羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值论文Word格式.docx
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羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值论文@#@ 一般资料选择2017年4月~2017年4月在本院产科就诊的具有产前诊断指征的178例孕妇,年龄20~47岁,孕周16~25周,有70例孕妇唐氏综合征筛查为阳性,23例孕妇有异常生育史,60例孕妇年龄≥35岁,14例妇女于早孕服药,6例孕妇神经管急性筛查为阳性,5例孕妇丈夫染色体异常。
@#@@#@ 方法@#@ 羊膜穿刺经b超定位后,在无菌条件下,用一次性羊水穿刺针行羊膜穿刺术。
@#@舍弃最开始的2ml羊水,再抽取20~30ml的羊水放入2支无菌离心试管中。
@#@@#@ 羊水细胞培养以1000r/min的离心速度将2支无菌试管中的羊水进行离心处理达10min,舍弃上层清液,保留管内沉淀细胞和0.5ml羊水,加入20%胎牛血清及含张氏成分的5mlf10培养基,用细管使之混匀,将其接种于t-25的无菌试管中,在37℃有5%二氧化碳培养环境中进行培育,5d后观察细胞生长情况,若发现纤维状或者梭状细胞生长是,则可更换5ml新鲜培养液进行传代培养[2]。
@#@@#@ 收获细胞并进行制片在对羊水细胞进行培养6~7d后,在倒置的显微镜下对正在培养的羊水细胞进行观察,观察其生长情况,发现有不同大小的梭长形细胞正在进行克隆并生长,每个克隆过的细胞其生长状态良好并且已经形成细胞岛。
@#@对培养皿中的培养液进行定时的更换,每天对细胞进行观察,在观察2~3d后,发现每个形成的细胞岛已经逐渐长成为透亮细胞,这些细胞较大,细胞融合度达到70%~80%,并且数目不等,形状多呈圆形或类圆形,这时即可对细胞进行收获。
@#@在对细胞进行收获的前1d,更换新鲜培养液,在培养液中加入秋水仙素,使其浓度达到0.1mg/ml,在4~5h后,使用显微镜观察,发现培养液中出现大量的呈鱼眼状的细胞时,即可对细胞终止培养并进行收获。
@#@加入0.25%的2ml胰酶消化液,在37℃的环境下放置5min,使得瓶壁上细胞脱落,再以1500r的转速离心处理8min,弃上清液。
@#@加入1.5ml的0.4%枸缘酸钠和0.4%的氯化钾混合液低渗7min,滴片,常规g显带。
@#@每张玻片有20~30个细胞分裂相,进行染色体核型分析,每例分析核型5个。
@#@@#@ 核型统计分析使用显微镜对细胞核型进行观察,常规技术分散良好的细胞核型有30个中期分裂相,细胞核型计数发生异常的则有50个分裂相,如出现≥2个细胞核型计数异常,则对所有分裂相进行计数,使用染色体核型分析软件对核型图像进行采集,对3~5个核型进行分析,并完成报告,为遗传咨询提供意见。
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