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CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达
CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达
作者:
王伟,汪洪毅,赵会霞,崔中光,李广伦
【摘要】 为了探讨CD133抗原与白血病和骨髓增生异常综合症发病的关系,采用免疫细胞化学方法检测CD133抗原在白血病和MDS中的表达。
结果显示,43例急性白血病患者CD133表达的阳性率为%,急性髓系白血病组CD133的表达与对照组间的差别有统计学意义,慢性髓系白血病的CD133表达阳性率与对照组间的差别无统计学意义。
9例MDS患者中有5例呈CD133表达阳性,阳性率为%,与对照组相比无显着差异。
在所有白血病患者中CD34+患者的CD133表达率高于CD34-患者,且差异有统计学意义。
CD133表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶水平无显着相关性。
结论:
AML患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照,CD133表达与CD34表达有相关性。
CD133高表达可能是急性白血病不良预后的一个因素。
【关键词】白血病;MDS;CD133;CD34;预后
ExpressionofCD133inBoneMarrowCellsofPatientswithLeukemiaandMyelodysplasticSyndrome
AbstractToexploretherelationshipbetweentheexpressionofCD133andpathogenesisofleukemiaandMDS,immunocytochemistrymethodwasusedtoexaminetheexpressionofCD133inbonemarrowcellsofpatientswithleukemiaandMDS.TheresultsshowedthatthepositiverateofCD133in41acuteleukemiapatientswas%.TheexpressionofCD133inAMLpatients(16/29,%)wassignificantlyhigherthanthatincontrolgroup(2/15,%).TherewasnosignificantdifferenceinCD133expressionbetweenCMLandcontrol positiverateofCD133in9patientswithMDSwas%(5/9).TherewasnosignificantdifferencebetweenMDSandnormalcontrol.TheexpressionofCD133inallleukemiacellswithCD34+washigherthanthatinleukemiacellswithCD34-,andtherewassignificantdifferenceinexpressionofCD133betweenthem().TheexpressionofCD133hadnorelationshipwiththeclinicalprognosticfactorssuchassex,age,thepercentageofleukemiccellsinperipheralbloodandinbonemarrow,WBCcounts,hemoglobinconcentration,plateletcountsandLDHlevel.ItisconcludedthattheexpressionofCD133inbonemarrowcellsofpatientswithAMLishigherthanthatincontrolgroup.TheexpressionofCD133issignificantlycorrelatedwiththeexpressionofCD34.ThehighexpressionofCD133maybeanadverseprognosticfactorinacuteleukemia.
Keywordsleukemia;MDS;CD133;CD34;prognosis
JExpHematol2007;15(3):
470-473
CD133曾被认为仅仅是一种造血干/祖细胞表面标记。
1997年Yin等[1]首次报道了AC133抗原并成功制备了能识别该抗原的单克隆IgG抗体,2000年6月第七届人类白细胞分化抗原工作组会议(ILDAW)将此抗原命名为CD133[2]。
文献报道,CD133+CD34+的造血干/祖细胞较之CD133-CD34+造血干/祖细胞有更强的多系分化潜能[3],从而为白血病的造血干细胞移植提供新的策略。
本研究通过免疫细胞化学方法分析CD133抗原在白血病和骨髓增生异常综合症中的表达及其与CD34的协同表达以了解其临床意义。
材料和方法
标本采集与处理
急性白血病患者43例,其中初治患者36例,治疗后复发患者7例;AML29例,ALL14例。
AL中男22例,女21例,年龄12-80岁。
慢性白血病患者9例,其中男8例,女1例,年龄34-82岁。
骨髓增生异常综合症患者9例,其中男6例,女3例,年龄15-76岁。
以上患者均为2004年3月20日-8月10日在我院血液病研究室确诊的病人。
另取非血液系统恶性疾病患者15例作为对照,对照组与病例组在性别、年龄上无显着差异。
中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(3)CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达取以上患者骨髓2ml,常规肝素抗凝,淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,895×g离心20分钟。
离心后液体分3层,上层为血浆,中层为分层液,下层为红细胞,在上层与中层交界面呈现浑浊带,此层含有大量单个核细胞。
用毛细吸管轻插至白膜层,沿管壁周缘吸出界面层细胞,移入另一无菌刻度离心管中。
用5倍以上体积的PBS洗涤,671×g离心10分钟,去上清液。
重复洗涤3次,然后计数活细胞,使细胞浓度控制在107/ml左右。
用离心涂片机离心涂片,晾干,冷丙酮固定,-20℃冰箱保存备用。
主要试剂
CD133单克隆抗体购自R&D公司,CD34单克隆抗体购自Zymed公司,SPkit试剂盒购自天津灏洋公司和北京中杉金桥生物技术有限公司,浓缩型DAB试剂盒购自天津灏洋公司。
方法
免疫细胞化学方法严格按试剂盒说明书进行。
阳性细胞判定标准
阳性细胞的胞膜呈棕色或棕黄色颗粒,观察者记数200个细胞,结果用半定量记分方法判定,即①按阳性细胞占细胞总数的多少分为0-3级,0级:
阳性细胞为0;1级:
阳性细胞<25%;2级:
阳性细胞<50%;3级:
阳性细胞>50%;②按着色细胞染色强弱分为0-3级,0级:
弱;2级:
中;3级:
强。
然后以两项积分之和判断阳性程度,"0-2分"为阴性染色,"3-6分"为阳性染色。
统计学处理
两样本率的比较采用χ2检验。
结果
急性白血病患者骨髓细胞CD133表达
43例AL患者CD133表达的阳性率为%。
29例AML患者中,16例CD133表达阳性,阳性率为%,其中AMLM11例,AMLM25例,AMLM31例,AMLM4/M57例,MDS转化的AML2例(2/2)。
14例ALL患者中有6例CD133表达阳性,8例CD133表达阴性,CD133表达的阳性率为%。
AML组CD133的表达与对照组间的差别有统计学意义,AML与ALL组之间CD133表达的差别无统计学意义()。
对AML各FAB亚型CD133表达率的差异的统计学分析显示,M4/M5亚型的CD133表达率高于M3,差异有统计学意义,其余各亚型之间的差异均无统计学意义。
初治组CD133表达阳性率低于AL治疗后复发组CD133表达阳性率,但差异无显着性。
慢性白血病患者骨髓细胞CD133表达
9例慢性白血病患者中,6例CML患者中CD133表达阳性者2例,2例CLL和1例CNL中均未检测到CD133表达。
但CML阳性率与对照组间的差别无统计学意义。
MDS患者骨髓细胞CD133表达
9例MDS患者中有5例CD133呈阳性,4例为阴性,阳性率为%,与对照组间的差别无显着差异。
患者骨髓细胞CD133与CD34的协同表达
所有病例CD34阳性与CD34阴性患者CD133表达情况见附表。
Table.ExpressionofCD133inbonemarrowcellswitheitherCD34positiveandCD34negativeinpatientswithacuteleukemiaandMDS
CD133positiveCD133negativeCD34positive23*16CD34negative616*,comparedwithCD34negativepatients.
对白血病患者骨髓细胞分析发现,在CD34+与CD34-患者均可表达CD133,在所有白血病患者中CD34+组的CD133阳性表达率高于CD34-患者,且差异有统计学意义,但分析显示CD34+AML与CD34-AML病人CD133表达率的差异无显着性,在ALL组也如此。
此外,我们的研究分析还表明,骨髓细胞CD133的表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶高低无显着相关性。
讨论
CD133是一种非常保守的蛋白,从线虫到人都有很高的同源性[4]。
CD133在正常及异常造血和非造血组织中均有表达,随着细胞的分化成熟其表达减弱、消失。
研究发现,两个人体视网膜母细胞瘤细胞系、WERIRb1和一个畸胎瘤细胞系NT2的CD133表达为阳性,AML来源的细胞系MUTZ2是第一个已知的人CD133+造血细胞系[6]。
1997年,Miraglia等[5]首次报道急性白血病患者CD133的表达情况,11例CD34+患者中CD133高表达3例,弱表达4例。
之后,Horn等[7]对30例AML患者CD133的表达进行了检测,结果9例CD133bright,15例CD133dim,6例CD133-,与Miraglia不同的是,CD133在AML包括原发性和MDS转化的继发性白血病各个FAB亚型中均有表达,而且表达强弱程度与FAB亚型无关。
与Horn的报道类似,我们的研究结果显示,CD133表达在AML及ALL患者骨髓细胞均可阳性,而在AML及ALL组CD133阳性表达率均高于对照组,且AML组与对照组间的差异显着,但ALL组与对照组间差异无显着性,AML组与ALL组间CD133阳性表达率的差异也无统计学意义。
考虑到ALL组病例数较少,故不能判定CD133在ALL的表达无意义,有待增加病例数作进一步研究。
与Miraglia等[5]不同的是,在我们的研究中CD133可表达于各FAB亚型,各亚型表达率M1为100%,M2为%,M3为%,M4/M5为%,这一点与Horn等[7]研究类似。
经统计学分析M4/M5病例组的CD133表达率高于M3病例组,且差异有统计学意义,其余各亚型之间的差异均无统计学意义
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- CD133 抗原 白血病 MDS 骨髓细胞 中的 表达