实验二 球菌的分离培养及微生物学鉴定.docx
- 文档编号:5012686
- 上传时间:2022-12-12
- 格式:DOCX
- 页数:40
- 大小:53.55KB
实验二 球菌的分离培养及微生物学鉴定.docx
《实验二 球菌的分离培养及微生物学鉴定.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验二 球菌的分离培养及微生物学鉴定.docx(40页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
实验二球菌的分离培养及微生物学鉴定
实验二球菌的分离培养及微生物学鉴定
病原性球菌主要指葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌及淋球菌。
这些细菌经常引起人类的化脓性疾病,故又称化脓性球菌。
在临床进行微生物学检查时,根据这些细菌各不相同的形态、染色、培养等特点,即可做出初步诊断。
当难以确定它们的致病性或耐药性时,则需作进一步的实验来鉴定。
几种病原性球菌的主要形态、培养特点见表2-1。
表2-1病原性球菌的主要形态及培养
葡萄球菌
链球菌
肺炎链球菌
脑膜炎球菌
形态染色特点
革兰
染色性
G+
G+
G+
G-
形态
球形
球形
瓜子仁或矛头状
肾形
排列
葡萄串状
排列
链状排列
成双排列
成双排列
血平板上的菌落特点
大小
形态
中等大小
表面光滑
边缘整齐
小菌落凸起
表面光滑
灰白色
小菌落,扁平
略有凹陷
灰白色
小菌落、湿润露滴状,
灰白色
溶血
金葡菌完
全溶血
甲链:
不完全溶血
(草绿色溶血环)
乙链:
完全溶血
(透明溶血环)
丙链:
不溶血
不完全溶血
不溶血
色素
金黄色
白色
柠檬色
1、葡萄球菌属
(一)目的要求
1.掌握葡萄球菌的鉴定方法。
2.熟悉葡萄球菌的生物学性状。
(二)器材和试剂
1.菌种金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。
2.培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、甘露醇发酵管、甲苯胺蓝核酸琼脂、10g/L盐水琼脂,液体培养基。
3.试剂双氧水(H202)、革兰染色液。
4.其他新鲜兔血浆(或人血浆)、新生霉素纸片、标准肠毒素、幼猫、抗肠毒素血清。
(三)步骤和方法
1.形态观察取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许与载玻片上生理盐水磨匀,革
兰染色后镜检可见革兰阳性葡萄状排列的球菌。
2.菌落观察取三种葡萄球菌分别划线分离接种普通琼脂平板和血琼脂平板,35°C孵育18~24h后观察菌落。
三种葡萄球菌在普通琼脂平板上形成中等大小、圆形、表面光滑、边缘整齐、不透明菌落,并可产生不同的脂溶性色素,如金黄色葡萄球菌呈现金黄色色素、表皮葡萄球菌大多呈白色色素、腐生葡萄球菌大多呈柠檬色素。
三种葡萄球菌在血琼脂平板上出现的菌落类似它们在普通琼脂平板上的菌落,但金黄色葡萄球菌菌落周围有明显溶血环,而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌菌落周围无溶血环。
3.生化反应
(1)血浆凝固酶试验:
①原理:
金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶,可使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白,附着于细菌表面,在玻片上形成凝块;也可使试管中血浆发生凝固。
②方法:
玻片法:
取未稀释的兔血浆和生理盐水各--滴分别滴于载玻片上,挑取金黄色葡萄球菌菌落少许分别与它们混合,立即观察结果。
此法用于测定结合型凝固酶。
试管法:
取3支10mmX100mm试管,各加0.5mll:
4稀释的新鲜兔血浆(或人血浆),在其中一支试管中加0.5ml待检菌的肉汤培养物,另二支试管中分别加0.5m1凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物作对照,35°C孵育、每30min观察一次,一般观察3h。
此法用于测定游离型凝固酶。
③结果和意义:
玻片法:
细菌在血浆中聚集成团块,无法混匀则为血浆凝固酶试验阳性;反之,细菌在血浆中呈均匀混浊则为阴性。
试管法:
细菌使试管内血浆凝固呈胶冻状,为血浆凝固酶试验阳性;反之,试管内血浆不凝固仍流动的,则为阴性。
血浆凝固酶试验是鉴定致病性葡萄球菌和非致病性葡萄球菌的重要试验之一,前者多为阳性,后者为阴性。
(2)甘露醇发酵试验:
①原理:
致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸,使培养基由紫色变为黄色。
②方法:
将三种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管,35°C孵育18~24h后观察结果。
③结果和意义:
培养基呈混浊。
黄色为甘露醇发酵试验阳性,仍为紫色则是阴性。
致病性葡萄球菌可呈阳性,多数非致病性葡萄球菌为阴性。
(3)触酶试验:
①原理:
葡萄球菌产生的触酶(过氧化氢酶)能将对细菌有害的H2O2,分解成水和氧气。
②方法:
用接种环挑取葡萄球菌,置于洁净载玻片上,滴加3%H2O2溶液1~2滴,1min内观察结果。
③结果和意义:
产生大量气泡,为触酶试验阳性;而不产生气泡则为阴性(每次试验应有阳性菌株和阴性菌株作对照)。
本试验用于鉴别葡萄球菌和链球菌,前者为阳性,后者为阴性
(4)耐热核酸酶测定:
①原理:
致病性葡萄球菌能产生一种耐热核酸酶,它能分解DNA,使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色。
②方法:
玻片法:
取融化好的甲苯胺蓝核酸琼脂3ml均匀浇在载玻片上,待琼脂凝固后打6~8个小孔(孔径2mm),各孔分别加1滴经沸水浴3rnin处理过的待检葡萄球菌和阳性、阴性葡萄球菌培养物,35°C孵育弛,观察有无粉红色圈及其大小.
平板法:
将已形成葡萄球菌菌落的平板置60℃干燥热力灭菌2h,再将融化的甲苯胺蓝琼脂10ml倾注平板,35°C孵育3h,观察菌落周围有无粉红色圈。
③结果和意义:
玻片法孔外出现粉红色目的为阳性:
平板法葡萄球菌茵落周围呈粉红色圈的为阳性;不变色者为阴性。
耐热核酸酶测定,是鉴别致病性葡萄球菌和非致病性葡萄球菌的一个重要试验,前者为阳性,后者为阴性,因非致病性葡萄球菌一般只能产生不耐热核酸酶,而不产生耐热核酸酶。
(5)新生霉素敏感试验:
2原理:
表皮葡萄球菌对新生霉素敏感,而腐生葡萄球菌则对新生霉素耐药。
3方法:
先取待检菌密涂于血平板上,再贴上含5ug/片的新生霉素纸片,35℃孵育16~20h,观察抑菌圈大小。
试验时应以金黄色葡萄球菌ATCC25923作为阳性对照、以确认纸片是否失效。
③结果和意义:
抑菌圈直径≤16mm为耐药,>16mm为敏感。
此试验是用于鉴别表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌,前者为阳性,后者阴性。
4.血清学试验(琼脂扩散试验)
(1)原理:
金黄色葡萄球菌肠毒素与肠毒素抗血清在琼脂板上可形成白色沉淀线。
、
(2)方法:
将融化的10g/L盐水琼脂3ml倾注载玻片,在载玻片中央打一小孔,加满肠毒素抗血清,在四周打4个小孔,孔内分别加入标准肠毒素(阳性对照)、液体培养基(阴性对照)及待检培养物经处理后的上清液,加满为止,放人湿盒中,35℃24h孵育后观察结果。
(3)结果和意义:
在中央孔和待检菌孔之间出现白色沉淀线为阳性,无白色沉淀线为阴性。
此试验用于检测金黄色葡萄球菌是否产生肠毒素。
5.动物试验
(1)原理:
某些致病性葡萄球菌能产生一种耐热性蛋白质、通常在100°C30min不被破坏,注入动物后可产生食物中毒的症状。
(2)方法:
将金黄色葡萄球菌48h肉汤培养物煮沸30min(杀死金黄色葡萄球菌而不破坏肠毒素),并经3000r/min离心1h后,取上清液2ml注人幼猫静脉或腹腔,15min~2h内观察幼猫的情况。
(3)结果和意义:
幼猫发生呕吐、腹泻、体温升高、畏寒体颤等症状,表明动物肠毒素试验阳性,无变化则为阴性。
这是检测金黄色葡萄球菌是否产生肠毒素的体内试验,可用于诊断金黄色葡萄球菌引起的人类食物中毒。
6.临床意义
葡萄球菌属中的金黄色葡萄球菌常引起局部化脓性感染、脓毒血症、败血症、食物中毒、假膜性肠炎、剥脱性皮炎、中毒性休克等。
表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌可引起尿路感染等各种机会感染。
二、链球菌属和肠球菌属
(一)目的要求
1、掌握链球菌瞩和肠球茵属生物学特性和鉴定要点。
2、掌握抗链球菌溶血素“0”试验。
(二)器材和试剂
1菌种 甲、乙、丙型链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌。
2培养基血琼脂平板、马尿酸钠培养基、血清肉汤、菊糖发酵管、七叶苷斜面培养基、65g/LNacl血清肉汤培养基。
3.试剂革兰染色液、Fec13试剂、去氧胆酸钠溶液、抗“0”试剂、美蓝溶液。
4.其他杆菌肽纸片、人血浆、无菌生理盐水、Optochin纸片,、人血清、兔红细胞、乳胶反应板、家兔、小白鼠、注射器、剪刀。
(三)步骤与方法
1、形态观察取血琼脂平板上链球菌和肺炎链球菌分别涂片、革兰染色,镜检链球菌为革兰阳性、链状排列的球菌;肺炎链球菌为革兰阳性、成双排列的矛头状球菌。
2.菌落观察链球菌在血琼脂平板上生长后出现灰白色针尖大小菌落,菌落周围可出现不同的溶血情况,甲型链球菌菌落周围出现草绿色溶血环(α溶血,不完全溶血),乙型链球菌菌落周围出现透明溶血环(β溶血,完全溶血),丙型链球菌菌落周围无溶血环。
肺炎链球菌在血琼脂平板上出现的菌落与甲型链球菌相似。
肠球茵在血琼脂平板上出现灰白色、不透明的小菌落,菌落周围可出现а溶血环,也可无溶血环。
3.生化反应
(1)杆菌肽敏感试验:
①原理:
A群溶血性链球菌对杆菌肽敏感,故在血平板上杆菌肽纸片四周出现抑菌环。
②方法:
挑取被检的链球菌菌落,密集划在血平板上,将杆菌肽纸片(0.04单位/片)贴于血平板上,35℃孵育18~24h观察结果。
③结果和意义:
在杆菌肽纸片周围出现明显抑菌环的为杆菌肽敏感试验阳性,无抑菌环为阴性。
此试验是鉴别A群和其他群链球菌的一个重要试验,A群链球菌为阳性,其他群链球菌为阴性(对杆菌肽耐受)。
(2)链激酶试验:
①原理:
A群溶血性链球菌产生链激酶,能激活溶纤维蛋白酶原(血浆素原),使之变为有活性的溶纤维蛋白酶(血浆素)而溶解纤维蛋白。
②方法:
取健康人血浆0.2m1,加入含无菌生理盐水0.8ml的试管中,加入经18~24h肉汤孵育的待检菌0.5m1,混合后加入0.25m12.5g/LCaC12溶液,置35℃水浴10min。
③结果和意义:
血浆先凝固,随后又溶解。
在10min溶解凝固血浆为阳性,在15min内完全溶解凝固的血浆为强阳性,24h仍不溶解为阴性。
此试验是鉴定A群溶血性链球菌的一个重要试验。
(3)CAMP试验:
①原理:
B群溶血性链球菌(无乳链球菌)能产生CAMP,CAMP可促进金黄色葡萄球菌β溶血素活性,故在血平板上两种细菌交界处溶血增强,形成前头状透明溶血区。
②方法:
先将羊血琼脂平板上接种一条金黄色葡萄球菌,再用被检菌与金黄色葡萄球菌接种线垂直接种一短条,两者间隔3mm左右,35℃孵育18~24h观察结果。
同时设阳性对照和阴性对照。
③结果和意义:
与金黄色葡萄球菌接种线相垂直的待检菌接种线近端交接处出现箭头形溶血区为阳性,否则为阴性。
此试验是用于鉴别B群链球菌和其他链球菌的一个重要试验,前者为阳性,后者为阴性(一般不产生CAMP)。
(4)马尿酸钠试验:
①原理:
B群链球菌有马尿酸水解酶,可水解马尿酸为苯甲酸和甘氨酸,苯甲酸可与FeC13结合,形苯甲酸铁沉淀。
②方法:
取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基,35℃孵育48h,3000r/min离心30min,吸取上清液0.8ml于另一试管中,并加入FeC13试剂0.2m1,立即混匀60~15min观察结果.
③结果和意义:
出现恒定沉淀物为阳性;如果虽有沉淀物,但轻摇后立即溶解为阴性。
此试验用于鉴别B群链球菌和其他群链球菌,前者为阳性,后者为阴性。
(5)Optochin敏感试验:
“
①原理:
肺炎链球菌对Optochin(盐酸乙基氢化羟基奎宁ethylhydrocupreineHCI)敏感,它能干扰肺炎链球菌叶酸合成,故Optochin能抑制肺炎链球菌生长。
②方法:
挑取待检菌密集划线接种在血琼脂平板上,取Optdchin纸片(5ug/片)贴在平板上,35℃孵育18~24h观察结果。
③结果和意义:
抑菌圈直径>18mm为阳性,<15mm为阴性,15~18mm之间应重复试验。
此试验用于鉴别肺炎链球菌和甲型链球菌,前者为阳性,后者为阴性。
(6)胆汁溶菌试验:
①原理:
胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶,促进细菌细胞膜破损或菌体裂解。
②方法:
平板法:
加一滴100g/L去氧胆酸钠溶液于血琼脂平板草绿色溶血的菌落上,35℃孵育30min观查结果。
试管法:
加100g/L去氧胆酸钠溶液0.1ml于1ml草绿色溶血性链球菌和肺炎链球菌血清的培养液的试管中,摇匀后置35℃水浴10~15min观察结果。
③结果和意义:
平板法试验若菌落消失为阳性,菌落不消失为阴性。
试管法试验若液体由混浊变为透明为阳性,混浊不变为阴性。
此试验是用于鉴别肺炎链球菌和甲型链球菌的重要试验,前者为阳性,后者为阴性。
(7)菊糖发酵试验:
①原理:
肺炎链球菌能发酵菊糖产酸,使培养基中指示剂改变颜色。
②方法:
将被检菌接种菊糖发酵管中,35℃孵育18~24h观察结果”
③结果和意义:
培养基由紫色变为黄色为阳性,而不变色为阴性。
肺炎链球菌为阳性,甲型链球菌为阴性。
(8)七叶苷试验:
①原理:
肠球菌能水解七叶苷,生成葡萄糖和七叶素,七叶素与培养基中的拘椽酸铁的Fe2十起反应,形成黑色沉淀,使培养基变黑色。
②方法:
将被检菌接种七叶苷斜面培养基,35℃孵育18~24h。
③结果和意义:
培养基变黑色为阳性,不变色为阴性。
此试验是鉴定肠球菌的重要试验,而链球菌为阴性。
(9)65g/LNaCl生长试验:
①原理:
肠球菌具有很强的耐盐能力,能在65g/LNaCl血清肉汤培养基中生长呈混浊。
②方法:
将待检菌接种65g/LNaCl血清肉汤培养基中,35℃孵育18~24h。
③结果和意义:
血清肉汤混浊生长为阳性,肉汤透明为阴性。
此试验是鉴别肠球菌和链球菌的重要试验,前者为阳性,后者为阴性(链球菌耐盐能力较弱不能在此培养基上生长)。
4.血清学试验
抗链球菌溶血素“O”测定(即抗“O”试验antistreptolysinO,ASO)分传统法和胶乳法两种:
(1)传统法(溶血法):
①原理:
为毒素和抗毒素的中和试验、A群溶血性链球菌产生的溶血素“O”(SLO),能溶解红细胞。
SLO是一种含-SH基的蛋白质,不耐热,易被氧氧化而失去溶血能力,但加入还原剂可使其恢复溶血能力,SLO有很强的抗原性,人感染2~3周后,机体可产生抗“O”抗体,这种抗体能中和SLO,使之失去溶血能力。
↗抗“O”抗体十SLO十RBC→不溶血
待检血清
↘无抗O”抗体十SLO+RBC→溶血
②方法:
先将病人血清56℃30min灭活,然后将被检血清作1:
100、1:
500稀释,再按表2-2进行操作。
表2-2ASO测定(溶血法)
试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 对照
1:
100稀释0.50.40.30.20.15- - - - -
血清(ml)
1:
500稀释- - - - - 0.50.40.30.20.1
血清(m1)
pH6.5缓冲- 0.10.20.30.350.10.20.30.40.5
液(m1)
还原溶血素0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25
“O”(m1)
混匀后置37℃水浴15min
2%兔红细0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25
胞(ml)
混匀后置37℃水浴45min
血清稀释10012516625033050062583312502500
倍数
③结果和意义:
对光观察试管内上清液溶血现象,以完全不溶血的血清最高稀释倍数为该血清的ASO单位,>500U为阳性(若取出的试管结果不易观察,则将试管作1500r/min离心3min后再观察。
ASO阳性可认为患者近期受溶血性链球菌感染过,可辅助诊断风湿热、肾小球肾炎等疾病。
低于500U为阴性。
(2)胶乳法(胶乳凝集试验):
①原理:
ASO高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后,失去了正常水平量的抗体,多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应,出现清晰均匀的凝集颗粒(ASO胶乳试剂系羧化聚苯乙烯胶乳与溶血素“O”共价交联的产物)。
②方法:
先将病人血清56℃30min灭活,然后用生理盐水作1:
15稀释。
在反应板各孔内分别滴加稀释血清、阳性和阴性对照血清一滴(50ul),再在各孔内滴一滴溶血素“O”溶液,轻摇1min混匀,最后在各孔内分别滴加一滴ASO胶乳试剂,轻摇3min(18~20℃)后观察结果。
③结果和意义:
.出现清晰凝集为阳性,不凝集为阴性(ASO≤250IU/m1),意义同上。
5.动物试验
(1)透明质酸酶试验:
①原理:
A群溶血性链球菌能产生透明质酸酶(扩散因子),可溶解机体结缔组织中透明质酸,使组织疏松,通透性增高,有利于细菌在组织中扩散。
②方法:
取家兔一只,剪去背部(10cm×l0cm)的毛,常规消毒,待检菌24h血清肉汤培养物,3000r/min离心30min,吸取上清液1ml于试管中,加入0.1ml美蓝溶液混匀,用注射器吸取0.2ml注射家兔背部-侧消毒处皮内,另一侧皮内注射仅含美蓝的血清肉汤作对照。
注射后20min~lh观察结果。
③结果和意义:
比较两侧美蓝溶液在皮内扩散范围,若试验侧美蓝扩散圈直径较对照侧大之倍以上者为阳性,反之为阴性。
此试验用于A群溶血性链球菌的鉴定和测定其致病性。
(2)小白鼠毒力试验:
①原理:
小白鼠对肺炎链球菌十分敏感,少量有荚膜的肺炎链球菌可使小白鼠感染致死。
②方法:
将待检菌24h血清肉汤培养液稀释细菌为10×108/ml注射0.5ml培养液于小白鼠腹腔,饲养1~2天内观察小白鼠情况。
③结果和意义:
若小白鼠在1~2天内死亡为阳性,解剖作腹腔涂片、革兰染色镜检到革兰阳性、有荚膜的双球菌。
小白鼠不死亡为阴性。
此试验也是用于鉴别有荚膜的肺炎链球菌和甲型链球菌,前者为阳性,后者为阴性。
6.临床意义
链球菌属中α一溶血性链球菌虽为人体正常菌群,但可引起亚急性细菌性心内膜炎及泌尿道感染,还可引起食物中毒;A群溶血性链球菌可引起化脓性感染,如痈、淋巴管炎、扁机体炎、产褥热及败血症等,也可引起猩红热和变态反应性疾病,如风湿热、急性肾小球肾炎;B群链球菌可引起临产妇女感染和新生儿败血症等;C群链球菌可引起脑膜炎、肾炎等;肺炎链球菌可引起大叶性肺炎等;肠球菌最常见的为尿路感染,其中多为医院感染,还可引起败血症等。
近年来,肠球菌氨苄青霉素耐药株和庆大霉素耐药株逐渐增多,使肠球菌引起的重症感染治疗成为棘手的临床研究课题。
三、奈瑟菌属
(一)目的要求
1.掌握脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的鉴定要点。
2.熟悉脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形态和培养特性。
(二)器材和试剂
1.菌种 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌。
2,培养基 巧克力血平板、葡萄糖发酵管、麦芽糖发酵管、蔗糖发酵管、硝酸盐培养基。
3.试剂 氧化酶试剂3%H2O2、革兰染色液、硝酸盐还原试剂。
(三)步骤和方法
1.形态观察取脑膜炎患者脑脊液标本和淋病患者标本分别涂片、革兰染色镜检两种菌都为革兰阴性、肾形或豆形、成双排列、相邻边凹面相对的球菌,多位于吞噬细胞内,少数在吞噬细胞外。
但慢性淋病性尿道炎患者标本中不少细菌在吞噬细胞外。
2.菌落观察 脑膜炎奈瑟菌在巧克力血平板上的菌落呈圆形、凸起、光滑、湿润、透明、边缘整齐、直径为2~3mm似露滴状。
淋病奈瑟菌在巧克力血平板生长出现呈圆形、凸起、不透明、灰白色、直径为0.5~1.0mm的小菌落。
3.生化反应
(1)葡萄糖、麦芽糖和蔗糖发酵试验:
①原理:
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌可分解其中的单糖,发酵后使培养基酸性增高,从而使培养基由紫色变为黄色。
②方法:
将奈琴菌分别接种葡萄糖、麦芽糖和蔗糖发酵管,35℃孵育18~24h。
③结果和意义:
培养基呈黄色为阳性,培养基仍为紫色呈阴性。
这三种单糖发酵试验是鉴别脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的重要生化反应(见表2-3)。
(2)触酶试验:
见葡萄球菌生化反应。
(3)氧化酶试验:
①原理:
奈瑟菌等产生氧化酶,能将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺氧化成有色的醌类化合物。
②方法:
用滤纸条沾取被检菌落,用毛细滴管吸10g/L盐酸二甲苯对苯二胺试剂,滴一滴在滤纸条的菌落上(或直接将试剂滴于培养平板的菌落上),立即观察结果。
③结果和意义:
立刻出现红色,继而逐渐加深为阳性(如加盐酸四甲基对苯二胺试剂,呈现蓝紫色为阳性)。
不变色为阴性。
此试验是鉴定奈瑟菌的生化反应。
表2-3脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌生化反应
触酶氧化酶葡萄糖麦芽糖蔗糖硝酸盐还原
脑膜炎奈瑟菌十十十十——
淋病奈瑟菌十十十一—一
(4)硝酸盐还原试验:
①原理:
某些细菌能还原培养基中的硝酸盐,生成亚硝酸盐、氨和氮等。
当培养液中产生亚硝酸盐,与醋酸作用生成亚硝酸,亚硝酸与对氨基苯磺酸作用,成为重氮苯磺酸,它可与α一奈胺结合为红色的N-α-奈胺偶氮苯碘酸。
②方法:
将待检菌接种硝酸盐培养基,35℃孵育1~4天,每天吸取培养液0.5~1m1加入硝酸盐还原试剂0.1ml后观察结果.
③结果和意义:
立即或10min内呈红色为阳性,不变色为阴性。
如检查有无氮气产生,可在硝酸盐培养基的试管内加一支小倒管,有气泡在小倒管内,表示有氮气生成。
如加入硝酸盐还原试剂不出现红色,需检查硝酸盐是否被还原,可在原试管内再加入少许锌粉,如出现红色,表示硝酸盐仍存在。
若不出现红色表示硝酸盐已被还原为氨和氮。
此试验是用于鉴定奈瑟菌的一项生化反应,奈瑟菌为阴性。
(四)临床意义
脑膜炎奈瑟菌可引起流行性脑脊髓膜炎、菌血症和败血症。
淋病奈瑟菌是传播性病的主要病原菌,可引起淋病和新生儿结膜炎。
注意事项
1.在临床检验中,常遇到血浆凝固酶阴性的葡萄球菌,不能轻率作出非致病性葡萄球菌或污染菌的结论。
因血浆凝固酶阴性的葡萄球菌也可引起菌血症、尿路感染和心内膜炎等。
2.作ASO胶乳凝集试验时,当加入ASO胶乳后,轻摇至本说明规定的时间应立即记录结果,超过规定时间才出现凝集不作为阳性。
如标本发生溶血,高脂、高胆红素、高胆固醇血液,类风湿因子及被细菌污染都会影响试验结果。
胶乳试剂不可冻存,宜放4℃环境中,有效期为一年,用前摇匀。
室温低于10℃,在胶乳试剂加后应延长反应时间1`min,室温升高10℃,应缩短反应时间1min。
。
附录
1.硝酸盐培养基
硝酸钾0.5g酪蛋白酶解物10g
酵母膏3g蒸馏水1000m1
将上述成分溶解于水,调整pH至7.4,分装试管,每管2~3m1,103.43kP。
高压灭菌15min后备用.
2.硝酸盐还原试剂
甲液:
对氨基苯磺酸0.8g5mol/L醋酸100m1
乙液:
α-萘酸0.5g5mol/L醋酸100m1
临用前取等量甲、乙液混合后即成。
3.七叶苷培养基
胰蛋白胨1.5g七叶昔0.1g
琼脂粉2g构椽酸铁0.2g
蒸馏水100m1
将上述成分混会后加热溶解,pH为7.0,一般不需矫正,如其他蛋白胨,则需矫正pH至7.0。
分装试管后经103.43kpa高压灭菌15min后,趁热制成斜面后备用。
4.100g/L去氧胆酸钠溶液
去氧胆酸钠10g95%乙醇10m1
蒸馏水90m1
将上述各种成分溶解混合即成。
5.马尿酸钠培养基
肉浸汤(pH7.4)调100ml马尿酸钠1g
将马尿酸钠溶于肉浸汤内,分装试管,并于管壁与液面高度画一横线,103.43kPa高压灭菌20min后备用。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 实验二 球菌的分离培养及微生物学鉴定 实验 球菌 分离 培养 微生物学 鉴定