新版GMP培养基适用性检查验证方案Word格式.docx
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部门姓名职务
验证小组成员
备注:
验证方案审批表
审批
负责人签名
日期
备注
程序
部门
起草
审核
批准负责人
1.概述
通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查,根
据特性制订检验方法和检验条件,按制定的方法进行试验,根据验证结果判断是否符合验证
标准。
若符合,按验证的方法和条件进行微生物限度检查;
若不符合,重新建立制订检验方
法和检验条件,再进行验证,直至验证结果符合设立的验证标准。
2.验证目的及范围
为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检
查法的规定要求,以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
3.验证风险评估
对于本次验证的执行进行了如下的风险分析:
严重程度
可能性
可检测
风险优先级
RPN=S×
P×
D
S
P
1
低
高
RPN≤7
可以接受,无需采取措施
2
中
16≥RPN≥8
一定程度上接受,但应按风险优先级
采取措施尽可能降低
3
RPN>16或严
不能接受,尽快采取措施降低
重程度=4
4
关键
4极高
极低
步骤/单
可能原因/
R
危害
现行控制
需采取措施
元
程序失败
N
验证部分项目
方案培训不
严格执行经批准
确认按照批准的方案
到位,方案的
培训
出现偏差或漂
的验证报告进行3
18
培训,培训者均熟练掌
执行者不熟
移
培训,并考核合格
握所培训内容。
悉方案内容
未遵循培养
制定培养基适用
确认培养基适用性检
基适用性检
性检查检查操作
检验过
查检查操作规程已制
查检查操作
规程,并对规程及
未达到设定标
定并批准,确认人员已
程操作
规程,未严格
不当
准,验证失败。
设立的验证方法
培训;
确认操作规程适
遵循方案规
培训,按规程及方
用性。
定方法。
案要求进行操作。
4.验证前准备
验证人员培训:
验证报告起草人有责任在方案批准后(且在验证实施前)对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒,以确保其对试验的结果没有影响。
仪器与器具:
恒温培养箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、无菌移液管。
5.验证内容
测试环境条件要求
所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行,其全过程严格遵守无菌操作,能防止微生物污染。
计数培养基
验证用菌种及培养基:
来源:
食品药品检验所
菌落计数用菌种
菌种名称
内控编号
大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC
(B)44102]
E-
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureus)[CMCC(B)26003]
S-
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC
(B)63501]
B-
白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]
C-
黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]
A-
注:
编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。
培养基及其制备方法:
取市售的脱水培养基,分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三
角烧瓶中,然后加塞灭菌,在实验前加温熔化备用。
培养基名称
培养基批号
配制日期
有效期至
营养琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
营养琼脂对照培养基
玫瑰红钠琼脂对照培养基
菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至
10ml营养肉汤培养基中,
30~35℃培养18~24小时,取此培养液1ml,加%无菌氯化钠溶液至
10ml,采用10倍递增
稀释法,稀释至10-6~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。
接种白色念珠菌的新鲜培养物至
10ml改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时,取此
培养液1ml,加%无菌氯化钠溶液至10ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-6~10-7,使菌
数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,23~28℃培养5~7天的用3~5ml
含%(ml/ml)聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。
然后,吸出孢子悬液(用管口
带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管)至无菌试管中,取1ml加含%(ml/ml)
聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液至10ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-4~10-6,制成每
1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液备用。
验证方法:
试验组:
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml,分别注入无菌平皿中,立
刻倾注营养琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀,凝固,置30~35℃培养48
小时,计数、观察菌落情况;
取白色念珠菌、黑曲霉各1ml,分别注入无菌平皿中,立刻倾
注玫瑰红钠琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀,凝固,置23~28℃培养72
小时,计数、观察菌落情况。
测定结果见附件2。
对照组:
刻倾注营养琼脂对照培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀,凝固,置30~35℃培养
48小时,计数、观察菌落情况;
取白色念珠菌、黑曲霉各1ml,分别注入无菌平皿中,立刻
倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀,凝固,置23~28℃培
养72小时,计数、观察菌落情况。
菌回收率计算:
试验组的菌回收率(%)=(试验组平均菌落数/对照组平均菌落数)×
100%
判定标准:
菌回收率均应不低于70%,且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
结论:
对计数培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。
控制菌培养基适用性检查:
验证用菌种:
验证用菌种
aureus)[CMCC(B)26
003]
取市售的脱水培养基,分别按照规定的方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中,然后加塞灭菌。
在实验前加温熔化备用。
培养基名称培养基批号配制日期
胆盐乳糖培养基
MUG培养基
乳糖胆盐发酵培养基
胆盐乳糖对照培养基
MUG对照培养基
乳糖胆盐发酵对照培
养基
菌液制备:
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至
10ml营养肉汤培养基中,30~
35℃培养18~24小时,取此培养液1ml加%无菌氯化钠溶液至
10ml,采用10倍递增稀释法,
稀释至10-4~10-6,使细菌数约为
500~1000cfu/ml。
促生长能力培养基:
取大肠埃希菌各,分别涂布于胆盐乳糖培养基、MUG培养基和乳糖胆盐
发酵培养基及其对照培养基上,在30~35℃培养18小时,观察菌落情况。
测定结果见附件3。
抑制能力培养基:
取金黄色葡萄球菌各,分别涂布于胆盐乳糖培养基和乳糖胆盐发酵培养基
及其对照培养基上,在30~35℃培养18小时,观察菌落情况。
指示能力培养基:
取大肠埃希菌各,分别涂布于乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上,在
30~35℃培养18小时,观察菌落情况。
试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征应一致。
试验菌均不得生长。
试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应一致。
对控制菌培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。
6.变更和偏差处理:
验证过程中如果出现偏差和变更,应立即通知验小组对偏差和变更进行详细记录,分析
偏差产生的根本原因并提出解决方法。
所有偏差和变更得到有效处理后,验证方可进入下一
步骤。
偏差处理单和变更单经过批准后其原件必须附在验证报告中。
见附件4。
7.验证结果评定及结论:
质量部负责收集各项验证试验结果,起草验证报告,报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审,做出验证结论,发放验证证书,确认培养基适用性检查情况。
见附件5。
8.拟定再验证周期:
验证小组根据验证情况,拟定再验证周期,报验证领导小组审批。
9.会审及批准
会审:
批准:
附件1
培训人员记录表
部门培训人员签名签到日期
培训师签名日期
附件2
结果
试验菌
大肠埃希
菌
金黄色葡
萄球菌
枯草芽孢
杆菌
白色念珠
黑曲霉
验证结果
评定
营养琼脂计数培养基
营养琼脂营养琼脂对照
回收率菌落观察情况
菌落数菌落数
11
22
平均平均
玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂对照
操作人日期
复核人日期
附件3
项目
胆盐乳糖培养
基
胆盐乳糖对照
MUG对照培养
乳糖胆盐发酵
对照培养基
验证结果评定
控制菌检查用培养基
促生长能力抑制能力指示能力
——
附件4
偏差处理与变更记录
验证项目名称验证项目编号
偏差说明:
可能的原因:
偏差分类:
□重大□小
理由:
采取措施:
(如需要另附文件)
结果:
建议(如需要另附文件)
□接受偏差
□不接受偏差
附件5
验证证书
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
根据《药品生产质量管理规范》(2010年版)要求,对
验证。
经本公司有关部门进行验证审查,结果符合验证要求,批准使用。
特发此证。
验证项目名称:
验证方案编码:
验证完成日期:
有效期:
1.培养基适用性检查应在当前验证条件下使用,使用条件发生变更,
应报验证领导小组审核,必要时重新验证。
2.培养基适用性检查应按批准的标准检验和验证。
年月日
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- 关 键 词:
- 新版 GMP 培养基 适用性 检查 验证 方案