分子实验室细胞实验室常用配方Word文件下载.docx
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2H2O37.2g
ddH20定容到1L
●封闭液
脱脂奶粉5g
叠氮钠0.02g(现配现用时可不加)
PBS定容到100mL
●染色液(室温)
1L
500ml
200ml
100ml
甲醇
500mL
250
100
50
乙酸
100mL
20
10
R250考马斯亮蓝
0.5g
0.25g
0.1g
0.05g
H20
400mL
200
80
40
●脱色液:
(室温)
甲醇165mL
乙酸50mL
H20785mL
●8.8Buffer:
(调pH至8.8,4度保存)
Tris
18.17g
36.34g
10%SDS
4mL
8ml
ddH20
定容至100mL
●6.8Buffer:
(调pH至6.8,4度保存)
6.06g
12.12g
●转移缓冲液(10×
transbuffer):
(常温保存)
2L
甘氨酸
144g
288g
Tris粉末
30.3g
60.6
定容至1L
定容至2L
使用时甲醇200mL
转移缓冲液(10×
)100mL
ddH20700mL
●电泳缓冲液(10×
)(runningbuffer):
10g
20g
●10Х)TBS:
(常温保存)
NaCl80.0g
Tris粉末24.2g
ddH20定容至1L
●TBST(1X)
TBS(1X)500ml
Tween20500μl
●Strippingbuffer(可反复利用)温老师组配方
10%SDS10ml
Β-巯基乙醇350μl
Tris-HCI(pH6.8)6.25ml(6.06加到50mL水)
加入ddH2O至50mL
●Strippingbuffer(可反复利用)郭老师给配方
甘氨酸15g
SDS1g
Tween201ml
ddddH2O1L
作这个buffer洗20min,然后用PBST洗3次,再重新封闭孵抗体。
(二)细胞和细菌培养基、抗生素
●LB培养基(当天灭菌后放4度存放)
1000ml
300ml
250ml
200ml
氯化钠
5g
3g
2.5g
2g
蛋白胨
酵母提取物
1.5g
1.25g
定容至1000ml
定容至500ml
定容至300ml
定容至250ml
定容至200ml
●LB平板:
(当天灭菌后倒平板,放4度存放)
琼脂
15g
7.5g
4.5g
3.725g
●SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化钠0.5g
1mol/L氯化钾2.5ml
用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁
●1MIPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3))溶液
IPTG粉末2.383g
ddH20定容到10ml
用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
●Amp+(50mg/ml)
Amp+粉末50mg
ddH201ml
分装保存于-20度,使用时按1000:
1的比例用
●Kana+(50mg/ml)
Kana+粉末50mg
●胰酶:
抽滤,长期保存可放负20度
粉末0.25g
EDTA0.02-0.03g
1XPBS100ml
●高糖DMEM培养基:
抽滤保存在4度
粉末全部
碳酸氢钠3.7g
ddH20定容到1L(用盐酸调pH值到:
7.2-7.4)
●G418母液(100mg/ml)用0.22μM滤菌,分装存于-20度
粉末1g
PBS10ml
●zeocin母液(100mg/ml)用0.22μM滤菌,分装存于-20度
ddH2O10ml
●Blasticidin(100mg/ml)用0.22μM滤菌,分装存于-20度
粉末0.3g
(三)利用His-tag从细菌中纯化蛋白配方
透析液配方
母液浓度
量取体积
Tris-HCl(pH:
8.0)
20mM
1M
20ml
NaCl
4M
5ml
MgCl2
2mM
2ml
DTT
1mM
1ml
甘油
50%
500ml
ddH2O
472ml
●超声裂解液(lysisbuffer):
2011年做蛋白纯化时用
Na3PO4(164)8.2g(50mM)
NaCl(58.5)17.55g(300mM)
加800mLddH2O溶解,用2MNaOH或者2MHCL调pH到8.0,再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。
●洗涤液(washbuffer):
2011年做蛋白纯化时用
Na3PO48.2g(50mM)
NaCl17.55g(300mM)
咪唑0.681g(10mM)
加800mLddH2O溶解,根据开始的pH用2MNaOH或者2MHCL调pH到8.0,调好pH再定容到1升
●洗脱液(elutionbuffer):
2011年做蛋白纯化时用
咪唑17.025g(250mM)
加800mLddH2O溶解,根据开始的pH用2MNaOH或者2MHCL调pH到8.0,调好pH再定容到1升)
PrepEase®
Histidine-TaggedProteinPurificationKits-HighSpecificity
●8XLEWBuffer(Lysis-Equilibrium-WashBuffer):
(室温保存)pH:
8.0
NaH2PO4.2H2O6.2404g(400mM)
NaCl14.0256g(2.4M)
dH20定容到100mL(调节pH:
●4XElutionBuffer:
NaH2PO4.2H2O3.1202g(200mM)
NaCl7.0128g(1.2M)
咪唑6.81g(1M)
dH20定容到100mL(调节pH:
●EDTA:
(100mM)
EDTA2.923g
dH20定容到100mL
●NiSO4:
NiSO4.6H2O2.6285g(100mM)
dH20定容到100mL
●溶菌酶:
(使用时1ml溶液加入20ul)
粉末50mg
ddH201mL
(四)利用His-tag从细胞中富集蛋白配方
●磷酸钠缓冲液
按图示比例混合0.2MNa2HPO4溶液和0.2MNaH2PO4溶液,得到两种缓冲液,pH分别调节成为8.0和6.3.
pH
0.2MNa2HPO4体积/mL
0.2MNaH2PO4体积/mL
6.3
11.25
38.75
47.35
2.65
●细胞裂解液(最好新鲜配制,当天使用)
Celllysisbuffer
配10ml
配15ml
配20ml
配40ml
配30ml
盐酸胍(g)
6M
5.7318
8.5977
11.4636
22.9272
17.1954
Tris(g)
10mM
0.012114
0.018171
0.024228
0.048456
0.036342
pH8.0buffer(ml)
100mM
5
7.5
15
(注意胍盐是有害试剂注意这里用的磷酸钠缓冲液pH必须8.0!
)
(注意二价阳离子螯合剂,还原剂,会导致镍从树脂上的洗脱)
本实验的所有试剂中EDTA浓度不得超过1mM,DTT浓度不超过5mM,巯基乙醇浓度不超过20mM。
●pH8.0的洗脱溶液(最好新鲜配制,当天使用)
pH8.0的washbuffer
配100ml
配50ml
Urea尿素(g)
8M
48.048
24.024
9.6096
19.2192
14.4144
0.12114
0.06057
pH8.0Na3PO4buffer(ml)
25
TritonX-100(ul)
0.1%(vol/vol)
30
b-mercaptoethanol.巯基乙醇(ul)
5mM
35
17.5
7
14
10.5
●pH6.3washbuffer(现配现用)
pH6.3的washbuffer
pH6.3Na3PO4buffer(ml)
注意使用pH为6.3的磷酸缓冲液,而且pH不得低于6,pH要精确配制,非常重要!
Histidine的质子化,会导致镍树脂上的解离,所以要精确测定pH,并且以pH试纸校对,而不是仅仅依靠pH仪器。
●洗脱溶液
200mMImidazole咪唑,
5%(wt/vol)SDS,
150mMTris-HCl(pH6.7)
30%(vol/vol)丙三醇
720mM巯基乙醇
0.0025%(wt/vol)溴酚蓝
注意wt/vol是质量/体积之比例,而vol/vol是体积:
体积的比例。
(五)双向电泳溶液配制
●水化上样缓冲液(I):
尿素(8M)4.805g
CHAPS(4%)0.4g
DTT(65mM)0.098g(现加)
Bio-Lyte0.2%(w/v)50μI(40%现加)
溴酚蓝0.001%10μI(1%溴酚蓝)
MilliQ水定容到10mI,分装成10小管,-20度冰箱保存
●上样缓冲液(II):
尿素(7M)4.2g
硫脲(2M)1.52g
Bio-Lyte0.2%(w/v)50μI(40%现加)
溴酚蓝0.001%10μI(1%溴酚蓝)
●上样缓冲液(III)
尿素(5M)3g
CHAPS(2%)0.2g
SB3-10(2%)0.2g
DTT(65mM)0.098g(现加)
●平衡缓冲液母液
尿素(6M)36g
SDS(2%)2g
Tris-HCI(pH8.8)0.375M25mI(1.5M)
甘油(20%)20mI
MilliQ水定容到100mI,分装10管,-20度保存
●胶条平衡缓冲液I(充分混匀,用时现配)
胶条平衡缓冲液母液10mI
DTT0.2g
●胶条平衡缓冲液II(充分混匀,用时现配)
胶条平衡缓冲母液10mI
碘乙酰胺0.25g
●低熔点琼脂糖封闭液
低熔点琼脂糖0.5%0.5g
Tris(25mM)0.303g
甘氨酸(192mM)1.44g
SDS(0.1%)1mI(10%SDS)
溴酚蓝(0.001%)100μI(1%溴酚蓝)
MilliQ水定容到100mI,加热溶解至澄清,室温保存
(六)同位素实验相关试剂
●BERreactionbuffer(10ml,分装于-20度)
配10ml母液
Hepes-KOH(pH7.8)
238.31
1M称2.3831g
0.4mI
40mM
KCI
74.55
1.4M称1.0437g
0.5mI
70mM
154.25
1M称1.5425g
10μI
1mM
EDTA·
2Na
372.23
1M称3.7223g
5μI
0.5mM
MgCI2·
6H2O
203.30
1.4M称2.8462g
50μI
7mM
ATP
100mM
0.2mI
8.835mI
●2XligaseIactivitybuffer
母液
配10ml取
Hepes(pH7.5)
60mM
0.6ml
KCl
16mM
0.16ml
0.02ml
BSA
200μg/ml
2mg
至10ml
●2XAnnealingbuffer
Tris-HCI(pH7.5-8.0)20mM
NaCI100mM
EDTA2mM
●2X同位素反应buffer(polymerasebeta聚合反应)
10ml
Tris-HCl
100mM(pH8.0)
1ml
0.2ml
4mM
0.04ml
40mM
0.4ml
20%
●2XAPE1活力鉴定buffer
Trls-HCL(pH8.0)
100mM
MgCl2·
10mM
0.1ml
2ml
●同位素电泳上样buffer(2X)(100ml)
取
甲酰胺染料
90%
90ml
Na2
30mM
111.669gX10-2
溴酚蓝(17kd)
0.02%
0.02g
二甲苯蓝
●10XTBEbuffer
Tris0.89M26.945g
硼酸(pH8.3)0.89M13.757g
Na2EDTA20mM1.86115g
●15%DenaturedDNAPAGEgel(100ml)
10XTBE15ml
40%,19:
1gelstock37.5ml
ddH2O16ml
Urea48g
存放在4度,使用前加200μl10%AP和20μlTEMED
●20%DenaturedDNAPAGEgel
1gelstock50ml
ddH2O3.5ml
Urea(尿素)48g
存放于4度,使用前取35ml混合液加140μl10%AP和140μlTEMED
●硼氢化钠(1M)37.83
粉末0.7566g
ddH2O10ml
●2XdRPbuffer(分装保存于负20度)
203.30
0.2ml
0.4ml
0.04ml
8.36ml
●DNAbindingbuffer
配250ml
Tris-HCI(pH8.0)
12.5
58.3
1.4625g
6H2O
203.3
0.51g
Glycerol
10%
25ml
NP-40
0.25ml
(七)酶切打质谱相关配方
NH4HCO3(79.06)100mM
粉末0.7906g
ddH2O定容到100ml,pH7.8-8.0
DTT(154.25g)100mM
粉末0.01542g
ddH2O1ml
IAA(碘乙酰胺,184.96)200mM
粉末0.036992g
(八)其他配方
●2XHEPES-缓冲液(潘老师给的配方做细胞转染,需要调pH为7.05,用0.22μM滤菌,分装存于-20度)。
58.5
280mM
1.6g
KCI
0.074g
Na2HPO4
141.96
1.5mM
0.021g
葡萄糖
180.06
12mM
0.21g
HEPES
1.19g
ddH20
定容到80ml
●CaCI2·
2H2O(2M)147.02潘老师给的配方做细胞转染
粉末5.88g
ddH2O20ml
0.22μm滤菌,分装存于-20度
●5XTBS(1L体系)(在利用flagtag带磁珠的抗体富集蛋白时用)
Tris-HCI(250mM)30.275g
NaCI(750mM)43.875g
ddH20定容至1L(调节pH为7.4)
●MMS甲磺酸甲酯(Sigma密度为1.3g/mI,M=110.13)
1M体系:
液体85μIddH2O915μI
●Hochest
母液:
1mg/ml,避光存于-20度
工作液:
母液按1:
1000稀释
●TritonX-100(0.2%)
TritonX-1002μl
●2XHDMbuffe(II)曾用于LSD1去甲基化
Tris(pH8.5)
1%
0.1g
5%
ddH2O
6.9ml
100mmol/LPMSF(苯甲基磺酰氟):
分成贮存于-20℃。
PMSF粉末1.742g
异丙醇/甲醇定容到10ml
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。
凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
●5mol/L氯化钠(NaCl):
氯化钠29.2g
ddH20定容到100ml
●2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):
X-gal25mg
二甲基甲酰胺(DMF)1ml
用铝箔包裹装液管,贮存-20℃。
●DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
●加100ulDEPC于100ml水中,使D
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- 分子 实验室 细胞 常用 配方