专题2微生物的培养与应用Word文档下载推荐.docx
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单质碳不能作为碳源。
氮源是能为微生物的代谢提供氮元素的物质,如N2、NH3、NO3-、NH4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。
只有固氮微生物才能利用N2。
培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性,培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性,培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件)
6.无菌技术包括消毒和灭菌。
(①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
⑤无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
7.消毒与灭菌的区别:
消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。
消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(对于一些不耐高温的液体)还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒;
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。
灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
比较项
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
较为温和
部分生活状态的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
8.接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;
玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱;
培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。
9.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤:
计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
10.倒平板操作的步骤:
(①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。
②右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火焰。
③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。
④等待平板冷却凝固,大约需5~10min。
然后,将平板倒过来放置,使培养皿盖在下、皿底在上。
11.纯化大肠杆菌意思是分离提纯大肠杆菌。
12.微生物接种的方法最常用的是平板划线法(使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种。
)和稀释涂布平板法(分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
)。
13.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行保证无菌操作。
(应从操作的各个细节保证“无菌”。
例如酒精灯与培养皿的距离合适、吸管头不要接触其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围。
14.菌种的保存:
①临时保藏方法(频繁使用的菌种),②甘油管藏的方法(长期保存的菌种)。
(临时保藏方法,将菌种接种到试管的固体斜面培养基上,在合适的温度下培养。
当菌落长成后,将试管放入4℃的冰箱中保藏。
以后每3~6个月,都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。
该法的缺点:
这种方法保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异。
甘油管藏的方法,在3mL的甘油瓶中,装入1mL甘油后灭菌。
将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在-20℃的冷冻箱中保存。
15.分离土壤中分解尿素的细菌(含脲酶)的培养基是选择培养基(以尿素为唯一氮源)。
16.影响微生物生长的因子:
营养、温度、pH等。
17.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
18.测定微生物数量的常用方法:
稀释涂布平板法和显微镜直接计数。
19.稀释涂布平板法一般选取菌落数在30~300的平板进行计数,本法限于形成了菌落的微生物。
20.微生物的“天然培养基”是土壤。
21.每克样品中的菌落数=(C/V)·
M(C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml),M代表稀释倍数)
22.纤维素,一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖类物质。
23.纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
(前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
纤维素最终被水解成葡萄糖,为微生物的生长提供营养。
24.分离土壤中分解纤维素的细菌(含纤维素酶)的培养基是选择培养基(以纤维素为碳源)。
25.筛选纤维素分解菌方法:
刚果红染色法。
能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。
(刚果红是一种染料,它与纤维素形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生反应。
当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。
当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红-纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
这样就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
26.纤维素分解菌的帅选流程:
土壤取样→选择培养(此步是否需要,应根据样品中目的菌株数量的多少来确定)→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落
27.加入刚果红的顺序:
一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红。
补充知识点:
为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物?
在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用。
【典例1】某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。
实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。
请回答与此实验相关的问题:
(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和_______。
除此之外,培养基还必须含有的基本成分是________和________。
(2)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是___________________。
(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于________中培养,培养的温度设定在37℃。
要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种__________作为对照进行实验。
(4)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有_____种细菌。
一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越_____________。
(5)如果提高培养基中NaCl的浓度,可以用于筛选耐________细菌,这种培养基(按功能分)被称为_________________。
【典例2】某化工厂的污水池中,含有一种有害的、难以降解的有机化合物A,研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基,成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。
请分析回答问题:
(1)配制该培养基时确定各成分用量的原则_______________。
培养基配制好后,分装前应________;
接种前要进行__________,采用的方法是__________________________。
将配制好的培养基分装到容器中,放入________中灭菌,压力________kPa,温度________,时间________。
灭菌完毕后拔掉电源,待锅内压力自然降到0时,将容器取出。
如果棉塞上沾有培养基,此试管应_________。
使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入________,把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。
从配制培养基到培养完成,所采用的预防杂菌感染的方法是_________________________________________。
成分
含量
蛋白胨
10.0g
乳糖
5.0g
蔗糖
K2HPO4
2.0g
显色剂
0.2g
琼脂
12.0g
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的__________,若实验需要振荡培养,由此推测“目的菌”的代谢类型是__________。
若要配制观察细菌菌落状况的培养基,还需添加的成分是__________。
凝固前要搁置斜面,其目的是__________________________。
(3)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液,接入新的培养液中连续培养,使“目的菌”的数量__________。
为了使该实验所得结果可靠,应该同时在另一平板上接种__________作为对照进行实验。
在整个微生物的培养中,一定要注意在__________条件下进行。
(4)转为固体培养时,常采用___________________的方法接种,获得单菌落后继续筛选。
(5)若要研究“目的菌”的生长规律,可将单个菌落进行液体培养,采用_________________的方法进行计数,以时间为横坐标,以______________________________为纵坐标,绘制生长曲线。
(6)实验结束时,使用过的培养基应该进行__________处理后才能倒掉,以防止培养物的扩散。
(7)如果要检测水中是否含有大肠杆菌,培养基中还应加入染料____________________。
下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL,根据用途划分该培养基属于________培养基(选择、鉴别)。
该培养基中的碳源是________。
在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑__________、__________和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______________、________________等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料。
在在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养皿进行__________(消毒、灭菌);
操作者的双手需要进行清洗和__________;
静止空气中的细菌可用紫外线杀灭,原因是紫外线能使蛋白质变性,还能____________________。
若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的______________。
通常,对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的__________。
培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。
对于固体培养基应采用的检测方法是___________________________________________。
测定的大肠杆菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确可信的是__________。
A.
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