知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗对慢性前列腺炎患者精液质量的影响.docx
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知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗对慢性前列腺炎患者精液质量的影响
知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗对慢性前列腺炎患者精液质量的影响
(作者:
___________单位:
___________邮编:
___________)
作者:
董毅飞,王华,胡玥玥,张征,张昌军
【摘要】目的观察知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗对慢性前列腺炎患者精液质量的影响,并从精子凋亡角度初步探讨其可能的机制。
方法慢性前列腺炎患者58例,治疗前行精液分析、精子凋亡率检测并与健康组进行比较。
将患者随机分为治疗组(28例)和对照组(30例),治疗组用知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗,对照组仅用左旋氧氟沙星治疗。
2组均在治疗1个月后对比观察临床疗效,精液分析,并采用TUNEL法分别检测治疗后精子凋亡率的变化。
结果慢性前列腺炎患者与健康组比较,精液液化时间延长(P0.01),精子活力明显下降(P0.01)。
治疗组治疗后液化时间明显缩短(P0.01),精子活力与治疗前相比有显著提高(P0.01)。
对照组治疗后液化时间明显缩短(P0.05),但精子活力改变差异无统计学意义(P0.05)。
慢性前列腺炎患者精子凋亡率显著高于健康组(P0.01)。
治疗后治疗组精子凋亡率较治疗前明显降低(P0.01)。
对照组治疗前后精子凋亡率变化差异无统计学意义(P0.05)。
治疗组临床治愈率35.71%,有效率85.71%,优于对照组(P0.05)。
结论知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗能有效改善慢性前列腺炎患者的精液质量,这种作用可能是通过降低精子凋亡率实现的。
【关键词】慢性前列腺炎;知柏前清汤;精子凋亡率;中西医结合疗法;精液质量
Keywords:
chronicprostatitis;ZhibaiQianqingdecoction;spermapoptosisrate;combinedtreatmentoftraditionalChineseandwesternmedicine;SpermQuility
慢性前列腺炎(chronicprostatitis,CP)是泌尿生殖系统的常见病、难治病。
流行病学调查显示,CP在男性人群发病率可高达2.5%~16.0%。
大量研究表明,CP可以降低患者精液质量而影响男性生育力[1-2]。
近年来,中西医结合治疗CP取得了较好的临床疗效,但其对患者精液质量的影响报道不多。
本研究选用清热利湿中药组成知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗CP,观察其对患者精液质量的影响,并从精子凋亡角度初步探讨其可能的机制。
1临床资料
1.1诊断及纳入标准
诊断标准参照文献[3-4]制定,以下列1~3条中任意1条加第4条即可诊断为慢性前列腺炎:
①尿频、尿意不尽、尿道外口有白色分泌物溢出;②会阴部、腰骶部、睾丸和小腹隐痛不适;③性功能障碍;④前列腺液镜检白细胞10个/HP或成团,卵磷脂小体减少。
符合本病诊断标准,既往无睾丸炎、腮腺炎、生殖系畸形及服用棉籽油史,无内分泌及遗传病史,且近2周内未接受任何相关治疗者可纳入本研究。
有严重肝、肾疾病及资料不全者未纳入本研究。
另选择健康男性志愿者20名,要求无任何临床症状,体格检查、化验前列腺液(EPS)常规、尿常规及细菌学检查均无异常。
1.2研究对象及分组
58例CP患者随机分为2组,治疗组28例,对照组30例。
治疗组年龄(32.6±4.7)岁,病程(3.8±3.3)年;对照组年龄(31.3±5.0)岁,病程(3.5±3.4)年。
2组患者年龄、病程差异均无显著性差异(P0.05)。
健康组选择20名健康男性志愿者作为精液质量相关参数的对照,年龄(30.7±4.9)岁,与CP患者年龄差异无统计学意义(P0.05)。
1.3药物及试剂
知柏前清汤由知母15g、黄柏20g、益母草25g、怀牛膝15g、白花蛇舌草15g、蜈蚣2条、夏枯草12g、菟丝子10g、淫羊藿10g组成,由十堰市人民医院制剂室煎制。
左旋氧氟沙星片购自第一制药(北京)有限公司,国药准字H20000655。
TUNEL检测试剂盒(RD),购于武汉晶美生物工程有限公司,货号为TA4625,批号为11794K6。
1.4仪器
WLJY-9000伟力彩色精子质量检测系统(北京伟力新世纪科技发展有限公司);隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂);LDZ5-2型低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)。
2方法
2.1治疗方法
治疗组每日给予知柏前清汤150mL,分2次口服。
同时联合使用西药左旋氧氟沙星片,200mg,口服,2次/d。
对照组予左旋氧氟沙星口服,剂量及用法同治疗组。
2组均以1月为1个疗程,共治疗1个疗程,并进行生活习惯指导(禁辛辣食物、保持大便通畅、已婚者进行规律性生活等)。
治疗期间禁用其他治疗CP的药物和方法。
2.2临床疗效标准
依据《中医病证诊断疗效标准》[4]。
治愈:
症状体、征消失,EPS-WBC连续2次以上正常,压痛消失,前列腺体质正常或接近正常;显效:
症状、体征评分较治疗前减少60%~90%,EPS-WBC连续2次以上较治疗前减少1/2,或15个/HP,前列腺触压痛及质地均有改善;有效:
症状、体征评分较治疗前减少30%~59%,EPS-WBC较治疗前改善;无效:
症状、体征评分较治疗前减少30%以下,EPS-WBC无改善。
总有效率=临床治愈率+显效率+有效率。
2.3标本收集
治疗前与疗程结束后留取精液标本作精液分析检查及精子凋亡检测。
要求禁欲至少48h,但不超过7d,且同一患者治疗前与复查时禁欲天数相同。
通过手淫法将精液取于无菌杯中,置37℃培养箱中待其液化。
60min不液化的精液采用机械吹打法使其液化,取0.1mL做精液常规分析。
剩余精液加入离心管中离心(2500r/min×10min),弃精浆,留取沉淀,温PBS洗涤2次,调精子密度为50×106/mL,玻片预先用多聚赖氨酸进行防脱处理。
4%多聚甲醛固定20min。
PBS洗涤2min,晾干。
标本片-20℃冰箱保存以备检测精子凋亡率。
2.4精液分析
应用WLJY-9000伟力彩色精子质量检测系统,按世界卫生组织(WHO)标准常规检查[5]。
主要检测项目包括精液量、pH值、液化时间、精子密度、精子活力(a级+b级)、精子畸形率等。
2.5精子凋亡率检测
用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测精子凋亡率,严格按说明操作。
简要步骤如下:
将玻片放入50mL1×PBS溶液中,室温下孵育10min。
保持标本湿润,用吸水纸小心吸走标本周围多余的液体。
每个标本用50μL蛋白酶K室温下孵育5min。
将玻片在50mL去离子水中漂洗2次,每次2min。
灭活内源性过氧化物酶,将玻片投入灭活液中,室温下孵育5min。
甩去多余的液体,标本置于50mL1×PBS溶液中浸泡1min。
将标本浸入1×TdT标记缓冲液中孵育5min。
每个标本加50μL标记反应液,置于湿盒中,37℃孵育1h。
将标本片转入50mL1×TdT终止缓冲液中,室温下孵育5min。
每个标本加入50μLstreptavidin-HRP,室温下孵育10min。
DAB显色,苏木素复染,封片。
在1000×油镜下观察,头部染成棕黄色的精子为凋亡精子,其余精子头部呈蓝色。
显微镜下计数500个精子,计算凋亡率。
凋亡率(%)=(头部染成棕黄色的精子个数/500)×100%。
2.6统计学方法
结果以x±s表示,计数资料采用χ2检验,计量资料采用t检验,用SPSS12.0软件包进行统计分析。
3结果
3.1精液分析结果
精液分析结果显示,CP患者与健康组比较,精液液化时间延长(P0.01),精子活力明显下降(P0.01)。
2组治疗后精液液化时间均缩短,治疗组液化时间缩短更明显(P0.05)。
治疗组治疗前后相比精子活力有显著提高(P0.01)。
见表1。
表1CP患者与健康组精液分析结果比较(略)注:
与健康组比较,**P0.01;与本组治疗前比较,△P0.05,△△P0.01;与对照组治疗后比较,★P0.05
3.2精子凋亡率检测结果
健康组精子凋亡率为(5.20±1.87)%,CP患者与健康组比较,精子凋亡率显著增高,治疗组治疗前为(14.44±3.47)%,对照组为(14.67±3.59)%。
治疗组治疗后精子凋亡率为(9.91±2.56)%,与治疗前比较显著下降(P0.01);对照组精子凋亡率为(13.06±3.19)%,与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05)。
3.32组临床疗效比较
(见表2)表22组CP患者疗效比较[例(略)]注:
与对照组比较,#P0.05
4讨论
CP的治疗早已不再以单纯使用某种抗生素或联合使用抗生素为主要方法,而更加偏向于综合治疗,中西医结合治疗在改善临床症状方面具有自身独特的优势。
CP属中医“淋浊”、“精浊”等范畴。
本病初期以热证居多,日久入络,气血瘀滞,脉络不通,导致湿热蕴结、痰瘀互阻,缠绵难愈。
知柏前清汤清热利湿、化痰降浊、活血化瘀,切中病机,故本试验中作为联合使用的药物之一。
结果表明,知柏前清汤联合左旋氧氟沙星治疗CP可以取得良好的治疗效果。
近年来CP对男性生育能力的影响引起了广泛的关注,已经证实,前列腺炎的慢性病程和反复发作的特点可影响男性生育功能[6]。
CP主要通过降低患者精液质量来影响患者的生育能力,而精子凋亡与精液质量密切相关。
有研究证实,精子凋亡率与精子活力、前向运动力及受精能力呈负相关,而精子凋亡率与精子尾部缺陷率呈正相关[7]。
由于许多中药成分都有抗凋亡作用,中西药合用是否通过影响精子凋亡率而改善患者精液质量是一个值得探讨的问题,国内尚无这方面的报道。
本实验从精子凋亡角度初步探索了中西药合用改善精液质量的机制。
本研究显示,治疗组和对照组治疗后精液液化时间均缩短,但治疗组液化时间缩短更明显。
左旋氧氟沙星治疗后精液液化时间缩短,可能与患者精液内引起精液凝集的微生物减少有关。
治疗组治疗后不仅精液液化时间缩短,且精子活力明显提高。
其原因:
①知母、黄柏、白花蛇舌草具有抗菌消炎作用,与左旋氧氟沙星合用其作用更加明显。
中西药结合通过活血化瘀、益气补肾等作用,改善和修复前列腺炎性组织,降低白细胞,从而改善精液质量。
②在以前的研究中我们发现,中药知柏前清汤可以降低精液内异常升高的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,减少细胞因子对精子运动的不利影响[8]。
③淫羊藿含有大量的锌,并具有改善微循环的作用,可以增加精液中的锌含量,提高精子活力。
中医认为肾主生殖,本方中淫羊藿补肾填精,菟丝子养阴补肾,而精液为男性生殖之精,中西医结合治疗通过抗菌消炎、调节前列腺分泌功能等改善了精液和精子质量,显示其在男科临床和生殖医学领域的应用价值。
本研究发现,CP患者精子凋亡率显著高于健康组,治疗组治疗后精子凋亡率显著下降。
可能的原因有以下几点:
①细胞因子的作用。
CP患者精液内TNF-α、IL-2、IL-6等细胞因子含量增加,这些细胞因子均可诱导精子凋亡的增加,其中TNF-α是启动细胞凋亡的重要细胞因子[9]。
有研究表明,知柏前清汤能明显降低CP患者精液内异常的TNF-α、IL-6水平[8],这可能是治疗组精子凋亡率下降的原因之一。
②活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)的作用。
CP患者的精液中含有大量的白细胞,其精浆的ROS水平明显增高。
ROS可导致精子染色体发生交联、DNA碱基氧化及DNA链断裂。
Kemal等[10]认为,ROS损伤DNA的机制可能为:
在精子发生时,生精细胞的DNA遭到ROS损害,使组蛋白转化为鱼精蛋白复合体时受阻;精子DNA受到ROS直接损害并诱导凋亡。
在本实验中,一方面联合用药降低白细胞数致活性氧产生减少;另一方面,中药及其成分如菟丝子、淫羊藿苷、益母草等都具有较强抗活性氧作用[11-13],其中菟丝子对ROS造成的精子膜、顶体结构和精子线粒体功能损伤具有明显的干预作用。
总之,我们推测中西医结合用药可能通过多个环节降低精子凋亡率,从而提高精液质量。
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