感染管理环境卫生学采样及检查方法.docx
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感染管理环境卫生学采样及检查方法
AAAA院感染管理环境卫生学采样及消毒灭菌效果监测要求
根据《消毒技术规范(2002年版)》GB15979-2002、《医院消毒卫生标准》GB15982—1995及《内镜清洗消毒技术操作规范(2004年版)》等规定,特制定AAAA院环境卫生学采样及消毒灭菌效果监测要求。
一、空气消毒效果的监测
1.1采样时间:
在消毒处理后或进行医疗活动之前采样。
采样高度:
距地面垂直高度80~150cm
1.2采样方法:
A:
非层流房间
(1)布点方法:
室内面积≤30m2,设内、中、外对角线布3点,内、外点布点部位距墙壁1M处;室内面积>30m2,设4角及中央5点,4角的布点部位距墙壁1m处。
(2)采样方法:
将普通营养琼脂平板(直径为9cm)放在室内各采样点处,采样高度为距地面1.5m采样时将平板盖打开,扣放于平板旁,暴露5min,盖好立即送检。
B:
层流房间
层流房间根据房间不同净化级别进行布点,操作按照GB50333-2002,9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30min后送检培养。
层流房间应在空态或静态条件下采样。
1.3检测方法:
细菌菌落总数检查:
将已采样完毕的培养皿在6h内送进实验室,置于37度温箱内培养48h…。
培养皿培养48h后,计算菌落总数,
1.4计算结果:
非层流房间:
按照公式计算:
细菌总数(cfu/m3)=50000N/(A×T)
式中A为平板面积(cm2);T为平板暴露时间(min);N为平均菌落数(cfu)。
层流房间直接以个/30min.90皿为单位计算结果
1.5结果判定
非层流房间:
Ⅰ类区域:
细菌总数≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板),未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格;
Ⅱ类区域:
细菌总数≤200cfu/m3(或4cfu/平板),未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格;
Ⅲ类区域:
细菌总数≤500cfu/m3(或10cfu/平板),未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。
层流房间:
按照GB50333-2002要求判定
二、物品和环境表面消毒效果的监测
2.1采样时间:
在消毒处理后4h内进行采样。
消毒后的采样一定要采用中和剂,不同消毒剂所用中和剂则不同。
2.2采样面积及采样方法:
用5cm×5cm的标准灭菌规格板,放在被检物体表面,采样面积≥100cm2,连续采样4个,用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次,并随之转棉拭子,剪去手接触部位后,将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内,立即送检,送检时间不得超过6h。
门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。
2.3检测方法
(1)细菌总数检测:
将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次,用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿,每一样本接种2个平皿,内加入已溶化的45℃~48℃的营养琼脂15ml~18ml,边倾注边摇匀,待琼脂凝固,置36℃±1℃温箱培养48h,计数菌落数。
采样结果计算方法:
平板上菌落数×稀释倍数
细菌总数(cfu/cm2)=────────────────
采样面积(cm2)
小型物体表面的结果计算,用cfu/件表示。
2.4结果判定
Ⅰ、Ⅱ类区域:
细菌总数≤5cfu/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。
Ⅲ类区域细菌:
总数≤10cfu/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。
Ⅳ类区域细菌:
总数≤15cfu/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。
母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门菌。
三、医护人员手及皮肤黏膜采样及检查方法
3.1采样时间:
在消毒后立即采样或在接触患者、进行诊疗活动前采样。
3.2采样方法
(1)手的采样:
被检者五指并拢,用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指端到指端往返涂擦2次,一只手涂擦面积约30cm2,涂擦过程中同时转动棉拭子;将棉拭子接触操作者的部分剪去,投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内,及时送检。
(2)皮肤粘膜采样:
用5cm×5cm的标准灭菌规格板,放在被检皮肤处,用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次,并随之转动棉拭子,剪去手接触部位后,将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内,立即送检。
不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。
3.3细菌菌落总数检查
将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次,用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿,每一样本接种2个平皿,内加入已溶化的45℃~48℃的营养琼脂15ml~18ml,边倾注边摇匀,待琼脂凝固,置36℃±1℃温箱培养48h,计数菌落数。
3.4采样结果计算方法:
细菌总数(cfu/cm2)=平板上菌落数×稀释倍数/采样面积(cm2)
(2)致病菌检测:
按九的原则执行
3.5结果判定:
a)卫生手消毒,监测的细菌菌落总数应≤10cfu/cm2。
b)外科手消毒,监测的细菌菌落总数应≤5cfu/cm2。
四、消毒液的监测
4.1使用中消毒液染菌量测定
(1)检测方法:
1)涂抹法:
用无菌吸管吸取消毒液1.0ml,加入9.0ml含有相应中和剂的采样管内混匀,用无菌吸管吸取上述溶液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板,每份样品同时做2个平行样,一平板置20℃培养7d,观察霉菌生长情况,另一个平板置35℃温箱培养72h记数菌落数,同时按八的原则检测致病菌。
消毒液染菌量(cfu/ml)=每个平板上的菌落数×50
2)倾注法:
用无菌吸管吸取消毒液1.0ml,加入到9.0ml含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀,分别取0.5ml放入2只灭菌平皿内,加入已熔化的45℃~48℃的营养琼脂15ml~18ml,边倾注边摇匀,待琼脂凝固,一平板置20℃培养7d,观察霉菌生长情况;另一个平板置36℃±1℃培养72h,计数菌落数,同时按九的原则检测致病菌。
消毒液染菌量(cfu/ml)=每个平板上的菌落数×20
(2)结果判断:
消毒液染菌量≤100cfu/ml,并未检出致病菌为合格。
(3)注意事项:
采样后1h内检测。
五、使用中消毒剂与无菌器械保存液
6.1采样时间:
采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。
6.2采样量及方法:
在无菌条件下,用无菌吸管吸取1ml被检样液,加入9ml稀释液中混均,对于醇类与酚类消毒剂,稀释液用普通营养肉汤即可;对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂,需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠;对于洗必泰、季铵盐类消毒剂,需在肉汤中加入3%(W/V)吐温80和0.3%卵磷脂;对于醛类消毒剂,需在肉汤中加入0.3%甘氨酸;对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂,需在肉汤中加入3%(W/V)吐温80,以中和被检样液的残效作用。
A6.3细菌菌落总数检查
按A2.5规定执行。
A6.3.1结果分析
平板上有菌生长,证明被检样液有残存活菌,若每个平板菌落数在10个以下,仍可用于消毒处理(但不能用于灭菌),若每个平板菌落数超过10个,说明每毫升被检样液含菌量已超过100个,即不宜再用。
六、内镜消毒灭菌效果的监测
5.1采样时间:
在消毒灭菌后、使用前进行采样。
5.2采样方法:
监测采样部位为内镜的内腔面。
用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液,从待检内镜活检口注入,用15ml无菌试管从活检出口收集,及时送检,2小时内检测。
5.3菌落计数:
将送检液用旋涡器充分震荡,取0.5ml,加入2只直径90mm无菌平皿,每个平皿分别加入已经熔化的45℃-48℃营养琼脂15ml-18ml,边倾注边摇匀,待琼脂凝固,于35℃培养48小时后计数。
结果判断:
菌落数/镜=2个平皿菌落数平均值×20。
致病菌检测:
将送检液用旋涡器充分震荡,取0.2ml分别接种90mm血平皿、中国兰平皿和SS平皿,均匀涂布,35℃培养48小时,观察有无致病菌生长。
5.4结果判定:
消毒后的内镜合格标准为:
细菌总数<20cfu/件,不能检出致病菌;灭菌后内镜合格标准为:
无菌检测合格。
七、一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测
7.1细菌或真菌污染总菌数的检测
7.2目的
检测一次性使用医疗用品消毒后残存细菌或真菌状况,存放一定时间后是否被细菌或真菌污染及其污染的程。
7.3适用范围
临床用于病人检查、治疗、护理用指套、手套、吸痰管、阴道窥镜、肛镜、印模托盘、治疗巾、皮肤清洁巾、擦手巾、压舌板、臀垫、中单等接触完整粘膜、皮肤的各类一次性使用医疗、护理用品。
7.4试验器材
(1)营养琼脂培养基:
见附录A。
(2)沙堡琼脂培养基(真菌培养用):
见附录A。
(3)无菌检查用洗脱液:
见附录A。
(4)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2):
见附录A。
(5)100级洁净室或100级层流超净工作台(下简称超净台)。
(6)安全操作箱(用于防止真菌孢子污染周围环境)
(7)刻度吸管(1.0mol、5.0mol)
7.5抽样要求
(1)抽样方法
为使样品具有良好的代表性,采用随机抽样方法。
随机选取不同3个批号的产品。
根据检验要求,从每个批号产品中随机抽取同等数量的样品,尽量选自多个大包装。
不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。
(2)抽样数量
①对单一品牌、型别(或规格)产品鉴定取样:
随机选取不同3个批号的产品。
从每个批号产品中随机抽取3个大包装。
从每个大包装中随机抽取20个最小销售包装产品(每个最小销售包装产品重量应达到10g以上;棉签等每个包装内数量达到5支以上,以满足检验最低需要量。
如果重量低于10g或数量少于5支时,适当增加抽取产品的最小销售包装数量。
)作为该品牌、批号产品抽检样品。
其中1/4样品用于首次检测,1/4样品用于留样,2/4样品用于必要时的复测。
样品最小销售包装应完整无破损(包装破损即可视为不合格产品、禁止出售),检测前不得开启。
②对同一品牌、不同型别(或规格)产品鉴定取样:
分别对不同型别(或规格)产品进行随机抽检。
对每个型别(或规格)产品随机选取不同3个批号产品。
从每个批号产品中随机抽取3个大包装。
以下步骤同2.1.9.1.4
(2)①。
③对不同一品牌、不同一型别(或规格)产品鉴定取样:
分别对不同品牌、型别(或规格)产品进行随机抽检。
对每个品牌的每一个型别(或规格)产品随机选取不同3个批号的产品。
从每个批号产品中随机抽取3个大包装。
以下步骤同2.1.9.1.4
(2)①。
7.6检测样本的制作
(1)检测数量
①每批样品首次检测时,检测5个样本,分别在所选的5个最小销售包装内抽取。
②必要时进行复测。
复测时,检测10个样本,分别在所选的10个最小销售包装内抽取。
③以下的样本制作均按首次检测设计,复测时样本量加倍。
(2)样本制作
①垫单、手套等产品的样本制作:
分别在所选5个最小销售包装内样品的不同部位剪取10g重样片。
共5份。
分别剪碎后,各放入一含100ml洗脱液试管中,震荡20s或振打80次。
待样本碎片沉淀后,取各管洗液分别进行检测。
②指套等小件物品的样本制作:
在所选5个最小销售包装内样品中各选一个样本,共5份。
分别剪碎后,各投入含10ml洗脱液试管中,每管一个样本。
震荡20s或振打80次,取各管洗液分别进行检测。
③棉签.在所选5个最小销售包装内样品中,各选5支为一个样本,共5份。
分别直接投入含10ml洗脱液试管中,每管一个样本。
震荡20s或振打80次,取各管洗脱液分别进行检测。
④对不能用上述方法采样的物品,在所选5个小包装中各选一个样本。
共5份。
分别用无菌棉拭子涂抹法采样。
每样本涂抹采样面积25cm2。
采样后,按无菌操作原则剪下棉拭采样端置于10ml采样液试管中,每管一份样本。
震荡20s或振打80次,取各管采样液分别进行检测。
7.7细菌检测操作程序
(1)样本制备后,应立即进行检测。
(2)每一样本洗脱液或采样液接种2个平皿,每个平皿接种1.0ml。
当估计含菌量过高时(每平板生长菌落数超过300个),应用PBS对洗脱液或采样液作适当稀释后再接种。
为取得适宜的菌落数,应接种2个~3个不同稀释度样液。
每吸取一个稀释度样液,换一支无菌吸管。
(3)将45℃左右融化的营养琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿中。
每平皿约15ml~20ml。
盖好、与样液混均、平放。
待培养基凝固后,翻转平板使底向上,置37℃恒温培养箱内培养48h后,计数菌落数。
(4)菌落数计算:
接种洗脱液或采样液原液进行培养者,即使生长的菌落数<15cfu/平板时,仍按实际生长菌落数计算;接种不同稀释度洗脱液或采样液进行培养时、应选择生长的菌落数在15cfu/平板~300cfu/平板之间的稀释度进行菌落数计算。
(5)检测时应设阴性、阳性对照组。
阴性对照组:
①用同批营养琼脂培养基倾注平板直接培养;②分别吸取1.0ml同批洗脱液与PBS各2份,分别接种平皿、倾注营养琼脂培养基进行培养。
阳性对照组:
接种金黄色葡萄球菌(ATCC6538)18h新鲜肉汤培养物1.0ml于平皿内,倾注营养琼脂培养基进行培养。
培养条件为37℃恒温培养培养48h后观察结果。
若阴性对照组有菌生长,说明其中培养基、洗脱液、PBS灭菌不合格或被污染;若阳性对照组无菌生长或生长的菌落不正常,说明其中使用的培养基、培养条件可能存在问题或均存在问题。
以上两种情况均需更换培养基重新进行试验。
7.8真菌检测操作程序
(1)真菌的检测操作程序与细菌检测操作程序基本相同,主要区别在于所用培养基、培养温度、培养时间不同。
真菌培养使用沙堡琼脂培养基。
倾注法接种。
20℃~25℃恒温培养72h,计数菌落数。
为防止真菌孢子飞扬污染环境,真菌菌落计数应在安全操作箱内进行。
(2)检测时设阴性、阳性对照组。
方法与2.1.9.1.6(5)相同。
阳性对照组接种白色念珠菌(ATCC10231)。
20℃~25℃恒温培养72h观察结果。
7.9结果计算
将2个平板计数所得菌落数的平均值乘以稀释倍数即得洗脱液或采样液中每毫升所含菌量(cfu/mL)。
根据每毫升所含菌量推算出每个样本的菌量。
其表达单位可根据情况使用cfu/cm2、cfu/g、cfu/样本。
2.1.9.1.9注意事项
(1)严格无菌操作防止污染。
(2)同批样品检验洗脱振敲次数要保持一致。
振敲轻重尽量保持一致。
(3)吸量管取液量应准确,减少使用中误差。
(4)样液接种后应尽快倾注培养基,避免样液干燥于平皿上,影响结果的准确性。
(5)计算结果时,注意核对接种样液稀释倍数,以免发生计算错误。
八、无菌检验
无菌检验是指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适合于无菌间查的其它品种是否无菌的一种方法。
无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行,应严格遵守无菌操作,避免微生物污染;对单向流空气区域及工作台面,必须进行洁净度验证。
(1)无菌检验前准备
1)洗脱液与培养基无菌性试验:
无菌试验前3d,于需-厌养培养基与霉菌培养基内各接种1ml洗脱液,分别置30℃~35℃与20℃~25℃培养72h,应无菌生长。
2)阳性对照管菌液制备:
①在试验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物,接种1环至需-厌氧培养基内,在30℃~35℃培养16h~18h后,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10cfu/ml~100cfu/ml;
②取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物1接种环种于相同培养基内,于30℃~35℃培养18h~24h后,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10cfu/ml~100cfu/ml;
③取白色念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1接种环种于相同培养基内,于20℃~25℃培养24h后,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10cfu/ml~100cfu/ml。
(2)无菌操作:
取缝合针、针头、刀片等小件医疗器械5件直接浸入6管需-厌氧培养管(其中一管作阳性对照)与4管霉菌培养管。
培养基用量为15ml/管。
1)取5付注射器,在5ml洗脱液中反复抽吸5次,洗下管内细菌,混和后接种需-厌养菌培养管(共6管,其中1管作阳性对照)与霉菌培养管(共4管)。
接种量:
1ml注射器为0.5ml,2ml注射器为1ml,5ml~10ml注射器为2ml,20ml~50ml注射器为5ml,培养基用量:
接种量为2ml以下为15ml/管,接种量5ml为40ml/管。
2)手术钳、镊子等大件医疗器械取2件用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样,将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中,将采样液混匀,接种于需-厌氧培养管(共6管,其中1管作阳性对照)与霉菌培养基(共4管)。
接种量为1ml/管,培养基用量为15ml/管。
(3)培养:
在待检样品的需-厌氧培养管中,接种预先准备的金黄色葡萄球菌阳性对照管液1:
1000稀释1ml,将需-厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均于30℃~35℃培养5d,霉菌培养管与阴性对照管于20℃~25℃培养7d,培养期间逐日检查是否有菌生长,如加入供试品后培养基出现混浊或沉淀,经培养后不能从外观上判断时,可取培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上,培养48h~72h后,观察是否再现混浊或在斜面上有无菌落生长,并在转种的同时,取培养液少量,涂片染色,用显微镜观察是否有菌生长。
(4)结果判定:
阳性对照在24h内应有菌生长,阴性对照在培养期间应无菌生长,如需-厌氧菌及霉菌培养管内均为澄清或虽显混浊但经证明并非有菌生长,判为灭菌合格;如需-厌氧菌及霉菌培养管中任何1管显混浊并证实有菌生长,应重新取样,分别同法复试2次,除阳性对照外,其他各管均不得有菌生长,否则判为灭菌不合格。
注意事项
(1)送检时间不得超过6h,若样品保存于0℃~4℃,则不得超过24h。
(2)被采样本表面积<100cm2取全部表面;被采样本表面积≥100cm2,取100cm2。
(3)若消毒因子为化学消毒剂,采样液中应加入相应中和剂。
九、致病菌的检测
3.17.15.1检测原则:
致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测。
3.17.15.2金黄色葡萄球菌检测。
(1)增菌、分离
取采样液1ml,接种于5mlSCDLP液体培养基中,于36℃±1℃增菌24h。
取1白金耳上述增菌液,在血平板上作划线分离,36℃±1℃培养24h。
(2)观察菌落特征:
在血琼脂平板上菌落形态为金黄色、圆形凸起、表面光滑、周围有溶血圈。
(3)镜检:
挑取典型菌落作涂片染色镜检,镜下为革兰阳性、成葡萄状排列的球菌。
(4)生化反应:
取可疑菌落作触酶、葡萄糖发酵、血浆凝固酶、甘露醇发酵、新生霉素敏感试验,均为阳性者即为金黄色葡萄球菌。
1)甘露醇发酵试验:
取上述可疑菌落接种于甘露醇培养基,于36℃±1℃培养24h,发酵甘露醇产酸者为阳性。
2)血浆凝固试验:
①玻片法:
洁净玻片一端滴一滴灭菌生理盐水,另一端滴一滴血浆,用白金耳挑取菌落分别与生理盐水和血浆混匀,5min内观察有无固体颗粒状物,若血浆出现凝块,生理盐水均匀混浊为阳性,两者均混浊为阴性。
②试管法:
吸取1:
4新鲜血0.5ml,放在灭菌小试管中,再加入等量待检菌24h肉汤培养物,混匀后放入36℃±1℃孵箱中,同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌肉汤培养物作对照,每30s.观察一次,6h内出现凝块者为阳性。
3.17.15.3乙型溶血性链球菌检测
(1)增菌、分离:
取样品1ml,接种于1%葡萄糖肉汤,37℃增菌24h。
取1白金耳增菌液在血平板上作划线分离,36℃±1℃培养24h。
(2)观察菌落特征:
菌落形态为灰白色、半透明或不透明、针尖状突起、表面光滑、边缘整齐、周围有β溶血圈。
(3)镜检:
挑取典型菌落作涂片染色镜检,镜下为革兰阳性、呈链状排列的球菌。
(4)生化反应:
取可疑菌落作如下生化试验,如触酶阴性、链激酶试验阳性、对杆菌肽敏感者,即为乙型溶血性链球菌。
链激酶试验:
吸取草酸钾血浆0.2ml(0.02g草酸钾加5ml人血浆混匀,经离心沉淀,吸取上清),加入0.8ml灭菌生理盐水混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml和0.25%氯化钙0.25ml,混匀,放入36℃±1℃水浴中,每2min观察一次(一般10min内可凝固),待血浆凝固后继续观察并记录溶化的时间,如2h内不溶化,移入孵箱观察24h的结果,如全部溶化为阳性;24h仍不溶解者为阴性。
杆菌肽敏感试验:
将被检菌浓菌液涂于血平板上,用灭菌镊子取含菌0.04单位杆菌肽纸片放在平板表面上。
同时以已知阳性菌株作对照,于36℃±1℃18h~24h,有抑菌带者为阳性。
3.17.15.4沙门菌检测:
参照GB4789.4(食品中沙门菌检测方法)。
3.17.16试剂与培养基的配制:
按附录A进行。
附录A消毒试验用试剂和培养基配方
1.磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2)
无水磷酸氢二钠2.83g
磷酸二氢钾1.36g
蒸馏水加至1000ml
将各成分加入到1000ml蒸馏水中,待完全溶解后,调pH至7.2~7.4,于121℃压力蒸气灭菌20min备用。
2.革兰染色液
第1液:
结晶紫溶液
结晶紫乙醇饱和溶液100ml
结晶紫4g~8g
95%乙醇100ml
1%草酸胺溶液
第2液:
卢戈碘液
碘化钾2g
碘1g
蒸馏水200ml
第3液:
脱色剂
(1)95%乙醇
(2)丙酮乙醇溶液100ml
95%乙醇70ml
丙酮30ml
第4液:
稀释石炭酸复红液
碱性复红乙醇饱和溶液10ml
碱性复红5g~10g
5%石炭酸溶液90ml
蒸馏水900ml
3.孔雀绿与沙黄芽孢染色液
第1液5.0%孔雀绿水溶液
第2液0.5%沙黄水溶液
4.无菌检验用洗脱液
吐温-801g
蛋白胨10g
氯化钠8.5g
蒸馏水1000ml
将各成分加入到1000ml0.03mol/LPBS液中,加热溶解后调pH至7.2~7.4,于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。
5.标准硬水(硬度342mg/L)
氯化钙(CaCl2)0.034g
氯化镁(MgCl2·6H2O)0.139g
蒸馏水加至1000ml。
6.有机干扰物
牛血清白蛋白30g
蒸馏水1000ml
溶解后用微孔滤膜(孔径为0.45μm)滤过除菌,冰葙保存备用。
7.营养琼脂培养基
蛋白胨10g
牛肉膏5g
氯化钠5g
琼脂15g
蒸馏水1000ml
除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中,调pH至7.2~7.4,加入琼脂,加热溶解,分装,于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。
8.营养肉汤培养基
蛋白胨10g
牛肉膏5g
氯化钠5g
蒸馏水1000ml
将各成分溶解于蒸馏水中,调pH至7.2~7.4,分装,于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。
9.稀释液:
胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)。
胰蛋白胨1.0g
氯化钠8.5g
先
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