤膜于500℃灼烧半小时后称重。

采样后，将对折的滤膜用硫酸纸包好，装入黑色纸袋，于4℃条件下运输并于采样前的称重条件下衡至少24h后称重。

称重后的滤膜装入塑料袋，于-20℃以下避光保存。

采样后应尽快进行样品制备。

采样时间不应超过24h，在此期间如不能采集到足量的尘，可在同一采样地同时设置两个或更多的采样器，将所得尘样合并为一个样品。

5样品制备

5.1有机物分离提取可采用索氏提取法、超声提取法，必要时进行不同有机组分的提取。

5.1.1索氏提取将样品滤膜对折成卷状，放入提取器。

分别用100mL二氯甲烷在溶剂沸点条件下（40℃）提取2次，每次16h（每小时回流5~10次），将两次的提取液冷却至室温后合并。

用孔径≤0.5mm的微孔全玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中。

5.1.2超声提取将滤膜剪成1cm小片，放入瓶塞配有聚四氟乙烯衬垫的玻璃试管中，在超声波清洗器中用二氯甲烷提取2次，每次10min。

用孔径≤0.5mm的微孔全玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中。

5.1.3不同有机组分的提取

5.1.3.1将索氏提取或超声提取得到的提取滤液放入分液漏斗，用1mol/L盐酸提取3次，每次用量约50~75mL（提取液pH为1~2）。

5.1.3.2碱性组分：

将5.1.3.1中3次提取所得的水相合并，用1mol/L氢氧化钠将pH调至11~12，用二氯甲烷提取3次，每次用量约50~100mL，将3次提取的有机相合并，并使其通过无水硫酸钠除去水分。

此为碱性组分。

5.1.3.3中性组分：

将5.1.3.1中3次提取所得的有机相合并，用1mol/L氢氧化钠提取3次，每次用量约50~75mL（提取液pH为11~12）。

将3次提取的有机相合并，并使其通过无水硫酸钠除去水分。

此为中性组分。

5.1.3.4酸性组分：

将5.1.3.3中3次提取所得的水相合并，用1mol/L盐酸将pH调至1~2。

用二氯甲烷提取3次，每次用量约100mL。

合并3次提取的有机相，使其通过无水硫酸钠除去水分。

此为酸性组分。

注意在提取过程中如水相、有机相间的乳化层超过有机相的1/3，应使用离心等物理学方法进行分离。

5.2提取液浓缩

5.1.1、5.1.2所得提取液及5.1.3所得各有机组分提取液体积在1L以下时，可用K-D浓缩器浓缩，如提取液体积大于1L，使用旋转蒸发器，将提取液蒸发至近100mL，用K-D浓缩器浓缩。

留出50%浓缩后的提取液以备重量分析及化学分析，另外50%继续用K-D浓缩器浓缩至1mL。

5.3溶剂置换

于40℃水浴条件下用平稳氮气流将浓缩过的提取液吹干。

加入适量（1mL左右）DMSO或遗传毒性检测所需的其他溶剂使萃取物溶解，并稀释至适当浓度以备进行遗传毒理学检测。

提取液应于-20℃避光保，并应在提取之日起的3周内进行检测。

6结果计算

6.1采气总量用m3表示。

6.2可吸入颗粒物采集总量用mg表示。

6.3提取有机物的量用mg表示。

7说明

7.1质量控制

7.1.1设置现场采样及溶剂对照，即在采样期间将空白滤膜放置在现场（注意防止污染），除不参与采样外，空白滤膜需经历从膜准备到遗传毒性检测的全过程。

如此对照的遗传毒性检测呈阳性反应，应分别检查采样过程及制备系统，找出原因，重复对照试验，至合格为止。

7.1.2设置阳性对照，即将在所要进行的遗传毒性检测中肯定会产生阳性结果的对照物滴加在空白滤膜上，使其经历样品制备的全过程。

如遗传毒理学检测结果为阴性，应检查制备系统，找出原因，重复阳性对照试验，至合格为止。

7.2安全性

由于对样品制备中涉及的毒性与致癌性不完全清楚，应将其按有潜在健康危害的物质对待，操作者应保持最低限度的接触。