兽医生物制品黄淑坚Word格式.docx
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7、基因工程苗:
包括基因缺失苗(伪狂犬基因缺失苗)、基因表达疫苗;
8、多联苗:
利用多种微生物制成疫苗;
9、多价苗:
利用一种微生物多种血清型(或者血清亚型)制成疫苗;
10、同源疫苗:
一种微生物制成疫苗免疫动物后,用于预防该微生物强毒的感染与攻击,这种疫苗称为同源疫苗;
11、异源疫苗:
①用不同种微生物的菌(毒)株制备的疫苗,接种动物后能使其获得对疫苗中并未含有的病原体产生抵抗力;
②用同一种中一种型(生物型或动物源型)微生物的菌(毒)株制备的疫苗,接种动物后能使其获得对异型病原体的抵抗力。
例:
NDIV→PEG流行性腹泻;
HTV→MDV鸡马立克病毒;
猪瘟兔化弱毒苗→牛病毒性腹泻;
表1-1灭活疫苗与弱毒疫苗的比较
种类
优点
缺点
灭活疫苗
比较安全,一般不发生全身性副作用,无返祖现象;
有利于制备多价、多联等混合疫苗;
制品稳定,受外界条件影响小,有利于运输、保存
接种次数多、剂量大,免疫途径必须注射,不产生局部免疫;
需要高浓度抗原物质,生产成本高。
弱毒疫苗
通常一次免疫即可成功,可采取多种感染途径(注射、滴鼻、饮水、喷雾、划痕)等。
引起整个免疫应答,产生广谱性免疫及局部和全身性抗体。
免疫力持久,有利于清除局部野毒;
产量高,生产成本低。
备注:
FMDV口蹄疫、SFV猪瘟用乙烯亚胺类衍生物(结晶紫)制灭活苗
其它细菌大都用0.3%甲醛灭活
病毒0.5%甲醛灭活
毒素0.4~0.7%甲醛灭活
大多数细菌置于37℃培养灭活
佐剂的运用:
1、油乳佐剂(病毒疫苗);
2、Al(OH)3胶(细菌疫苗);
3、蜂胶(细菌)
灭活剂:
1、甲醛;
2、结晶紫(猪瘟);
3、乙烯亚胺类衍生物
(2)治疗用兽医生物制品
1、抗病血清:
Ag3~5次→动物→产生Ab,Ab主要存在于血液的血清中→提取血清→加入抗菌药物、防霉剂
2、抗毒素:
类毒素3~5次→动物→产生Ab→提取血清→加入抗菌药物、防霉剂
3、高免卵黄液:
Ag3~5次→母禽→产生Ab→移行至母禽产下蛋的蛋黄中→提取蛋黄→加入1~2倍生理盐水(含有抗菌药物、防霉剂)
(3)诊断用兽医生物制品
1、标准Ag2、标准Ab
第2章兽医生物制品的发展趋势
1、GMP(生产与管理)
2、从第一代疫苗(灭、弱、亚、类)→第二代疫苗(基因工程)→第三代疫苗(合成肽苗、抗独特型抗体疫苗)
3、更加注重诊断用兽医生物制品
4、向更浓缩、纯度更高方向发展
5、更加注重免疫佐剂、灭活剂的研究
6、更加注重产品的质量与冷链过程
第3章免疫佐剂
1、免疫佐剂的概念
本身没有免疫原性,但与Ag联合使用,能大大提高Ag的免疫原性或改变免疫应答类型,这种物质为免疫佐剂
2、免疫佐剂的要求
1、安全、无毒副作用
2、化学纯以上的试剂
3、吸附能力强
4、容易吸收
5、稳定性强、能保存1~2年
3、常用免疫佐剂的制备
(1)不溶性铝盐胶体的佐剂
1、Al(OH)3
AlCl3(无水)+NaOH→Al(OH)3胶↓(滴定法)
明矾+NH3▪H2O→Al(OH)3胶
使用注意事项:
①灭活菌液:
Al(OH)3胶=4:
1
②Al(OH)3经126℃高压,30min灭菌后使用
③Al(OH)3能诱导老年痴呆症
④配制好的疫苗应摇匀后使用
2、明矾佐剂(例:
破伤风明矾沉降类毒素)
制备:
明矾10g+dH2O→10%明矾溶液(明矾佐剂)
使用:
500ml灭活菌液加10ml10%明矾佐剂(溶液)
(2)油乳佐剂
1、弗氏不完全佐剂(FIA)
液体石蜡油3份+无水羊毛脂1份+PH7.2PBS4份→混合,116℃30min
FIA:
Ag=1:
2、弗式完全佐剂(FCA)
FIA加入牛结核分支杆菌(冻干粉)10mg/ml混匀
FCA:
1△FIA和FCA为免疫佐剂(实验用)
3、白矿油佐剂(用于病毒疫苗)
油相:
①320ml10号白矿油(杭州杭联化工有限公司)
②7g硬脂酸铝
③22~24ml司本-80(span-80)
④6ml吐温-80(Tween-80)
把②加入①煮溶,冷却后,再加③、④
水相:
灭活病毒液150ml+6ml吐温-80
制备油相:
水相=7:
3或6:
4(高速搅拌,3min)
(3)蜂胶佐剂
30g蜂胶(研磨成粉)+500ml95%酒精→浸泡一周→4层纱布过滤→过滤液(佐剂)
500ml灭活菌液加15ml蜂胶佐剂
特点:
①没有什么毒副作用
②吸收快
③产生Ab快(7天产生保护性抗体)
④抗体维持时间不长,不超过两个月
第4章真快冷冻干燥技术(冻干)
1、真空冷冻干燥技术
将含有大量水分的生物活性物质冻结成固体,在真快条件下,利用减压升华原理,达到水分去除的目的。
2、共熔点及其测定方法
1、共熔点:
使溶液或悬浊液完全凝固的瞬间温度
2、测定方法:
不同的生物制品有不同的共熔点,是依制品中组成成分而异。
我们在进行冷冻干燥前,必须对其熔点进行测定,其熔点测定是根据导电溶液的电阻与温度相关关系的原理来测定,当温度降低时,电阻增大,当降到共熔点时电阻即出现突然增大的现象,此时的温度为该物质的共熔点。
下面是一些保护剂的共熔点。
表2-4一些物质的共熔点
物质
共熔点
0.85%氯化钠溶液
10%蔗糖溶液
40%蔗糖溶液
10%葡萄糖溶液
2%明胶、10%葡萄糖溶液
2%明胶、10%蔗糖溶液
10%明胶、10%葡萄糖、0.85%氯化钠溶液
脱脂牛乳
马血清
-220C
-260C
-330C
-270C
-320C
-190C
-360C
-260C
-350C
3、冻干程序
1、冻干前准备
①将冻干物品分装,用广口瓶
②盛装量1/5~1/4,厚度不超10mm
③冻干物品含干物质量达4~25%
2、预冻
①将冻干物品置于-40℃
②预冻时间3~4小时
3、干燥
①升华干燥阶段
A在冷结条件下,利用减压升华原理将水分去除
B可除去85%以上的水分
C升华干燥时间与物质品种有关,凡共熔点高的物质升华时间短而易于干燥,共熔点低的物质升华时间要长且不易干燥
②解吸干燥阶段
A利用加热方式,将剩余水分去除
B加热至25~30℃
C压强维持25~30Pa
4、加塞压盖
4、冻干物品的特点
1、多孔、疏松的结构物质,加水后能迅速溶解
2、在真空冷冻下干燥,对热敏生物活性物质影响很小
3、冻干后体积基本保持不变
4、因水分去除,微生物处于休眠状态,便于保存和运输
第5章灭活剂
1、灭活的概念
利用某些理化方法来杀死微生物和破坏毒素的生物学活性,使其失去致病性、繁殖力或脱去毒性,但其免疫原性基本保持不变
2、灭活的方法
1、物理方法:
紫外线、射线、温度、超声波等(基本不用)
2、化学方法;
化学灭活剂(甲醛、结晶紫、乙烯亚胺类衍生物)
3、常用化学灭活剂
1、甲醛
①最古典、应用范围最广的灭活剂
②40%甲醛为福尔马林
③甲醛遇光后发生聚合,灭活效能会降低
④不能用于猪瘟和口蹄疫病毒灭活
⑤细菌大都用0.3%甲醛灭活
病毒0.05%~0.2%甲醛灭活
⑥可用焦亚硫酸钠中和过量甲醛
2、结晶紫:
猪瘟病毒专用灭活剂
①口蹄疫病毒专用灭活剂
②常用乙烯亚胺类衍生物:
二乙烯亚胺(BEI)、2-乙基乙烯亚胺(EEI)
③用量:
0.05%(终浓度)
④加入硫代硫酸钠中和过量的乙烯亚胺类衍生物
4、缩水甘油醛(用于ND灭活优于甲醛)
4、影响灭活效果的因素
1、被灭活物品的种类与特性(细菌、病毒、外毒素等)
2、灭活剂的种类与特性
3、灭活剂的含量与浓度,在一定范围内,浓度和含量越高,灭活效果越好
4、灭活的温度与时间,在一定范围内,灭活温度越高,时间越长,灭活效果越好,一般情况下,37℃灭活24小时
5、有机物存在影响灭活效果:
有机物(组织、血清等)存在下,灭活剂需加大用量,延长灭活时间
第6章兽医生物制品生产基本技术
1、菌毒种的选育与保存
(1)菌毒种的分类
1、按菌(毒)种的毒力分类:
强毒、弱毒菌毒种
2、按用途可分为:
①生产用菌毒种②检验用菌毒种③工具用菌毒种
(2)菌(毒)种的基本要求
①具有良好的免疫原性和反应原性
②具有可靠的安全性(针对弱毒(菌)种而言)
③具有典型的生物学特性
④具有遗传稳定性和一致性
⑤历史及有关资料清楚完整
(3)菌毒种选育
1、强毒(菌)毒种:
分离、纯化
2、弱毒(菌)毒种:
①人工致弱:
细菌(物理、化学)、病毒(生物方法)②自然筛选
(4)菌(毒)种保存
①菌(毒)种冻干保存
②菌种置于4~8℃保存,毒种置于-15~-20℃保存
③标准菌(毒)种由中国兽药监察所保管、分发
二、兽医生物制品的生产基本程序和原则
(一)细菌性疫苗生产的基本程序与原则
1、生产原则:
①安全②高效③方便
2、细菌性疫苗生产的基本程序
①菌种
②培养基a、牛肉汤:
牛肉(去除脂肪、筋膜),绞碎、加入dH2O(按1:
2(水)比例),煮沸30min,过滤(4层纱布、滤纸)、补足失水,加入1~2%蛋白胨,0.5%NaCl,煮溶,用1NNaCl调PH值至7.2~7.4,再加入0.1%的磷酸氢二钠,121.3℃(15磅)30min灭菌
b、营养牛肉汤:
牛肉汤+2%G+2%小牛血清+适量VB族
c、鲜血琼脂:
普通营养琼脂+3~5%脱纤血(兔血)(高温后,温度至45℃)
d、普通营养琼脂:
牛肉汤+1%琼脂粉121.3℃30min
e、巧克力琼脂+3~5脱纤血(70~80℃)
③菌种传代
第一代:
复苏37℃18~24小时
第二代:
整齐划一青壮年快速生长期37℃10~12h
④细菌的大量增殖
a、逐级培养:
菌种5ml(37℃18~24h)5ml(37℃10~12h)500ml(37℃24~30h灭活苗10~16h弱毒苗)
b、培养温度:
37℃特例:
破伤风梭菌34℃钩端螺旋体29~30℃
c、气体环境
需氧厌氧兼性需氧(有氧>无氧)兼性厌氧
5、弱毒苗生产
37℃培养10~16h收获,加入冻干保护剂、分装、冻干、加塞压盖、贴标签
6、灭活苗生产
37℃培养24~30h收获,加入0.3%甲醛溶液
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