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蛋白质化学
二、选择填空题
1.侧链含有咪唑基的氨基酸是()
A、甲硫氨酸B、半胱氨酸C、精氨酸D、组氨酸
2.PH为8时,荷正电的氨基酸为()
A、GluB、LysC、SerD、Asn
3.精氨酸的Pk1=2.17、Pk2=9.04(-NH3)Pk3=12.48(胍基)PI=()
A、1/2(2.17+9.04)B、1/2(2.17+12.48)
C、1/2(9.04+12,48)D、1/3(2.17+9。
04+12。
48)
4.谷氨酸的Pk1=2.19(-COOH)、pk2=9.67(-NH3)、pk3=4.25(-COOH)pl=()
A、1/2(2.19+9。
67)B、1/2(9.67+4.25)
C、1/2(2.19+4.25)D、1/3(2.17+9.04+9.67)
5.氨基酸不具有的化学反应是()
A、肼反应B、异硫氰酸苯酯反应C、茚三酮反应D、双缩脲反应
6.当层析系统为正丁醇∶冰醋酸∶水=4∶1∶5时,用纸层析法分离苯丙氨酸(F)、丙氨酸(A)和苏氨酸(T)时则它们的Rf值之间关系应为:
()
A、F>A>TB、F>T>AC、A>F>TD、T>A>F
7.氨基酸与亚硝酸反应所释放的N2气中,氨基酸的贡献是()
A、25%B、50%C、80%D、100%
8.寡肽或多肽测序时下列试剂中最好的是()
A、2,4-二硝基氟苯B、肼C、异硫氰酸苯酸D、丹酰氯
9.下列叙述中不属于蛋白质一般结构内容的是()
A、多肽链中氨基酸残基的种类、数目、排列次序
B、多肽链中氨基酸残基的键链方式
C、多肽链中主肽链的空间走向,如-螺旋
D、胰岛分子中A链与B链间含有两条二硫键,分别是A7-S-S-B7,A20-S-S-B19
10.下列叙述中哪项有误()
A、蛋白质多肽链中氨基酸残基的种类、数目、排列次序在决定它的二级结构、
三级结构乃至四级结构中起重要作用
B、主肽链的折叠单位~肽平面之间相关一个C碳原子
C、蛋白质变性过程中空间结构和一级结构被破坏,因而丧失了原有生物活性
D、维持蛋白质三维结构的次级键有氢键、盐键、二硫键、疏水力和范德华力
11.蛋白质变性过程中与下列哪项无关()
A、理化因素致使氢键破坏B、疏水作用破坏
C、蛋白质空间结构破坏D、蛋白质一级结构破坏,分子量变小
12.加入下列试剂不会导致蛋白质变性的是()
A、尿素(脲)B、盐酸胍C、十二烷基磺酸SDSD、硫酸铵
13.血红蛋白的氧合动力学曲线呈S形,这是由于()
A、氧可氧化Fe(Ⅱ),使之变为Fe(Ⅲ)
B、第一个亚基氧合后构象变化,引起其余亚基氧合能力增强
C、这是变构效应的显著特点,它有利于血红蛋白质执行输氧功能的发挥
D、亚基空间构象靠次级键维持,而亚基之间靠次级键缔合,构象易变
14.下列因素中主要影响蛋白质-螺旋形成的是()
A、碱性氨基酸的相近排列B、酸性氨基酸的相近排列
C、脯氨酸的存在D、甘氨酸的存在
15.蛋白质中多肽链形成-螺旋时,主要靠哪种次级键维持()
A、疏水键B、肽键C、氢键D、二硫键
16.关于蛋白质结构的叙述,哪项不恰当()
A、胰岛素分子是由两条肽链构成,所以它是多亚基蛋白,具有四级结构
B、蛋白质基本结构(一级结构)中本身包含有高级结构的信息,所以在生物
体系中,它具有特定的三维结构
C、非级性氨基酸侧链的疏水性基团,避开水相,相互聚集的倾向,对多肽链
在二级结构基础上按一定方式进一步折叠起着重要作用
D、亚基间的空间排布是四级结构的内容,亚基间是非共价缔合的
17.有关亚基的描述,哪一项不恰当()
A、每种亚基都有各自的三维结构
B、亚基内除肽键外还可能会有其它共价键存在
C、一个亚基(单位)只含有一条多肽链
D、亚基单位独立存在时具备原有生物活性
18.关于可溶性蛋白质三级结构的叙述,哪一项不恰当()
A、疏水性氨基酸残基尽可能包裹在分子内部
B、亲水性氨基酸残基尽可能位于分子内部
C、羧基、氨基、胍基等可解离基团多位于分子表面
D、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等残基尽可能位于分子内部
19.蛋白质三级结构形成的驱动力是()
A、范德华力B、疏水作用力C、氢键D、离子键
20.引起蛋白质变性原因主要是()
A、三维结构破坏B、肽键破坏
C、胶体稳定性因素被破坏D、亚基的解聚
21.以下蛋白质中属寡聚蛋白的是()
A、胰岛素B、RnaseC、血红蛋白D、肌红蛋白
22.下列测定蛋白质分子量的方法中,哪一种不常用()
A、SDS-PAGE法B、渗透压法C、超离心法D、凝胶过滤(分子筛)法
23.分子结构式为HS-CH2-CH-COO-的氨基酸为()
A、丝氨酸B、苏氨酸C、半胱氨酸D、赖氨酸
24.下列氨基酸中为酪氨酸的是()
+
+
A、-CH2-CH-COO-B、HO--CH2-CH-COO-
HNNH
+
NH3NH3
+
C、CH2-CH-COO-D、CH3-S-CH2-CH2-CH-COO-
+
H
NH3NH3
25.变构效应是多亚基功能蛋白、寡聚酶及多酶复合体的作用特征,下列动力学曲线中哪种一般是别构酶(蛋白质)所表现的:
()
A、B、C、D、
26.关于二级结构叙述哪一项不正确()
A、右手-螺旋比左手-螺旋稳定,因为左手-螺旋中L-构型氨基酸残基侧链
空间位阻大,不稳定;
B、一条多肽链或某多肽片断能否形成-螺旋,以及形成的螺旋是否稳定与它
的氨基酸组成和排列顺序有极大关系;
C、多聚的异亮氨基酸R基空间位阻大,因而不能形成-螺旋;
D、-折叠在蛋白质中反平行式较平行式稳定,所以蛋白质中只有反平行式。
27.根据下表选出正确答案:
样品液中蛋白质的组分
蛋白质的pI
蛋白质分子量MW(KD)
A
6.2
40
B
4.5
30
C
7.8
60
D
8.3
80
①pH8.6条件下电泳一定时间,最靠近阳极的组分一般是();
②SephadexG100柱层析时,最先洗脱出来的组分应该是()。
28.前胰岛素原信号肽的主要特征是富含下列哪类氨基酸残基()
A、碱性氨基酸残基B、酸性氨基酸残基
C、羟基氨基酸残基D、亲水性氨基酸残基
29.蛋白质三维结构的构象特征主要取决于()
A、氨基酸的组成、顺序和数目B、氢键、盐键、范德华力和疏水力
C、温度、pH和离子强度等环境条件D、肽链间或肽链内的二硫键
30.双缩脲法测定禾谷类作物样品中的蛋白质含量时,加入少量的四氯化碳(CCl4)其主要作用是()
A、促进双缩脲反应B、消除色素类对比色的干扰
C、促进难溶性物质沉淀D、保持反应物颜色的稳定
31.醋酸纤维薄膜电泳时,下列说法不正确的一项是()
A、点样前醋酸纤维薄膜必须用纯水浸泡一定的时间,使处于湿润状态
B、以血清为样品,pH8.6条件下,点样的一端应置于电泳槽的阴极一端
C、电泳过程中保持恒定的电压(90~110V)可使蛋白质组分有效分离
D、点样量太多时,蛋白质组分相互粘联,指印谱带会严重拖尾,结果不易分析
五、问答题
1.组成蛋白质的20种氨基酸依据什么分类?
各类氨基酸的共同特性是什么?
这种分类在生物学上有何重要意义?
2.蛋白质的基本结构与高级结构之间存在的关系如何?
3.Edman反应所有的试剂和反应的特点如何?
4.何谓蛋白质等电点?
等电点时蛋白质的存在特点是什么?
5.何谓盐析?
分段盐析粗分蛋白质的原理是什么?
6.哪些因素可引起蛋白质变性?
变性后蛋白质的性质有哪些改变?
7.蛋白质分离分析技术常用的有哪几种,简述凝胶过滤、电泳基本原理。
8.有哪些沉淀蛋白质的方法?
其中盐析和有机溶剂沉淀法有何区别或特点?
9.溴化氰在多肽裂解中的作用部位,和裂解产物的末端氨酸残基为何物?
10.举例说明蛋白质一级结构与功能关系。
11.举例说明蛋白质变构效应与意义。
12.一样品液中蛋白质组分为A(30KD)、B(20KD)、C(60KD),分析说明用SephadexG100凝胶过滤分离此样品时,各组分被洗脱出来的先后次序。
13.多聚赖氨酸(poly-Lys)在pH7时呈无规线团,在pH10时则呈-螺旋;而多聚的谷氨酸酸(poly-Glu)在pH7时也呈无规线团,而在pH4时则呈-螺旋,为什么?
14.简述胰蛋白酶原激活过程。
15.-螺旋的特征是什么?
如何以通式表示?
16.高浓度的硫酸铵(pH5时)可使麦清蛋白沉淀析出,并用于初步分离该种蛋白的早期步,简要说明其原理。
17.用阳离子交换柱层析一氨基酸混合液(洗脱剂:
pH3.25,0.2N柠檬酸钠),其结果如下:
①各洗脱峰的面积大小或高度有何含义?
②Asp比Glu先洗脱出来的原因?
吸
光
度
洗脱剂流出体积
18.为什么鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂?
六、计算题
1.测得一种蛋白质分子中Trp残基占分子量的0.29%,计算该蛋白质的最低分子量(注:
Trp的分子量为204Da)。
2.一种蛋白质按其重量含有1.65%亮氨酸和2.48%异亮氨酸,计算该蛋白质最低分子量。
(注:
两种氨基酸的分子量都是131Da)。
3.某种氨基酸-COOHpK=2.4,-N+H3pK=9.6,-N+H3pK=10.6,计算该种氨基酸的等电点(pI)。
4.某种四肽-COOHpK=2.4,-N+H3pK=9.8,侧链-N+H3pK=10.6侧链-COOHpK=4.2,试计算此种多肽的等电点(pI)是多少?
5.有一种多肽,其侧链上羧基30个(pK=4.3),嘧唑基有10个(pK=7),-N+H3(pK=10),设C末端-羧基pK=3.5,N-末端氨基pK=9.5,计算此多肽的pI。
6.已知氨基酸平均分子量为120Da。
有一种多肽的分子量是15120Da,如果此多肽完全以-螺旋形式存在,试计算此-螺旋的长度和圈数。
答案:
二、选择填空1.D2.B3.C4.C5.D6.A7.B8.C9.C10.C11.D12.D13.B14.C15.C16.A17.C18.B19.B20.A22.B23.C24.B25.B26.D
六、计算题
1.解:
Trp残基MW/蛋白质MW=0.29%,蛋白质MW=64138Da。
2.解:
异亮氨酸/亮氨酸=2.48%/1.65%=1.5/1=3/2
所以,在此蛋白质中的亮氨酸至少有2个,异亮氨酸至少有3个。
由此推理出:
1.65%=2×(131-18)/蛋白质MW
答案:
蛋白质MW=13697Da。
3.答案:
pI=10.14.答案:
pI=7.0
5.解:
要计算多肽的等电点,首先应该找到静电荷为零的分子状态。
在此多肽中最多可以带有(30+1)个单位负电荷,而正电荷最多只有(15+10+1)个,相差了5个电荷。
要想让正负电荷数相等,只能让30个羧基(侧链-COOHpK=4.3)少带5个负电荷(-COOHpK=3.5,它比侧链-COOH易于解离,难于接受质子),即在30个侧链-COOH中有25个处于解离状态(-COO-),5个不解离(-COOH)。
因此:
pH=pKa+lg([碱]/[酸])=4.3+lg(25/5)=5.0。
6.解:
答案:
肽链长度=43.92(nm);该蛋白质(或多肽)分子量=14640Da
核酸
一、选择题
1.ATP分子中各组分的连结方式是:
A、R-A-P-P-PB、A-R-P-P-PC、P-A-R-P-PD、P-R-A-P-PE、P-A-P-R-P
2.决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是:
A、3′末端B、TyC环C、二氢尿嘧啶环D、额外环E、反密码子环
3.构成多核苷酸链骨架的关键是:
A、2′,3′-磷酸二酯键B、2′,4′-磷酸二酯键
C、2′,5′-磷酸二酯键D、3′,4磷酸二酯键
E、3′,5′-磷酸二酯键
4.含稀有碱基较多的核酸是:
A、核DNAB、线粒体DNAC、tRNAD、mRNAE、rRNA
5.有关DNA的叙述哪项绝对错误:
A、A=TB、G=CC、Pu=PyD、C总=C+mCE、A=G,T=C
6.真核细胞mRNA帽结构最多见的是:
A、m7ApppNmPB、m7GpppNmPC、m7UpppNmP
D、m7CpppNmPE、m7TpppNmP
7.DNA变性后,下列那一项变化是正确的?
A、对260nm紫外吸收减少B、溶液粘度下降C、磷酸二酯键断裂
D、核苷键断裂E、嘌吟环破裂
8.双链DNA的Tm较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致:
A、A+GB、C+TC、A+TD、G+CE、A+C
9.DNA复性的重要标志是:
A、溶解度降低B、溶液粘度降低C、紫外吸收增大D、紫外吸收降低二、填空题
五、问答题
1.核酸的组成和在细胞内的分布如何?
2.核酸分子中单核苷酸间是通过什么键连接起来的?
什么是碱基配对?
3.简述DNA和RNA分子的立体结构,它们各有哪些特点?
稳定DNA结构的力有哪些?
4.下列三种DNA中,哪个的Tm值最高?
哪个的Tm值最低?
为什么?
A、AAGTTCTCTGAATTAB、AGTCGTCAATGCATTC、GGATCTCCAAGTCAT
TTCAAGAGACTTAATTCAGCAGTTACGTAACCTAGAGGTTCAGTA
5.将下列DNA分子加热变性,再在各自的最适温度下复性,哪种DNA复性形成原来结构的可能性更大?
为什么?
A、ATATATATATB、TAGACGATGC
TATATATATAATCTGCTACG
6.真核mRNA和原核mRNA各有何异同特点?
六、计算题
1.由结核分枝杆菌提纯出含有15.1%(按摩尔计算)的腺嘌呤的DNA样品,计算其它碱基的百分含量。
2.计算分子量为3×107的双螺旋DNA分子的长度,含有多少螺旋(按一对脱氧核苷酸的平均分子量为618计算)?
3.人体有1014个细胞,每个体细胞含有6.4×109对核苷酸,试计算人体DNA的总长度(Km)。
答案:
一、选择题1.B2.E3.E4.C5.E6.B7.B8.D9.D
五、问答题
1.核酸由DNA和RNA组成。
在真核细胞中,DNA主要分布于细胞核内,另外叶绿体、线粒体和质粒中也有DNA;RNA主要分布在细胞核和细胞质中,另外叶绿体和线粒体中也有RNA。
2.核酸中核苷酸之间是通过3'-5'磷酸二酯键相连接的。
碱基配对是指在核酸中G-C和A-T(U)之间以氢键相连的结合方式。
3.DNA双螺旋结构模型特点:
两条反平行的多核苷酸链形成右手双螺旋;糖和磷酸在外侧形成螺旋轨迹,碱基伸向内部,并且碱基平面与中心轴垂直,双螺旋结构上有大沟和小沟;双螺旋结构直径2nm,螺距3.4nm,每个螺旋包含10个碱基对;A和T配对,G和C配对,A、T之间形成两个氢键,G、C之间形成三个氢键。
DNA三级结构为线状、环状和超螺旋结构。
稳定DNA结构的作用力有:
氢键,碱基堆积力,反离子作用。
RNA中立体结构最清楚的是tRNA,tRNA的二级结构为三叶草型,tRNA的三级结构为倒“L”型。
维持RNA立体结构的作用力主要是氢键。
4.c最高a最低c的G-C对多,a的G-C对少
5.a复性成原来结构可能性最大,因为它是单一重复序列。
6.真核mRNA的特点是:
(1)在mRNA5'-末端有“帽子结构”m7G(5')pppNm;
(2)在mRNA链的3'末端,有一段多聚腺苷酸(polyA)尾巴;(3)mRNA一般为单顺反子,即一条mRNA只含有一条肽链的信息,指导一条肽链的形成;(4)mRNA的代谢半衰期较长(几天)。
原核mRNA的特点:
(1)5'-末端无帽子结构存在;3'-末端不含polyA结构;(3)一般为多顺反子结构,即一个mRNA中常含有几个蛋白质的信息,能指导几个蛋白质的合成;(4)mRNA代谢半衰期较短(小于10分钟)。
六、1.A=T=15.1%G=C=34.9%2.1.65×10-3cm4854个3.2.2×1011Km
酶
二、选择题
1.有四种辅因子
(1)NAD,
(2)FAD,(3)磷酸吡哆素,(4)生物素,属于转移基团的辅酶因子为:
A、
(1)(3)B、
(2)(4)C、(3)(4)D、
(1)(4)
2.哪一种维生素具有可逆的氧化还原特性:
A、硫胺素B、核黄素C、生物素D、泛酸
3.含B族维生素的辅酶在酶促反应中的作用是:
A、传递电子、质子和化学基团B、稳定酶蛋白的构象
C、提高酶的催化性质D、决定酶的专一性
4.有机磷农药作为酶的抑制剂是作用于酶活性中心的:
A、巯基B、羟基C、羧基D、咪唑基
5.从组织中提取酶时,最理想的结果是:
A、蛋白产量最高B、转换系数最高
C、酶活力单位数值很大D、比活力最高
6.同工酶鉴定最常用的电泳方法是:
A、纸电泳B、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳
C、醋酸纤维薄膜电泳D、聚丙烯酰胺凝胶电泳
7.酶催化底物时将产生哪种效应
A、提高产物能量水平B、降低反应的活化能
C、提高反应所需活化能D、降低反应物的能量水平
8.下列不属于酶催化高效率的因素为:
A、对环境变化敏感B、共价催化C、靠近及定向D、微环境影响
9.米氏常数:
A、随酶浓度的增加而增加B、随酶浓度的增加而减小
C、随底物浓度的增加而增大D、是酶的特征常数
10.下列哪种辅酶结构中不含腺苷酸残基:
A、FADB、NADP+C、辅酶QD、辅酶A
11.下列那一项符合“诱导契合”学说:
A、酶与底物的关系如锁钥关系
B、酶活性中心有可变性,在底物的影响下其空间构象发生一定的改变,才能
与底物进行反应。
C、底物的结构朝着适应活性中心方向改变而酶的构象不发生改变。
D、底物类似物不能诱导酶分子构象的改变
12.下列各图属于非竞争性抑制动力学曲线是:
ABC
13.关于米氏常数Km的说法,哪个是正确的?
A、饱和底物浓度时的速度B、在一定酶浓度下,最大速度的一半
C、饱和底物浓度的一半D、速度达最大速度一半时的底物浓度
14.酶的竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应:
A、Vm不变,Km增大B、Vm不变,Km减小
C、Vm增大,Km不变D、Vm减小,Km不变
15.下面关于酶的描述,哪一项不正确:
A、所有的酶都是蛋白质B、酶是生物催化剂C、酶具有专一性
D、酶是在细胞内合成的,但也可以在细胞外发挥催化功能
16.催化下列反应的酶属于哪一大类:
1,6—二磷酸果糖3-磷酸甘油醛+磷酸二羟丙酮
A、水解酶B、裂解酶C、氧化还原酶D、转移酶
17.下列哪一项不是辅酶的功能:
A、传递氢B、转移基团
C、决定酶的专一性D、某些物质分解代谢时的载体
18.下列关于酶活性中心的描述,哪一项是错误的:
A、活性中心是酶分子中直接与底物结合,并发挥催化功能的部位
B、活性中心的基团按功能可分为两类,一类是结合基团,一类是催化基团
C、酶活性中心的基团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的基团
D、不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性中心
19.下列哪一种抑制剂不是瑚珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂:
A、乙二酸B、丙二酸C、丁二酸D、碘乙酸
20.酶原激活的实质是:
A、激活剂与酶结合使酶激活B、酶蛋白的别构效应
C、酶原分子空间构象发生了变化而一级结构不变
D、酶原分子一级结构发生改变从而形成或暴露出活性中心
21.酶原激活的生理意义是:
A、加速代谢B、恢复酶活性
C、生物自我保护的方式D、保护酶的方式
22.一个简单的米氏酶催化反应,当[S]< A、反应速度最大B、底物浓度与反应速度成正比 C、增加酶浓度,反应速度显著变大D、[S]浓度增加,Km值也随之变大 23.下列哪一项不能加速酶促反应速度: A、底物浓集在酶活性中心B、使底物的化学键有适当方向 C、升高反应的活化能D、提供酸性或碱性侧链基团作为质子供体或受体 24.关于酶的抑制剂的叙述正确的是: A、酶的抑制剂中一部分是酶的变性剂 B、酶的抑制剂只与活性中心上的基团结合 C、酶的抑制剂均能使酶促反应速度下降 D、酶的抑制剂一般是大分子物质 25.胰蛋白酶原经肠激酶作用后切下六肽,使其形成有活性的酶,这一步骤是: A、诱导契合B、酶原激活C、反馈调节D、同促效应 26.酶的比活力是指: A、任何纯酶的活力与其粗酶的活力比B、每毫克蛋白的酶活力单位数 C、每毫升反应混合液的活力单位 D、以某种酶的活力作为1来表示其他酶的相对活力 27.泛酸是下列哪一过程的辅酶组成成分: A、脱羧作用B、乙酰化作用C、脱氢作用D、氧化作用 28.下列哪一种维生素是辅酶A的前体: A、核黄素B、泛酸C、钴胺素D、吡哆胺 29.下列那种维生素衍生出了TPP: A、维生素B1B、维生素B2C、维生素B5D、生物素 30.某一酶的动力学资料如下图,它的Km为: -3-2-101231/[S] A、2B、3C、0.33D、0.5 四、计算题 1.某底物在溶液中的浓度为0.001mmol,而其活性中心的浓度的为100mmol,求活性中心的浓度比溶液中的的浓度高多少倍? 2.酶作用于某底物的米氏常数为0.005mol,其反应速度分别为最大反应速度90%,50%,10%时,底物浓度应为多少? 3.催化焦磷酸水解的酶的分子量为120000,由六个相同的亚基组成,纯酶的比活力为3600U/mg酶,它的一个活力单位(U)规定为: 15分钟内在37℃标准条件下水解10微摩尔焦磷酸的酶量。 求: (1)每mg酶在每秒钟内水解多少摩尔底物。 (2)每mg酶中有多少摩尔的活性中心? (假设每个亚基上有一个活性中心)。 (3)酶的转换系数 4.称取25mg的蛋白酶粉配制成25ml酶液,从中取出0.1ml,以酪蛋白为底物用Folin-酚比色法测定酶活力,结果表明每小时产生1500μg酪氨酸。 另取2ml酶液,用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2mg。 若以每分钟产生1μg酪氨酸的量为1个活力单位计算,根据以上数据,求: A、1ml酶液中蛋白的含量及活力单位。 B.1g酶制剂的总蛋白含量及总活力。 C.酶比活力 5.某酶的Km=4.7×10-5mol/L;Vmax=22μmol/min。 当[S]=2×10-4mol/L,[I]=5×10-4mol/L,Ki=3×10-4mol/L时,求: I为竞争性抑制和非竞争性抑制时,V分别是多少? 六、问答题 1.为什么处于低介电环境中的基团之间的反应会得到加强? 2.影响酶高催化效率的因素及其机理是什么? 为什么说咪唑基是酸碱催化中的重要基团? 3.什么是别构效应? 简述别构酶的结构和动力学特点及其在调节酶促反应中的作用。 4.某酶在溶液中会丧失活性,但若此溶液中同时存在巯基乙醇可以避免酶失活,该酶应该是一种什么酶,为什么? 5.测定酶活力时为什么以初速度为准? 6.为什么酶的最适pH不是一个物理常数?
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