玉米粗缩病报技术规范试行稿Word文档格式.docx
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1级
2级
3级
4级
5级
病株率(%)
0.1-5.0
5.1-10.0
10.1-20.0
20.1-30.0
≥30.1
4系统调查
4.1.麦田灰飞虱越冬代和一代成若虫调查
4.1.1调查时间和地点
春季3月下旬起至一代成虫高峰期,每5天调查1次,
4.1.2调查地点
在灰飞虱常年发生量大的稻麦轮作区,选择撒播(套播)、浅旋耕、耕翻等3种不同耕种方式的稻茬麦各一块,每块田面积不少于667m2,固定为系统调查田。
若无稻茬麦,可选择空茬田、草丛等地块,每种类型田3块地。
4.1.3调查方法
每块系统田采用“Z”字型取样,每块田9个点,选用长方形(33cm×
45cm)白搪瓷盘为调查工具,用水湿润盘内壁,每点拍查0.11m2,共查1m2。
在小麦拔节期、孕穗期、齐穗期拍击中下部,乳熟期拍上部,连拍三下,每次拍查计数后,清洗白搪瓷盘,再进行下次拍查。
空茬田、草丛等灰飞虱滋生地块虫量,采用笼罩法进行调查。
用粗铅丝、木条制成长、宽、高各33cm的正方形笼框,四周用白纱布围住,做成笼罩。
仍采用“Z”字型9点取样法,在样点上扣笼后,用棍棒在底部拨动草丛,虫子即跳到纱布上,再观察统计。
统计成、若虫数量,观察成虫性别和若虫龄期(参见附录C),并折算667m2虫量,根据虫量变化动态找出越冬代和一代成虫高峰期,结果记入附录A表A1。
4.2 麦田灰飞虱一代卵量调查
4.2.1调查时间
本地灰飞虱越冬代成虫高峰期后(一般为4月下旬至5月上旬)开始调查,每5天调查一次,连续调查3次。
4.2.2调查方法
在系统调查田内,采用棋盘式取样10点,每点10株。
剥查麦株基部第一至第二叶的叶鞘上,如果下叶枯黄,还应剥查第三叶叶鞘,对光检查较易发现。
调查卵条数、卵粒数,计算百株卵量,观察卵发育进度级别(参见附录D),折算各级别卵所占比例,记录一代卵高峰期,结果记入附录A表A2。
4.3 玉米田灰飞虱虫量调查
4.3.1调查时间
自玉米出苗后至灰飞虱发生初盛期(30-50头/百株),每5天调查一次;
初盛期后,每2天调查一次;
高峰期(雌雄比达到1:
1,一般年份1000头/百株以上),每天调查1次。
4.3.2调查地点
选择菜茬(大蒜、马铃薯、西瓜)或早播半夏玉米田3块,每块田面积不少于667m2,固定为系统调查田。
4.3.3调查方法
在系统调查田内,采用对角线5点取样,玉米出苗后至初盛期,每点查20株;
初盛期后,每点调查10株;
高峰期后每点调查5株。
玉米幼苗期(10叶前)可采用笼罩法进行调查计数,幼苗期后采用目测法调查。
统计虫口数量,计算百株虫量,抽查雌雄比例,结果记入附录A表A1。
5普查
5.1麦田灰飞虱普查
5.1.1调查时间
当麦田系统调查进入灰飞虱一代成虫高峰期时进行1次。
5.1.2调查地点和方法
选择当地具有代表性的不同耕作方式、茬口、品种、播期的麦田30块,按照“4.1.3”中取样方法进行调查。
统计成、若虫数量,并折算为667m2虫量,结果记入附录A表A1。
5.2玉米田灰飞虱普查
5.2.1调查时间
当玉米田系统调查虫量达到始盛期、高峰期和盛末期时各调查1次。
5.2.2调查地点和方法
选择当地具有代表性的不同耕作方式、茬口、品种、播期的玉米田30块,按照“4.3.3”中取样方法进行调查。
统计虫口数量,计算百株虫量,结果记入附录A表A1。
5.3玉米粗缩病病情普查
5.3.1调查时间
玉米大喇叭口期、收获前各调查1次。
5.3.2调查地点和方法
选择当地具有代表性的不同耕作方式、茬口、品种、播期的玉米田30块,每块地对角线5点取样,每点调查20株。
调查玉米植株病株率、严重度,计算病情指数,结果记入附录A表A3。
6带毒率测定
6.1灰飞虱采集
结合麦田灰飞虱普查进行,采集一代灰飞虱成虫或高龄若虫,每块类型田虫量不少于50头,分别测定其带毒率。
6.2带毒率测定
根据酶联免疫吸附原理(参见附录E),采用江苏省农科院斑点免疫法(参见附录F),检查反应类型(带毒灰飞虱呈现阳性反应),记载带毒虫量。
根据公式
(2)计算带毒率。
结果记入附录A表A4。
通过公式
(2)计算带毒虫量:
……………………………………………………………………
(2)
式中:
H——带毒率;
S——带毒虫量;
Z——测定总虫量。
7预报方法
7.1发生期预测
7.1.1一代成虫发生高峰期
依据历期法(卵和若虫历期参见附录G),根据一代灰飞虱卵量和发育程度预测一代成虫发生高峰期。
7.1.2一代成虫迁入玉米田始盛期和高峰期
一般年份,麦田一代成虫发生高峰期即为迁入玉米田始盛期;
始盛期后10天左右(一般小麦收获集中期)为迁入玉米田高峰期。
7.1.3玉米田灰飞虱发生盛期持续时间
自玉米田虫口密度开始达到30-50头/百株始至低于30-50头/百株止,为发生盛期持续时间。
根据6月份气温、降水量、降水天数等气象因子,结合一代发育整齐度、本地历史资料,预测盛期持续时间长短。
7.2玉米粗缩病发生程度预测
7.2.1长期预测
每年3月下旬-4月上旬,越冬代成虫盛发期,结合越冬虫量、发生面积、带毒率等发布长期预报。
7.2.2中期预测
每年4月底-5月初,一代卵孵盛期,结合一代卵量、若虫量、发育整齐度、带毒率、气象预报、玉米播期等发布中期预报。
7.2.2短期预测(警报)
当玉米田灰飞虱达到始盛期时,结合灰飞虱虫量、带毒率、高峰期和盛期持续时间、玉米播期、套作玉米比例、玉米品种抗性、6月份气温、降雨量等因子,采用多种因素综合预测。
或应用逐步回归筛选预测因子,建立预测式进行预测(参见附录H)。
8测报资料收集、汇总和汇报
8.1测报资料收集
玉米和小麦种植面积和主要栽培品种,播种期和各期播种的玉米面积;
当地气象台(站)主要气象要素的预测值和实测值。
8.2测报资料汇总
对麦田和玉米田灰飞虱发生量、玉米粗缩病发生情况进行统计汇总,结发生特点,进行原因分析,记入玉米粗缩病发生防治基本情况记载表(附录A表A.5)。
8.3测报资料汇报
全国区域性测报站每年定时填写玉米粗缩病测报模式报表(见附录B)报上级测报部门。
附录A
(规范性附录)
农作物病虫调查资料表册
玉米粗缩病
( 年)
测报站名盖章
站址
(北纬:
东经:
海拔:
)
测报员
负责人
中华人民共和国农业部
表A1灰飞虱麦田及玉米田成若虫调查记载表
单位
调查日期
(年月日)
作物种类
耕作方式
茬口
品
种
生育期
调查面积(m2)或株数(株)
成虫量(头)
若虫量(头)
667m2虫量或百株虫量(头)
备注(当年越冬代/一代成虫/二代成虫高峰期)
雌
雄
小计
1龄
2龄
3龄
4龄
5龄
……
表A2灰飞虱卵量调查记载表
品种
取样
株数
卵条数
总卵粒数
百株卵量
一级卵比例(%)
二级卵比例(%)
三级卵比例(%)
备注(当年一代卵高峰期)
表A3玉米粗缩病情调查记载表
播期
取样株数
病株数
病株率
各严重度级别病株数
病情指数
备注
1
2
3
4
表A4一代灰飞虱带毒率测定记载表
单位
调查
日期
类型田
取样虫量(头)
带毒虫量(头)
带毒率%
备注
表A5玉米粗缩病发生基本情况
小麦种植情况:
小麦面积(hm2):
耕地面积(hm2):
小麦面积占耕地面积比率(%)
主栽小麦品种:
套种小麦面积(hm2):
套种小麦面积占小麦面积的比率(%):
稻茬小麦面积(hm2):
稻茬小麦面积占小麦面积的比率(%):
玉米种植情况:
玉米面积(hm2):
玉米面积占耕地面积比率(%)
早播(半夏)玉米面积(hm2):
早播(半夏)玉米面积占玉米面积比率(%)
套种玉米面积(hm2):
套种玉米面积占玉米面积的比率(%)
菜茬玉米面积(hm2):
麦田一代灰飞虱发生防治情况:
发生面积(hm2):
占小麦面积的比率(%)
受灾面积(hm2):
占发生面积的比率(%)
成灾面积(hm2):
防治面积(hm2):
其中喷药面积(hm2):
最终发生程度实际损失(吨):
挽回损失(吨):
玉米粗缩病发生基本情况:
占玉米面积的比率(%)
防治情况:
注:
受灾面积,即玉米因粗缩病发生产量损失达到30%的面积;
成灾面积,即玉米因粗缩病发生地块,产量损失达到60%的面积。
附录B
玉米粗缩病发生程度预测模式报表
序号
报表内容
报表程序
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
填报日期
一代灰飞虱麦田成虫量(头/亩)
带毒率(%)
套作玉米田占总玉米田比例(%)
预计玉米播期(月/日)
预计6月上旬平均气温(℃)
30℃以上温度持续天数
预计6月上旬降雨量(mm)
预计6月上旬雨日数(天)
预计6月中旬平均气温(℃)
预计6月中旬降雨量(mm)
预计6月中旬雨日数(天)
预计玉米粗缩病发生程度(级)
填报单位
汇报时间:
5月31日以前
附录C
(资料性附录)
灰飞虱成虫及若虫各龄期形态特征
虫态
体长(mm)
虫体颜色
体态特征
雌虫
长翅型(连翅):
3.5~4.2;
短翅型:
2.1~2.8
黄褐色
头部颜面2条纵沟黑色;
小盾板中央淡黄色或黄褐色;
腹部背面暗褐色、腹面黄褐色;
前翅淡黄褐色,透明,脉与翅面同色,翅斑黑褐色
雄虫
3.5;
2.1
黑褐色
小盾板黑色;
腹部黑褐色;
1龄若虫
1.0
乳白色
无翅芽
2龄若虫
1.2
黄白或淡黄色
体两侧色较深,翅芽不明显
3龄若虫
1.5
灰褐色
第三、四腹节背面各有“八”字形淡色斑,第六至八节背面中央有模糊的浅横带,随着龄期增大,斑纹渐明显,翅芽渐长
4龄若虫
2.0
5龄若虫
2.7
附录D
灰飞虱卵发育级别
级别
卵的颜色
眼点颜色
浅红色
米黄色
红色
紫红色
附录E
酶免疫检测原理
硝酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。
因而,将抗原吸附于硝酸纤维素膜后,就可利用膜作为固相载体进行抗原抗体反应。
当加入抗体后,即可与膜上的抗原结合,然后再加入带有标记物的抗抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。
最后加入标记物相应的底物后,标记物即可与底物作用形成不溶性产物,呈现斑点状着色,从而判定结果。
用于标记的酶:
1.辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP);
2.碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase)。
附录F
灰飞虱携带水稻黑条矮缩病毒免疫斑点检测方法
D1仪器设备与试剂材料
D1.1试剂和材料
试验用水均为蒸馏水,使用的化学试剂未作说明均为分析纯级别。
D1.1.1包被缓冲液:
0.05mol/L,pH=9.6。
称取1.59gNa2CO3和2.93gNaHCO3,加水定容至1000mL,用HCl调pH值至9.6,4℃保存。
D1.1.2磷酸盐Tween20缓冲液:
0.01mol/L,pH=7.5。
称取40gNaCl,1gKCl,1gKH2PO4和15gNa2HPO4,加水定容至5000mL,用HCl调节pH值至7.5,再加入2.5mLTween-20,4℃保存。
D1.1.3磷酸盐缓冲液:
0.02mol/L,pH=7.5。
称取40gNaCl,1gKCl,1gKH2PO4,15gNa2HPO4,加水定容至2500mL,4℃保存。
D1.1.41%脱脂奶粉封闭液:
1g脱脂奶粉加入100mL3.1.2所述磷酸盐Tween20缓冲液中,4℃保存。
D1.1.52%小牛血清蛋白(BSA)封闭液:
小牛血清蛋白(BSA)0.2g加入100mL3.1.2所述磷酸盐Tween20缓冲液中,4℃保存。
D1.1.6辣根过氧化物酶固体显色底物溶液。
6mg的4-氯-1-萘酚加入2mL无水乙醇中,4℃保存备用,使用时加入10mL3.1.2所述磷酸盐缓冲液中,再加入10µ
LH2O2。
D1.1.7多克隆抗体。
水稻黑条矮缩病毒多克隆抗体,效价为1:
10000,-18℃保存。
D1.1.8酶标二抗。
Anti-RabbitIgG-HRP,效价为1:
5000,-18℃保存。
D1.2仪器与设备:
台式离心机(5000r/min);
具盖塑料离心管(200µ
L);
培养皿(直径为90mm);
塑料盒(规格为100mm×
50mm)
D2操作步骤
D2.1检测样品的准备
选择2龄以上单头灰飞虱用于携带水稻黑条矮缩病毒的检测,将灰飞虱置于离心管中,用牙签捣烂,加100µ
L包被缓冲液,离心(5000r/min)3min,取上清液(灰飞虱提取液)备用。
D2.2封闭
预先用铅笔将硝酸纤维素膜(NC)划成5mm×
5mm的正方格,取3µ
L4.1获得的上清液点于NC膜上正方格内(以不超出正方格一半为准);
同时各取3µ
L左右水稻黑条矮缩病毒病汁液(也可用已采用本方法测定为阳性的带毒灰飞虱提取液)和蒸馏水点于膜上预先标记好正方格内,分别作为阳性对照和阴性对照,室温晾干膜;
将干燥的膜置于塑料盒或玻璃培养皿,加入1%脱脂奶粉或2%小牛血清蛋白(BSA)封闭液,要求将膜完全浸没,37℃轻轻摇晃,封闭30min。
D2.3孵育
用镊子压住膜倒弃封闭液,以水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体和封闭液按(1:
20000~1:
40000)比例稀释配制孵育液,将膜完全浸入孵育液,37℃轻轻摇晃,孵育(1~1.5)h;
用镊子压住膜倒弃孵育液,加入磷酸盐Tween20缓冲液,将膜完全浸没,轻轻摇晃,洗膜(3~5)min,用镊子压住膜倒弃洗液,重复洗膜三次。
D2.4二抗孵育
用镊子压住膜倒弃洗液,以辣根过氧化物酶标记的二抗和封闭液按1:
2500比例稀释配制孵育液,将膜完全浸入二抗孵育液,37℃轻轻摇晃,孵育(1.5~2)h,再用镊子压住膜倒弃二抗孵育液;
加入磷酸盐Tween20缓冲液,将膜完全浸没,轻轻摇晃,洗膜(3~5)min,用镊子压住膜倒弃洗液,重复洗膜三次。
D2.5显色
用镊子压住膜倒弃洗液,加入辣根过氧化物酶固体显色底物溶液,37℃静置显色30min;
以蒸馏水冲洗膜,室温晾干。
D2.6结果
显色后首先观察对照的颜色反应,阳性对照应显蓝紫色,阴性对照应不显色,再观察样品的颜色反应,如果显蓝紫色,则认定该头灰飞虱携带水稻黑条矮缩病毒,如果不显色,则认定该头灰飞虱不携带水稻黑条矮缩病毒;
若出现阳性对照不显色或阴性对照显蓝紫色中任一种情况,则应分析原因,并重新进行试验。
附录G
灰飞虱若虫与卵历期
若虫历期:
若虫共5个龄期,温度在22℃-27℃时若虫历期为16天-19天。
卵历期见下表G1:
表G1灰飞虱卵历期表
代次
温度(℃)
17.2
23.1
29.1
28.9
22.4
18.8
历期(天)
20.3
10.6
6.2
7.6
11.1
16.3
附录H
玉米粗缩病流行影响因素
H1.玉米播期
玉米播期主要影响玉米感病生育期(1-6叶龄)与一代灰飞虱成虫迁入高峰期的吻合程度,多地试验表明,适当早播或晚播能使玉米在感病生育期内避开灰飞虱迁入高峰,从而减低玉米粗缩病发病程度。
H1.1山东泰安不同播期对玉米粗缩病发病率的影响研究
病情指标
玉米播期(月/日)
5/11
5/18
5/25
6/1
6/8
6/15
6/22
发病率(%)
14.27
53.92
79.24
85.44
70.18
30.30
6.82
H1.2山东汶上不同播期对玉米粗缩病病株率和病情指数的影响研究
4/20
4/25
4/30
5/5
5/10
5/15
5/20
5/30
6/4
6/9
6/14
6/19
19.43
75.73
99.33
100
97.21
45.78
8.88
3.52
6.37
31.2
56.79
67.40
76.51
88.66
96.35
94.34
29.01
3.79
1.65
试验当年灰飞虱一代成虫迁入高峰期为5月25日
H1.3河北辛集不同播期对玉米粗缩病病株率和病情指数的影响研究(1997年)
6/10
6/20
100.0
98.5
36.5
13.5
97.6
86.5
31.0
7.9
H1.4江苏盐城不同播期对玉米粗缩病病株率的影响研究
4/5
4/15
6/5
9.06
13.73
24.86
54.49
66.88
69.62
35.09
3.17
试验当年灰飞虱一代成虫迁入盛期为5月下旬至6月中旬
H1.5浙江东阳不同播期对玉米粗缩病病株率和病情指数的影响研究
4/2
4/12
4/22
5/2
5/9
5/16
5/24
1.00
6.00
4.00
0.50
3.25
2.63
0.
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