胶体金技术.docx
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胶体金技术.docx
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胶体金技术
胶体金技术
问:
检测cle,金标记抗体扩大后,烘干后检测各项指标良好,但室温保存一天后,T线下降很多是由什么原
因造成的?
室内开除湿机,组装好的板子,在自封袋里加干燥剂。
我烘干用了一整天,30多个小时了,还有方法进行改进吗,这个抗体还能用来生产吗?
经检测还是金子出了问题,我就是先少量做,找出各个值,然后才扩大的。
我就是先3ml,再10ml。
T:
(涛哥)那可能是生产放大过程控制的问题。
重新试验,先小试,逐步放大。
这就不行了啊,这还算不上生产扩大呢,怀疑误操作,重复试验试试,3ml的、10ml的都做一下。
0是啊,有时标记完检测后,T线就下降(比预实验)
T:
标记完检测就下降,说明你标记本身就有问题呗。
你标记条件太脆弱,主要考虑你标记条件,重新优化下。
0如果我再调整pH值,抗体浓度,灵敏度就会达不到了
T:
通过其他途径提高灵敏度。
问:
请问为什么C线包被3mg/ml不出现条带,而2mg/ml的就有条带出现呢?
T:
正常,从蛋白固定基本原理出发,好好想想。
NC结合蛋白的能力是有限的,其结合位点是会饱和的,假
设其结合能力仅仅为2mg,你包被3mg,那边必然有相当一部分是结合不牢固或者压根就没固定住的,样本层析之后,金标蛋白结合了这些不牢固的蛋白,就会流走,不会显色。
检测线,也会有同样的情况,不过检测线包被过量的影响不止这么简单。
我主要指夹心法。
0一般调整膜上浓度时在湿法时调整还是干法时调整啊?
问:
标记好的胶体金有沉淀是什么原因?
T:
常见的原因:
标记条件不合适,封闭物质不纯,复溶液不合适都有可能,当然颗粒大了,也容易沉淀。
0你们主要用什么方法摸索最佳PH值?
1.用碳酸钾用量调整,搞一排,然后看变色和离心后现象,还有检测结果啊。
0这样岂不是需要很多抗体?
呵呵
2.标记又用不了多少抗体,又不是包膜。
0离心后现象,怎么样的是理想的?
3.就是没有预期想要的略微蓬松有红色的沉淀,比如贴壁、黑点、离不干净等,离心速度时间也要选好。
0是啊,之前就发现有点贴壁和黑点,我延长了离心时间也没用。
4.小号金子1ml离心几分钟就够了。
越大速度越低时间,这个速度和时间折中下自己调整。
问:
不知道那些强假阳性有什么办法可以抑制?
T:
你加阻断剂试过没?
0试过几种,没有效果,能阻断C线,对T线基本没阻断。
T:
照这么说的话既然是同一对抗体而且胶体金法临床假阳性率这么高,我觉得你这对抗体可能对某种因素太敏感了吧,ELISA是共价标记胶体金是物理标记是会有差异。
(涛)
0现在就是找不到原因,那强阳漏检呢?
其实也有试过好几个抗体配对,基本都是那样的结果
问:
请教一下各位大虾,多抗标记的时候要注意哪些细节呢?
T:
尽量别标记多抗,实在是想标记多抗,把标记PH提高点。
问:
划线时的湿度条件是NC膜制备的要点之一,湿度应控制在45%〜65%,有文献支持吗?
T:
文献呢是有滴,不过NC供应商也会给你建议滴,你自己也是可以探索滴,最终都是要以产业化需要为准。
1.主要膜吸收蛋白的时候要是湿度太低会比较疏水,不利于吸收,一般在40%以上,膜在点之前在这个环境
下放置一定时间平衡一下。
0点完的膜烘干后的湿度呢?
是不是要低一点。
2.湿度不低,你怎么烘干啊。
0呵呵,我的意思是已经烘干的板子拿出来切条时的湿度一般在多少啊。
没办法,我刚接触胶体金,现在公司在申报,委托的公司(艾伟德)给的资料很乱,前后都不对应。
问:
谁知道MP的HCVBLOT3.0哪有卖?
T:
找丽珠吧,不过不一定卖给你,独家代理。
问:
抗体灵敏度太高,有什么思路去降低灵敏度,从而达到规定的cutoof值呢?
1.反标,偶联抗原去标记,把抗体点T线,同样的原料可以下降一个数量级的灵敏度。
T:
THEONE说的对,从不公平竞争到公平竞争,灵敏度会下降比较明显的。
0质控线没了?
2.你不会用单独的质控系统的啊?
rabbitIgG和羊抗兔的多抗。
T:
楼上说的对。
问:
请教一下,Fusion5用来包被时,需要进行处理吗?
T:
当然,是不可以直接使用的。
WHATMAN有相关说明资料,丁香园上也有相应的文献翻译。
0用作金标垫行吗?
成本高不高?
T:
当然高,Fusion5有专用用途。
0用在哪方面比较好?
T:
多方面,比如同时用做样品垫和金垫,改善CV,比如某些高附加值数显产品,因其设计的需要。
这个材料有专用用途,用好了的话,效果是非常好的,小日本用的不错。
4.Fusion5性能非常优越,不信自己要点样品比较下。
问:
各位前辈,请问你们谁知道HCV的国家盘里面到底有哪些片段血清啊。
T:
各个片段的都有一般NS3片段的容易漏检最好单独再加上NS3片段。
问:
请教各位高手:
免疫层析试纸中,PH对信号强弱,反应特异性的影响是怎样的关系?
T:
不可一概而论啊,最好哪个产品举个实例。
问:
有问题请教,试纸条想大批量生产成产品,其中标记胶体金的单克隆抗体怎么大批生产呀?
都是打小鼠吗?
T:
可以外购啊。
0但是我们做的抗体外面没有卖,我们已经做出来杂交瘤细胞株了,如果每次都打小鼠去腹水的话这其中批次
的差别是不是有啊?
T:
只要细胞株一切正常的话,单位浓度下的单抗活性,批次间差异不大。
每次纯化,纯度多少会有点差异,批间差肯定是有的,不过正常来讲,不会对生产产生太大影响。
0那我再标记的时候条件是不是还得重新摸索啊?
T:
不用,其实你的单抗生产岀来,肯定会做质检的。
0就纯化好了之后,浓度测出来,然后就按摸索好的浓度标记就好了吗?
T:
满足质检要求,成品生产工艺,就不用变。
你得先质检,万一细胞株有问题呢。
0我们是大学里,好像没有做质检的啊。
T:
连质检都没有还搞什么产业化啊,想搞产业化就正儿八经来,要么跟生产企业合作,搞委托加工。
就算没有正儿八经的质检,起码一批单抗生产岀来要小试下吧,要不然直接批量生产,万一有问题损失岂不是很大。
0一般委托加工他们可以给大量生产腹水吗,我们提供杂交瘤细胞株。
T:
干嘛不在高校做完这部分呢,花的是国家的钱,用的是免费劳动力。
把单抗做好,然后委托企业做成品,岂不是更好。
0您的意思就是我们自己大量生产岀腹水,然后委托企业吗?
T:
干脆把纯化也做了呗,提供纯化好的单抗给企业。
企业会对入厂的原材料进行检验的。
0那如果我们纯化好了之后,那么多,企业一检查原材料不行,我们也白做了呀。
T:
不行,那肯定是白做了啊。
1.关键是你抗体制备的工艺要过关,每次制备的批间差异大的话,说明单抗制备工艺不成熟,需要优化。
问:
新手请教个问题,验证的ELISA抗体对可以直接用于胶体金研发吗?
只要通过调整浓度配比即可?
还是需要重新寻找、检测抗体对?
T:
这个不好说,ELISA能用的,胶体金不一定能用,先做做试试吧,不行再换。
0这个周期长吗?
T:
看实验技能,如果准备工作做好的话,一天以内。
0抗体对反应,ELISA和胶体金,除了载体不一样,还有很多差别吗?
我开始觉得可以直接拿过来用呢。
T:
差别很多很多很多很多,位阻亚型纯度••…都是区别。
大部分都可以的。
0正常情况下,产品研发周期要多久?
1.顺利的俩月足够,不顺利的两年都不够。
T:
举个例子:
比如说一个常规项目,原料成熟;质控品容易获得;标准无国标无行标,自己定标准;那么一整套工艺调试流程走下来,再做点性能评估试验,三个月吧。
不考虑稳定性测试。
如果是个科研课题的话,两个月足够了。
0我现在就是有个ELISA的盒子,有现成的抗体对,想用胶体金的方法实现检测,看看这种可能性。
T:
可能性很大。
2.酶免能用的原料,80%在胶体金项目上会失败。
T:
九天这个说的有点绝对了吧。
3.不算绝对,这个比例已经比较乐观了。
大部分问题就岀现在,活性不够上,酶免可以通过加大浓度提升活性,可是胶体金实验的活性提升范围很小。
而且,涉及到前带问题,更是不好解决。
T:
我这80%都能成功。
问:
我最近做胶体金,用标记好的金标抗体检测抗原,不识别,好着急啊。
1.不要喷到垫上,直接用标记好的抗体进行爬样,看看有无显色。
0我标记的抗体,然后把抗原用枪点在了膜上,之后又加的金标抗体,发现没反应。
我是自己制备的抗体,而且实验条件相对于公司来说比较不正规,一个人摸索。
我只是想拿包被的抗原检测一下标记的抗体怎么样,看
有没有标记上。
按理说,抗原应该能和标记后的抗体结合上,可是我标记后的抗体不结合。
2.包被了抗原,干燥完全了吗?
没干燥,抗原就没固定在膜上,结合了也冲掉了啊。
0我加金标抗体后发现点过抗原的地方明显显白色,而周围的抹上会留下胶体金的红色痕迹。
这应该能说明并
不是抗原被冲走的缘故吧。
大家被标记的蛋白是怎么处理的?
3.亲水性不好,处理液改一下,多加点亲水的物质啊。
抗体是老鼠还是兔子产的。
0老鼠。
4.最佳PH定过了?
0定了,最佳蛋白标记浓度也实验过。
标记完后胶体金的颜色有些变化,变紫了点,这种现象正常吗?
T:
颜色稍微有些加深是正常的,抗原抗体在免疫层析条件下,没有特异性反应,想找到原因是个大工程,特别是你现在的情况。
你的抗原是重组的吧?
分子量有多大,纯度多少,保存液是什么,浓度多大。
是包涵体
抗原吗。
0抗原是购买的,具体信息不是特别清楚,但是我用抗原包板子后做酶联免疫反应,是阳性的,这说明我的抗体是可以和抗原结合的。
保存液是PBS—1%BSA溶液。
T:
这就是问题所在,ELISA做着效果好,胶体金不一定能用。
你的单抗是怎么制备的,是用这个抗原免疫的
吗。
既然很多信息都不知道,给你提供一个思路,你标记抗原,然后包被抗体吧。
当然这两种方法都不太科
学,不过对于高校来讲,就做个实验而已,也就够用了。
0免疫抗原和检测抗原都是一种,用抗原免疫小鼠,培养的杂交瘤细胞,收集细胞培养上清,然后纯化的上清。
保存液是PBS—1%BSA溶液,有问题吗。
5.如果你直接拿这个划膜的话,肯定是不行的。
T:
有问题。
不知道你为什么选择这个保存液,也许是供应商提供的。
反正不管怎样,你标记抗原,包被抗体,效果可能会好点。
II0不是,是自己用的,你的保存液用的什么啊。
T:
直接用0.01MPB7.4稀释下就可以了。
0你这个金完全死了。
T:
没完全死,你看吸水垫,
2.样本稍微稀释下?
T:
稀释不能从根本上解决问题,这些金子其实没有死,不是释放问题。
0释放的很快,但是不知道为什么在膜上停留了,有没有什么物质能够改善这种情况?
3.我奇怪了,细菌多大啊,能轻易通过NC膜?
NC膜都可以的。
T:
为什么首先想到的是加什么物质呢?
细菌不用裂解也可以通过,常规的
0我在测另一个菌株时,没遇到过这个问题,难道是菌的原因吗?
4.如果胶体金和细菌形成了复合体的话,可能就过不去了,可以这样理解么?
T:
说对了一半。
5.我之前也遇过这种情况,但是加了个东西,就没有了。
6.你用的是玻纤做金垫吗?
浸金还是喷金?
贴胶了吗?
加点万能剂。
0聚酯膜。
涂的金,什么万能剂?
T:
老牛,这个真心没有用哈。
这个的根本原因,在于你选择的抗体,针对的抗原表位是多价的,也就是说这个菌体表面含有很多相同的该抗原决定簇,进而抗原抗体反应的时候,相互交联,形成了空间网状结构,导致复合物体积很大。
当然这个过程中,也会有一部分复合物不是很大,所以能通过NC孔径,至于怎么解决这个问题,方法呢不止一个,这个留
着自己思考吧。
其实呢,免疫类的书籍,关于这块一般都有介绍,只不过大家一般不会留意。
其实很多实验过程中看似很复杂、难以理解的现象,都可以用抗原抗体反应最基础的知识去解释。
只不过,貌似大部分人,都不太关注这些基础的东西,往往是眼高手低,或者理解仅限于事物的表象。
7.类似于凝集试验。
问:
做胶体金的同盟,对37C稳定性和常温稳定性是什么看法?
目前我做岀来,两种环境的稳定性差异较大。
跟踪下去,不知道常温的是不是总有一天能成为37度的情况呢?
T:
你还是说具体点好,实验方案,实验过程,实验结果,结果分析。
0确实一两句说不清楚,你觉得那个稳定性理论成立吗,37度1天等于25度1星期?
T:
当然不成立。
也不知道你的37度做岀来是啥情况。
0会一直变阳。
T:
什么方法的产品啊?
夹心还是竞争?
0竞争。
T:
就是显色越来越弱了?
0也不是。
T:
你37度跟踪了多少天观察周期多长。
问:
请教一下,我有个蛋白,想富集,能用胶体金的方法吗,富集后想跑蛋白电泳看看。
1.胶体金不能富集吧。
0胶体金不能像磁珠一样富集蛋白吗。
2.用超滤管可以。
T:
超滤是可以的,用胶体金不一定能行,胶体金对标记条件要求还是挺苛刻的。
问:
请问如果烘NC膜如果不用风机行不行,只是控制温度?
T:
可以。
0只用温度烘干不会对膜有影响?
2.没啥影响,我做的是没啥影响。
0那胶体金呢?
问:
老板让我做胶体金试纸条,现在我有大概80mL多抗血清,要是后期做胶体金标记用正辛酸-硫酸铵沉淀
纯化抗体可以么?
还是得用蛋白A/G亲和纯化?
T:
正辛酸-硫酸铵沉淀纯化可以的。
0不会影响标记效果么?
T:
透析彻底,不会影响。
0用PBS4度过夜可以么?
T:
换液三次。
0我实验室透析袋截留分子量是7000的可以么?
T:
嗯,可以,透析后,高速离心去掉沉淀,测下蛋白浓度,然后标记,没问题的。
0看纯化效果跑SDS可以么?
T:
可以。
0我的的抗体是兔子,大概条带多大?
T:
这个不清楚,你是做还原性还是非还原性?
0什么叫还原性?
T:
非还原性SDS-PAGE,跑出来大概160KD左右,不过肯定很多杂带。
0要用还原性的么?
T:
不知道,我也不知道你具体要做什么用。
0就是做胶体金试纸条啊。
T:
你做胶体金试纸条,跑胶干嘛。
0看看抗体纯化的效果怎么样。
T:
为什么要看纯化效果呢,你知道了纯化效果之后,有啥意义呢?
比如,你得到了100%纯度的兔抗体,但
是都不是针对目标抗原的,有啥用呢。
0要是纯化效果不好,不是会影响标记。
T:
刚不是跟你说了吗,肯定很多杂带,纯度不会太高,但是可以做胶体金标记。
1.你觉得标记下方便呢,还是跑下胶方便?
T:
嗯,就是这个道理,你直接标记下,试试就OK了。
一步到位,有说服力,间接佐证,往往是有漏洞的。
问:
抗体pbs透析还是pb透析有影响么?
1.常用PB。
0那如果用pbs偷透析了怎么处理才能除盐呢,除了超滤。
T:
透析后蛋白浓度多少?
0蛋白浓度也就2g/l。
T:
问题不大。
0在学校时很久以前使用pbs透析纯化的抗体,后来就改成pb了。
2.我都没透析过,买来直接用。
0以前实验室都是兔血清,肯定得透析的说。
T:
群里很多科研院校的,他们做科研原料都是自产自用,做产业化的原料,大部分都可以直接使用。
问:
……(没聊天记录)527wl的,多大的我不知道。
T:
信号弱,是不好直接分析的,有对比没,之前强,还是怎么着?
0以前也不是很强。
T:
就是说,更弱了呗,你变化啥条件了没?
0如果用比色卡的,高中低三个梯度来说的话,中等显色即使提高OD值也没效果。
T:
可能蛋白效价下降了呢。
0只能达到低显色。
T:
就是说,原来中等强度,现在低强度呗。
0原来也是低强度。
T:
就是说,你想提高强度,但是增加金标记物的量,不管用呗。
0加样浓度我也增加了,膜浓度也是。
T:
你说具体点呗,什么项目这么扯,不是说提高浓度,效果就一定会好的,有个最合适的量。
0HIVII型的抗原。
T:
你这个测的是啥?
免疫抗血清吧。
0是的。
T:
一般测免疫抗血清,显色都挺好的,自说自话嘛。
用抗原做免疫原,然后再用抗原来测抗血清。
免疫原是同一个抗原吗?
0原蛋白的日期都是2012年02月的,真怀疑是不是已经失活了。
T:
有可能额,HIV抗原,有很强的包涵体倾向,失活也不算个事。
你换个新批次的试试呗,跟供应商沟通下,再要个新批次的小样试试,要点免费的样品呗。
0sdspage蛋白电泳,我要怎么看蛋白条带是我要的呢。
T:
抗原的分子量,供应商没在说明书写明?
0是的,坑爹啊,没注明的话,看有没有降解的小条带?
T:
额,我大概知道你用的谁家的了,别跑胶了看不出来,跑了之后,你可能会很伤心。
问:
样品垫与结合垫想只用一个垫子,有没有适合的材料推荐一下,就是将胶体金喷在样品垫上。
1.用两种吧。
2.据说whatman有四合一的垫子。
吸水纸,nc膜,金垫,样垫,全用一张垫子就行。
不过好像使用起来有限制,具体就不清楚是什么限制了。
3.你找俞翠萍:
QQ:
2355410614,让他给你个玻纤套装试下。
whatman的东西,一般用不起啊。
T:
WHATMAN那个是五合一,还算上滤血膜,FUSION5,这个材料不能直接使用,有限制,主要是蛋白的包被,需要特殊的固化方法。
问:
casein为啥我做的梯度为啥显示像抛物线一样。
T:
抛物线的话,就对了。
0为啥不是越来越抑制信号,浓度大了发生什么了。
T:
你要从酪蛋白抑制信号的机理去理解。
0第一类物质就是蛋白质,如常用的牛血清(BSA)、酪蛋白(Casein)、鱼胶冻,都可以特异性吸附杂蛋白
(非特异性蛋白),减少杂蛋白非特异性结合。
T:
想想看,为什么同样是作为封闭蛋白,在相同使用浓度下,酪蛋白抑制信号的作用要远远强于BSA;为什
么,酪蛋白不容易溶解于水,酪蛋白钠盐,相对容易溶解;为什么,在水中加入酪蛋白的时候,酪蛋白粉末在液面扩散非常快。
0我去搜搜看呢。
T:
你搜不到的,自己想想先,从最基本的理化性质去考虑。
0蛋白结构不一样吧,三级结构不一样。
酪蛋白极性更大,非极性。
T:
为毛酪蛋白在碱性条件下容易溶解呢;为毛在已经溶解的酪蛋白溶液中加入盐酸,酪蛋白会析出呢;为毛能迅速膨胀,而且分子不结合呢。
我提示下哈,因为酪蛋白的等电点灰常低,在酸性范围,在碱性条件下,带有很强的负电。
在中性条件下,也带负电。
0干酪素是等电点为pH4.8的两性蛋白质。
T:
在水中加入酪蛋白的时候,最先溶解的那部分,因为都带负电,会相互排斥,所以会看到酪蛋白在液面很快分散开。
其抑制信号的强作用力,也主要是因为其强负电荷。
那么为毛这种负电荷,会抑制信号呢。
0和金结合了吧?
破坏了金结构?
T:
为毛会跟金结合呢,恰恰相反啊。
金是负电荷,酪蛋白也是负电荷啊,点到即止哈,自己多想想,自己想
出来,会非常兴奋的,进而,会解释很多现象,进而你会对酪蛋白的灵活运用,颇有心得。
0对哦,我理解错了。
它是特异性吸附杂蛋白的,通过强负电荷?
量多了会产生神马效果。
难道把真正的不是杂的蛋白也给吸附了?
T:
你要这么想哈,抗原抗体的特异性反应,是靠什么作用力呢,非特异性反应,一般是怎么产生的呢。
0空间结构的互补性。
T:
别想的太深奥了,用最简单的思维去理解。
0我的Casein都用到0.3%了,据说会影响稳定性。
T:
关键你用在哪儿了?
样品垫上?
酪蛋白一般不会影响产品的稳定性,合理的使用,会增强产品的稳定性。
0照这个意思在重悬液里加点酪蛋白,标记的金探针会更加稳定?
T:
我们来看这么一个现象哈,将金标记物复溶之后制作金垫,其中一种复溶液中加入少量酪蛋白,一种不加,然后干燥金垫,然后会发现,加入酪蛋白的,干燥后特别红;不加酪蛋白的,干燥后颜色要暗。
通过各种现
象,去理解酪蛋白抑制信号的作用机理。
0请大神点拨下我说的对不对,作为封闭的酪蛋白,由于存在负电荷,在金探针和样本结合的时候起了排斥作用,从而削弱了信号,这个理解对么?
T:
嗯,大概就是这个意思,所以,同样作为封闭蛋白,酪蛋白封闭信号的作用要远远强于BSA。
0跟吸取杂蛋白没有关系吗。
T:
先不要考虑杂蛋白的事情,绝大部分的非特异性反应,是直接发生在标记蛋白和包被蛋白之间的,而非特异性反应,相当一部分,是电荷吸附造成的。
一种强电荷介质的引入,会对这种作用产生明显的干扰,就比
如我们加SDS,对信号也会有很明显的影响一样。
0从电荷角度来看的话,是不是可以理解为SDS和酪蛋白的作用类似?
T:
就比如,我们在对临床样本检测的时候,如果工艺不是很成熟,遇到新鲜抗凝样本,特别是肝素钠抗凝样本的时候,对信号会有明显干扰一样。
因为肝素钠就是靠其强负电荷来抗凝的,如果不对样品垫进行处理,直接检测新鲜的肝素钠抗凝的样本,会导致显色很弱,甚至不显色,甚至连C线都不显色。
0可以直接在金标垫加大缓冲液浓度啊,这样不行吗。
T:
这是牵一发而动全身的事情。
在金标垫上,与金标记物直接接触的成分,要考虑几点:
1首先要保证金标记物长期的稳定性;
2便于金标记物释放彻底;
3对检测信号发挥一定的积极作用。
往往是解决了一个问题,进而引起更多的问题。
所以,对于胶体金产品,各组分的预处理和设计,就显得特别重要。
其实我们做的大部分工作,都是解决矛盾。
0抗RBC和全血滤膜哪个好使?
T:
抗RBC和滤血膜,谈不上谁更好一些,这两个本身没有太大的对比性,因为其应用领域是有针对性的。
T:
一本是分子生物学,一本是临床免疫学,一本是蛋白质组学,貌似叫这几个名字,刚入行的时候看过。
还
有当初丁香园翻译的那些IVD杂志,也挺不错的。
问:
昨天做的复合物,4度放置一夜,沉淀。
显然是有问题的。
但昨天做标记条件没有问题,会不会是bsa的
原因(昨天第一次加bsa而不是peg)。
1.
为啥不两都用啊?
bsa可用进口的,peg2W用国产也可以。
注意过程再试一下,这个是没标上的节奏。
结和后再分开,我认为你是标记后有标记物不稳定,再分开了。
另可能杂质可能较多,不干净。
2.有可能是BSA的问题,换好点的BSA。
3.你BSA多了吧。
01%
4.我都是4%的10%BSA,0.4%的PEG。
5.每个系统不一样,项目不一样,用的浓度也会不一样的。
T:
重新标记一个分成两份一份加BSA一份不加然后过夜明天结果就岀来了,结果岀来之后原因就找到了。
另外不建议用EP管直接作为标记反应容器,建议用西林瓶。
少量标记用西林瓶,大量标记用锥形瓶、烧杯。
尽量选择玻璃器皿,浸泡铬酸,洗净,晾干,备用。
如果用的是上海西宝的BSA,那么是BSA的问题的可能性比较大。
买点透明西林瓶,这个东西不贵,1-10ml标记,各种方便实用。
0昨晚做的就没事,都没敢做多,总共就1mg,我估计是标记条件的问题。
6.颗粒好小哦。
0吸收峰528。
7.为嘛我觉得颜色淡。
没我的深。
0管子小,放在烧杯里看就深了。
我在离心了。
如果正常,再放大试一试。
8.放大了ph不对了啊。
0等比例放大啊……
9.那ph就不对了,不能放大,我觉得ph会有变化的。
问:
问大家一个问题,在确定胶体金与标记蛋白浓度的时候,调好ph之后,如果放的时间为几个小时,无论
加多少
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