应用ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术ATPTCAWord文件下载.docx
- 文档编号:13254631
- 上传时间:2022-10-08
- 格式:DOCX
- 页数:9
- 大小:69.43KB
应用ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术ATPTCAWord文件下载.docx
《应用ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术ATPTCAWord文件下载.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《应用ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术ATPTCAWord文件下载.docx(9页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
colorectalcancer
大肠癌是常见的肿瘤之一,属化疗中度敏感类肿瘤。
由于发现时多已属中、晚期,术后需辅助化疗。
每个病人对不同化疗药的敏感性不同,在化疗前为病人筛选出敏感性药物,进行个体化治疗,有助于提高化疗的疗效。
本研究采用现在较为先进的ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA),对58例新鲜大肠癌手术标本进行药敏检测。
1材料与方法
1.1临床资料
58例标本取自本院2002年3月-2004年7月就诊的大肠癌病人,其中57例是手术标本,1例是结肠癌皮下转移的活检标本。
均经病理学证实为大肠癌,其中结肠癌21例(腺癌20例,印戒细胞癌1例),直肠癌(腺癌)37例;
TNM分期为I-II期32例,III期25例,IV期1例。
病人中男性33人,女性25人;
年龄30-81岁,中位年龄58岁。
术前1人接受过放疗,1人接受过介入治疗,4人曾经手术。
1.2主要仪器和试剂
荧光测定仪MPL1型(德国Berthold公司);
ATP生物荧光肿瘤药物敏感性检测试剂盒(北京金紫晶生物医药技术有限公司),含混合消化酶、培养基、红细胞去除液、细胞培养板(96孔)、ATP提取液和荧光酶-荧光素工作液。
1.3体外药敏检测实验
新鲜的大肠癌标本,在含抗生素的培养基中浸泡25分钟后,剪成0.5~1mm3碎块,置于50ml离心管中,加入10ml含混合消化酶的培养基,于37℃消化2h。
160目筛网过滤,获得单细胞悬液,用培养基洗涤2次。
台盼蓝染色,计数活的肿瘤细胞。
先加待测药物于96孔培养板,所用药物及100%TDC(测试药物浓度)(100%TDC参考药物在人体内的血浆峰值浓度)见表1,联合用药的每个药物浓度与单药浓度相同。
每个药物设100%、50%、25%、12.5%、6.25%TDC五个浓度,每个浓度2个平行孔,并设2排(8孔)无药孔作对照,一排为无药对照(M0),一排为最大抑制对照(MI)。
接种肿瘤细胞,细胞数为2×
104个/孔。
在37℃,5%CO2条件下培养5d后,按试剂盒说明书操作,测定荧光值,并计算IC50和IC90。
表1所用的化疗药物及剂量
药物
100%TDC(μg/ml)
氟尿嘧啶(5-Fu)
25
健择(GEM)
甲氨碟呤(MTX)
2.75
阿糖胞苷(Ara-C)
丝裂霉素(MMC)
0.5
阿霉素(ADM)
1.0
表阿霉素(EPI)
吡柔比星(THP)
0.8
长春新碱(VCR)
0.88
长春瑞滨(NVB)
开普拓(CPT-11)
4.7
依托泊苷(VP-16)
20
羟基喜树碱(HCPT)
0.3
紫杉醇(PTX)
10.0
泰索帝(TXT)
4.6
顺铂(DDP)
3.6
草酸铂(L-OHP)
5.0
卡铂(CBP)
卡氮芥(BCNU)
2.0
1.4药敏检测判定标准:
参照Kurbacher等[KurbacherCM,CreeIA,Brucker.AnticancerDrugs.1998,9:
51-7]的判定标准:
高度敏感:
IC90<
100%TDC,IC50<
25%,以+++表示;
部分敏感:
IC90>
25%,以++表示;
低度敏感IC90<
100%TDC,IC50>
25%,以+表示;
不敏感:
IC90>
25%,以-表示。
2结果
2.1不同大肠癌标本对化疗药物单药的体外敏感性
58例大肠癌标本进行了4至16种单药和/或联合用药的药敏检测,其中44例仅选用了4至16种单药,3例仅选用3至8种联合用药药物,11例选用了单药和联合用药(共16种)。
表2显示大肠癌标本对16种单药的敏感性。
结果显示,大肠癌对单药对敏感性普遍较差,对HCPT、MMC、THP、NVB和5-FU的高度敏感率为分别为4.7%、3.1%、2.5%,2.0%和1.8%,而对其余10个单药对高度敏感率为0。
如将高度敏感率和部分敏感率之和定义为敏感性(下同),那么敏感性的顺序为NVB>
HCPT>
5-FU>
PTX,分别为34.0%、30.2%、29.1%、25.0%,其余12种单药的敏感性均低于20%;
CBP的活性最差,所有29例大肠癌标本无一对其高度敏感或部分敏感,仅5例(17.2%)标本对其显示低度敏感。
进行了单药药敏检测的55例标本中,有8例(14.5%)无敏感药物,17例(30.9%)有1个敏感药物,16例(29.1%)有2个敏感药物,10例(18.2%)有3个敏感药物,3例(5.5%)有4个敏感药物,1例(1.8%)有6个敏感药物。
表2大肠癌标本对单药的敏感谱
高度敏感
部分敏感
低度敏感
不敏感
(5-FU)
1.8(1/55)
27.3(15/55)
36.4(20/55)
32.8(19/55)
(GEM)
15.2(5/33)
12.1(4/33)
72.7(24/33)
(MMC)
3.0(1/33)
27.3(9/33)
54.5(18/33)
ADM
8.8(3/34)
17.6(6/34)
73.5(25/34)
EPI
10.0(4/40)
15.0(6/40)
75.0(30/40)
THP
2.5(1/40)
27.5(11/40)
60.0(24/40)
VCR
9.1(3/33)
87.9(29/33)
NVB
2.0(1/50)
32.0(16/50)
18.0(9/50)
48.0(24/50)
CPT-11
15.6(5/32)
68.8(22/32)
VP16
11.4(4/35)
28.6(10/35)
60.0(21/35)
HCPT
4.7(2/43)
25.6(11/43)
27.9(12/43)
41.9(18/43)
PTX
25.0(11/44)
43.2(19/44)
31.8(14/44)
TXT
3.4(1/29)
37.9(11/29)
58.6(17/29)
DDP
2.2(1/45)
4.4(2/45)
6.7(3/45)
86.7(39/45)
L-OHP
5.6(2/36)
16.7(6/36)
77.8(28/36)
CBP
17.2(5/29)
82.8(24/29)
2.2不同大肠癌标本对化疗药物联合用药的体外敏感性
表3显示的是8组二药或三药的联合用药结果。
大肠癌标本对PTX+CBP的敏感性为21.4%,并不高于PTX单药(25.0%);
同样,5-FU+DDP组的敏感性为23.1%,5-FU+MTX+ADM组的敏感性为25.0%,联合用药并不高于5-FU单药29.1%。
VP16+CBP组的敏感性为16.6%,略高于VP16单药(11.4%)。
结果表明PTX与CBP、5-FU与DDP、VP16与CBP之间,5-FU与MTX、ADM无协同作用,提示PTX+CBP,5-FU+DDP和VP16+CBP三组联合用药可能并无优势。
另外二组含5-FU的联合用药5-FU+VCR+BCNU和5-FU+DDP+ADM的敏感性分别是40.0%和53.9%,优于5-FU单药29.1%。
5-FU+MMC+Ara-C组的敏感性最高,为91.6%,明显高于5-FU和MMC的单药敏感率之和47.3%,提示5-FU+MMC+Ara-C联合用药可能优于5-FU或MMC单药。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 应用 ATP 生物 荧光 肿瘤 体外 检测 技术 ATPTCA
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)