植物一氧化氮NO酶联免疫分析ELISAWord下载.docx
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用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,通过标准曲线计算样品中植物一氧化氮(NO)抗原浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成说明书封板膜密封袋酶标包被板标准品:
135ng/L标准品稀释液酶标试剂样品稀释液显色剂A液显色剂B液终止液浓缩洗涤液48孔配置1份2片1个1×
48×
1瓶×
1瓶3ml×
1瓶3ml×
1瓶96孔配置1份2片1个1×
96×
1瓶6ml×
1瓶6ml×
1瓶保存 2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存 标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的活性。
操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:
在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;
然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl, 1 2. 3.4.5.6.7.8.9.10.11. 混匀;
然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;
混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
。
加样:
分别设空白孔、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:
用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:
将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
洗涤:
小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:
每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:
操作同3。
操作同5。
显色:
每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 终止:
每孔加终止液50μl,终止反应。
测定:
以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
2 计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值标准曲线查出相应的浓度;
再乘以稀释 倍数;
或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11% 检测范围:
ng/L-120ng/L 保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:
;
2-8℃。
2.有效期:
6个月 3 PlantNO FORRESEARCHUSEONLY DrugNames GenericName:
PlantNOELISAKit. Purpose ThiskitallowsforthedeterminationofNOconcentrationsinPlanttissue,cellandothersamples. Principleoftheassay ThekitassayPlantNOlevelinthesample,usePurifiedPlantNOantibodytocoat microtiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddNOtowells,CombinedantibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofNOinthesamplesisthendeterminedbycomparingtheofthesamplestothestandardcurve. 4 Materialsprovidedwiththekit MaterialsprovidedwiththekitUsermanualClosureplatemembraneSealedbagsMicroelisastripplateStandard:
135ng/LStandarddiluentHRP-ConjugatereagentSamplediluentChromogenSolutionAChromogenSolutionBStopSolutionwashsolution48determinations121196determinations1211Storage 2-8℃2-8℃2-8℃2-8℃2-8℃2-8℃2-8℃2-8℃2-8℃×
1bottle×
1bottle3ml×
1bottle×
1bottle6ml×
1bottleSpecimenrequirements 1.extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevantliterature,andshouldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcan’t,specimencanbekeptin-20℃topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.2.Can’tdetectthesamplewhichcontainNaN3,becauseNaN3inhibitsHRPactive. Assayprocedure andaddsampletoStandard:
set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100μltothefirstandthesecondwell,thenaddStandarddilution50μltothefirstandthesecondwell,mix;
takeout100μlformthefirstandthesecondwellthenaddittothethirdandtheforthwellseparately.thenaddStandarddilution50μltothethirdandtheforth 5
well,mix;
thentakeout50μlfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50μltothefifthandthesixthwell,thenaddStandarddilution50μltothefifthandthesixthwell,mix;
takeout50μlfromthefifthandthesixthwellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50μltotheseventhandtheeighthwell,mix;
takeout50μlfromtheseventhandtheeighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandarddilution50μltotheninthandthetenthwell,mix,takeout50μlfromtheninthandthetenthwelldiscard(addSam
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