高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇Word文档下载推荐.docx
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3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱
4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱
5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀
6、柱温过低6、提高温度
7、控制器失常7、修理或更换控制器
8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱
9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器
D、压力持续偏低
1、流速设定过低1、调整流速
2、系统漏液2、确定漏液位置并维修
3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱
4、柱温过高4、降低温度
5、控制器失常5、维修或更换控制器
E、压力不断上升
1、见列表C1、见列表C
F、压力降为零
1、见列表A、B1、见列表A、B
G、压力不断下降,但不回零
1、见列表D1、见列表D
H、压力波动
1、泵中有气体1、a、溶剂脱气b、从泵中除去气体
2、单向阀损坏2、更换单向阀
3、泵密封损坏3、更换泵密封
4、脱气不充分4、a、溶剂脱气b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)
5、系统漏液5、确定漏液位置并维修
6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动
漏液
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。
如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);
损坏的接头应该更换掉。
A、接头处漏液
1、接头松动1、拧紧
2、接头磨损2、更换
3、接头过紧3、a、拧松,再重新拧紧b、更换
4、接头被污染4、a、拆下清洗b、更换
5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件
B、泵漏液
1、单向阀松动1、a、拧紧单向阀(不必拧的过紧)b、更换单向阀
2、接头松动2、拧紧接头(不必拧的过紧)
3、混合器密封损坏3、a、更换混合器密封b、更换混合器
4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件
5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器
6、脉冲阻尼器损坏6、更换脉冲阻尼器
7、比例阀损坏7、a、检查隔膜,如果漏液立即更换b、检查手紧接头,损坏的立即更换
8、放空阀的损坏8、a、拧紧放空阀b、更换放空阀
C、进样阀漏液
1、转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀
2、定量环阻塞2、更换定量环
3、进样口密封松动3、调整
4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针
5、废液管中产生虹吸5、保持废液管高于废液液面
6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管
D、色谱柱漏液
1、尾端接头松动1、拧紧接头
2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装
3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板(参考下表)
筛板选择指导
物质粒径筛板孔径
3-4u0.5u;
5-20u2u
E、检测器漏液
1、流通池垫片损坏1、a、避免过大的背景压力(压力降)b、更换垫片
2、流通池窗破碎2、更换窗口
3、手紧接头漏液3、拧紧或更换
4、废液管阻塞4、更换废液管
5、流通池阻塞5、重新安装或更换
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。
其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;
而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。
对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、峰拖尾
1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱
3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误4、调整PH值。
对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱
B、峰前延
1、柱温低1、升高柱温
2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载3、降低样品含量
4、色谱柱损坏4、见A1、A2
C、峰分叉
1、保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞,拆下来清洗。
如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。
如果可能采取流动相作为样品溶剂。
D、峰变形
1、样品过载1、减少样品载量
E、早出的峰变形
1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂
F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
1、柱外效应1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)b、使用小体积的流通池
G、K’增加时,脱尾更严重
1、二级保留效应,反相模式1、a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子
2、二级保留效应,正相模式2、a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入水(或多官能团化合物)d、试用另一种方法
3、二级保留效应,离子对3、加入三乙胺(或碱性样品)
H、酸性或碱性化合物的峰拖尾
1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
I、额外的峰
1、样品中有其他组份1、正常
2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速
3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积
J、保留时间波动
1、温控不当1、调好柱温
2、流动相组分变化2、防止变化(蒸发、反应等)
3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
K、保留时间不断变化
1、流速变化1、重新设定流速
2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当3、a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相
L、基线漂移
1、柱温波动。
(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器)1、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器图
2、流动相不均匀。
(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
)2、使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。
如有需要,可以用1N的硝酸。
(不要用盐酸)
4、检测器出口阻塞。
(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)4、取出阻塞物或更换管子。
参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。
为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。
使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。
8、使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂,但检测器未调整。
9、重新设定基线。
当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
10、将波长调整至最大吸收波长处
M、基线噪音(规则的)
1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。
冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液图2、见第三部分。
检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要,更换泵密封。
3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)4、减少差异或加上热交换器
5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。
6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器
N、基线噪音(不规则的)
1、漏液图1、见第三部分。
检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要,更换密封。
检查流通池是否漏液。
2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。
3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相
4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。
5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统
6、检测器内有气泡6、清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器
7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。
)7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池
8、检测器灯能量不足8、更换灯
9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱
10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置
O、宽峰
1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相
2、流动相流速太低2、调节流速
3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)3、见section3。
检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。
如果必要更换密封。
4、检测器设定不正确4、调整设定
5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长图5、a、小体积进样(例如:
10ul而不是100ul)以1:
10或1:
100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小的流通池c、使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间
6、缓冲液浓度太低6、增加浓度
7、保护柱污染或失效7、更换保护柱
8、色谱柱污染或失效,塔板数较低8、更换同样类型的色谱柱。
如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。
9、柱入口塌陷9、打开柱入口,填补塌陷或更换柱子
10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰10、选择其它类型的色谱
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