无菌检查用培养基适用性验证报告.docx
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无菌检查用培养基适用性验证报告
无菌检查用培养基
适用性验证报告
审核批准表
O方案经下列部门审核和批准后生效
项目
职责
签字
日期
起草
质保部
质保部
审核
质保部长
批准
质量副总
1.验证目的:
为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌,真菌的无菌检查,总结本验证报告。
2.参照标准:
《中国药典》2010版二部附录XIH无菌检查法。
3.验证项目:
硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适用性检查。
部门
职责
质保部
负责对验证进行总结和评价批准方案与报告
质保部
负责制定确认方案与报告的编制
质保部
负责确认过程的相关检测,确保检验结论正确可靠
质保部
负责确认过程的相关检测,确保检验结论正确可靠
4.验证小组
4.试验材料:
4.1.被验证培养基:
品名:
硫乙醇酸盐流体培养基
规格:
批号:
生产厂家:
品名:
营养肉汤培养基
规格:
批号:
生产厂家:
品名:
改良马丁培养基
规格:
批号:
生产厂家:
4.2.仪器设备:
4.2.1.压力蒸汽灭菌器:
型号:
编号:
4.2.2.双人净化工作台:
型号:
编号:
4.2.3.电热鼓风干燥箱:
型号:
编号:
4.2.4.生化培养箱(23~28℃):
型号:
编号:
4.2.5.恒温培养箱(30~35℃)型号:
编号:
4.3.稀释剂:
0.9%无菌氯化钠溶液
4.4.验证用培养基:
名称
生产厂家
批号
营养琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
4.5.验证用菌株:
验证菌株
代次
培养基
培养温度
培养时间(小时)
金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003
30~35℃
18~24
铜绿假单胞菌CMCC(B)10104
30~35℃
18~24
枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501
30~35℃
18~24
生孢梭菌CMCC(B)64941
30~35℃
18~24
白色念珠菌
CMCC(F)98001
23~28℃
24~48
黑曲霉菌CMCC(F)98003
23~28℃
5~7天
5.菌液制备:
5.1.取经培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。
5.2.取经培养24~48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。
6.菌液计数:
(每种菌液接种2个平皿)
分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿,每种菌液平行做2皿,注入不超过45℃营养琼脂培养基15~20ml,置30~35℃培养箱培养二天,取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿,平行做2皿,注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15~20ml,置23~28℃培养箱培养三天。
7.无菌培养基的无菌性检查
7.1培养基的配制
硫乙醇酸盐流体培养基的配制:
取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g,加1L蒸馏水,加热煮沸使其完全溶解,摇匀分装到试管中,每只试管装量12ml,121℃灭菌15min。
营养肉汤培养基的配制:
取营养肉汤培养基18g,加1L蒸馏水,加热搅拌使其完全溶解,摇匀分装到试管中,每只试管装量12ml,121℃灭菌15min。
改良马丁培养基的配制:
取改良马丁培养基28.5g,加1L蒸馏水,加热搅拌使其完全溶解,摇匀分装到到试管中,每只试管装量9ml,121℃灭菌15min。
7.2培养基的培养
硫乙醇酸盐流体培养基和营养肉汤培养基5支,置于30~35℃的培养箱中培养14天;改良马丁培养基5支,置于23~28℃的培养箱中培养14天℃,逐日观察情况。
培养基
名称
管数
培养时间(天)
备注
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
硫乙醇酸盐流体培养基
1
2
3
4
5
营养肉汤培养基
1
2
3
4
5
改良马丁培养基
1
2
3
4
5
结论
表1培养基的无菌性检查表
注:
“+”为生长,“-”为不生长
7.培养基灵敏度检查
7.1.硫乙醇酸盐流体培养基等灵敏度检查至少应进行3次独立的平行试验。
7.2培养基的配制
硫乙醇酸盐流体培养基的配制:
取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g,加1L蒸馏水,加热煮沸使其完全溶解,摇匀分装到试管中,每只试管装量12ml,121℃灭菌15min。
营养肉汤培养基的配制:
取硫乙醇酸盐流体培养基18g,加1L蒸馏水,加热搅拌使其完全溶解,摇匀分装到试管中,每只试管装量12ml,121℃灭菌15min。
改良马丁培养基的配制:
取改良马丁培养基28.5g,加1L蒸馏水,加热搅拌使其完全溶解,摇匀分装到到试管中,每只试管装量9ml,121℃灭菌15min。
7.3.培养基接种
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支,分别接种小于100cfu/ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3天;取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支,分别接种小于100cfu/ml的白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5天。
逐日观察结果。
7.4.结果判断
空白对照管应无菌生长,若加菌的培养基管生长良好,判该培养基的灵敏度检查符合规定。
表2培养基灵敏度检查表
菌种类型
培养基装量
(ml)
培养基管数
(支)
硫乙醇酸盐流体培养基(天)
备注
1
2
3
金黄色葡萄球菌
12
1
12
1
枯草芽孢杆菌
12
1
12
1
铜绿假单胞菌
12
1
12
1
生孢梭菌
12
1
12
1
空白对照
12
1
菌种类型
培养基装量
(ml)
培养基管数
(支)
营养肉汤培养基(天)
备注
1
2
3
金黄色葡萄球菌
12
1
12
1
枯草芽孢杆菌
12
1
12
1
铜绿假单胞菌
12
1
12
1
生孢梭菌
12
1
12
1
空白对照
12
1
菌种类型
培养基装量
(ml)
培养基管数
(支)
改良马丁培养基(天)
备注
1
2
3
4
5
白色念珠菌
9
1
9
1
黑曲霉
9
1
9
1
空白对照
9
1
结论
注:
“+”为生长,“-”为不生长
8验证周期:
同种培养基的不同批号,不同生产厂家均应进行适用性验证。
9结论:
无菌检查用培养基适用性验证报告书
验证项目
无菌检查用培养基适用性验证
验证目的
无菌检查用培养基适合于细菌,真菌的培养
2014年月日至2014年月日,验证小组根据批准的“验证方案”对无菌检查用培养基进行无菌检查和灵敏度验证,验证方案在实施过程中未做修改;根据《中华人民国药典》2010年版(二部)附录无菌检查法培养基的适用性检查,结果_______________。
验证人员会签:
部门
职责
人员会签
质保部
负责对验证进行总结和评价批准方案与报告
质保部
负责制定确认方案与报告的编制
质保部
负责确认过程的相关检测,确保检验结论正确可靠
质保部
负责确认过程的相关检测,确保检验结论正确可靠
批准人:
批准日期:
无菌培养基的适用性检查记录
培养基:
1.硫乙醇酸盐流体培养基批号:
_______________检验日期:
2.营养肉汤培养基批号:
_______________检验日期:
3.改良马丁培养基批号:
_______________检验日期:
一、培养基的无菌性检查
培养温度:
硫乙醇酸盐流体培养基℃改良马丁培养基℃
培养基
名称
管数
培养时间(天)
备注
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
硫乙醇酸盐流体培养基
1
2
3
4
5
营养肉汤培养基
1
2
3
4
5
改良马丁培养基
1
2
3
4
5
结论
注:
“+”为生长,“-”为不生长
二、培养基的灵敏度检查
1.菌液制备:
(1)金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]第___代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml
(2)枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]第代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml
(3)铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]第___代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml
(4)生孢梭菌[CMCC(B)64941]第___代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml
(5)白色念珠菌[CMCC(F)98001]第代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml
(6)黑曲霉[CMCC(F)98003]第代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量CFU/ml
2.检查结果
细菌培养温度____℃3天霉菌与酵母菌培养温度____℃5天
菌种类型
培养基装量
(ml)
培养基管数
(支)
硫乙醇酸盐流体培养基(天)
备注
1
2
3
金黄色葡萄球菌
12
1
12
1
枯草芽孢杆菌
12
1
12
1
铜绿假单胞菌
12
1
12
1
生孢梭菌
12
1
12
1
空白对照
12
1
菌种类型
培养基装量
(ml)
培养基管数
(支)
营养肉汤培养基(天)
备注
1
2
3
金黄色葡萄球菌
12
1
12
1
枯草芽孢杆菌
12
1
12
1
铜绿假单胞菌
12
1
12
1
生孢梭菌
12
1
12
1
空白对照
12
1
菌种类型
培养基装量
(ml)
培养基管数
(支)
改良马丁培养基(天)
备注
1
2
3
4
5
白色念珠菌
9
1
9
1
黑曲霉菌
9
1
9
1
空白对照
9
1
结论
注:
“+”为生长,“-”为不生长
三、结论:
本品按《中华人民国药典》2010年版(二部)附录无菌检查法培养基的适用性检查,结果_______________。
检查人/日期:
复核人/日期:
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- 无菌 检查 培养基 适用性 验证 报告