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实验一生药中常见化学成分的理化鉴定
(一)
一、实验目的要求:
1.了解化学检出法在药材鉴定中的应用。
2.熟悉药材鉴定中常用的理化鉴定方法。
3.掌握生物碱,羟基蒽醌的理化性质和定性检识反应。
二、实验主要材料、仪器及试剂:
马钱子、黄柏(苦参)黄连、大黄、秦皮、黄连乙醇液。
水浴锅、荧光灯、蒸发皿、锥形瓶、试管、微量升华装置。
碘化铋钾试液、碘化汞钾试液、碘一碘化钾试液、浓硝酸、浓硫酸、5%NaOH、HCl、乙醚、氨水。
三、实验内容:
1.显微化学反应法:
(1)将药材的切片或粉未置载玻片上,滴加适当试液,加盖玻片在显微镜下观察产生的颜色或结晶等,作为鉴别特征。
’
①取干燥马钱子的胚乳部分作徒手切片,加l%硫矾酸试剂l滴,镜检,观察结果。
②另取一切片,加浓硝酸l滴,镜检,观察结果。
(2)取药材粗粉加适当试剂浸出,将浸出液滴于载玻片上,滴加适当试剂,加盖玻片,镜检观察反应结果。
取黄连乙醇液1滴,加浓HN031滴,镜检,观察结果。
(3)取药材的切片或粉末滴加适当试剂,直接观察皇现的种种颜色作为鉴别特征。
取大黄饮片,加5%NaOHl~2滴,出现什么颜色?
再加稀HCl1~2滴,又出现什么颜色?
2.微量升华法:
是利用药材中所含的某些成分,在一定温度下能升华的性质,获得升华物,在显微镜下观察其形状,颜色及化学反应,作为鉴别特征。
具体方法:
取金属片,安放在有圆孔(直径约2cm)的石棉板上,金属片上放一小金属圈(高度约0.8cm),对准石棉板上的圆孔,圈内加药材粉末一薄层,圈上放一载玻片,在石棉板下圆孔处用酒精灯徐徐加热(火焰距板约4cm)数分钟,至粉末开始变焦,并有气化物发生,去火待冷,则有结晶状升华物附着于覆盖的载片上,将载玻片取下反转,在显微镜下观察结晶形状,并可加化学试液,观察其变化。
取大黄粉未,进行如上操作,观察反应结果。
3.荧光分析法:
将药材切片或粉末或提取液等,在荧光灯下观察荧光,有些药材不产生荧光,如以酸碱处理或其他化学方法处理后,可使其中某些成分在荧光灯下产生荧光,以便鉴别。
如取黄连饮片、浙贝母粉末或秦皮水浸液,在紫外灯下观察荧光颜色。
.‘
4.层析法:
‘
分为纸层析、柱层析、薄层层析等(略)。
5.化学定性检查:
药材中的化学成分可利用其能与某些试剂产生特殊的颜色、沉淀反应来进行鉴别。
(1)生物碱的检出:
沉淀反应取黄连,马钱子,黄柏(苦参)粉未各2g,分别盛入锥形瓶中,各加水l5ml,浓HClO.5ml,60℃水浴上温浸30分钟,时时振摇,取滤液备用。
各取2ml滤液于试管中,分别加下列试液2—3滴,观察有何现象?
碘化铋钾试液
碘化汞钾试液
碘一碘化钾试液
黄连
马钱子
黄柏(苦参)
(2)羟基功醌的检出:
Bomtrǎger反应取大黄粉未0.2g,置试管中加入5%NaOH试液4ml,在小火上煮沸,取滤液加HCl呈酸性后,再加乙醚5ml,振摇,分取醚层,于醚层中加入等量氨试液,振摇,观察反应现象。
四、作业:
简要记录各反应的实验步骤和结果。
五、思考题:
1.显微化学反应法有几种操作方法?
2.微量升华法用于生药鉴别有何特点?
3.含何类成分的生药常会产生荧光?
4.生物碱常甩的沉淀试剂有哪些?
Bornträ
ger反应过程的原理是什么?
实验二生药中常见化学成分的理化鉴定
(二)
.
掌握香豆精类,强心苷类、皂苷类、鞣质类、氰苷类、黄酮类的理化性质和定性检识反应。
秦皮、桔梗、穿山龙、五倍子、儿茶、苦杏仁、洋地黄叶、黄芩(槐米
水浴锅蒸发皿锥形瓶
盐酸羟胺甲醇液、l0%氢氧化钾甲醇液、乙醚、氯仿、盐酸、l%三氯化铁乙醇液、2%红血球悬浮液、1%盐酸奎宁试液、明胶液、铁铵矾试液、三氯化铁试液、冰醋酸、浓硫酸、镁粉。
1.化学定性检查
(1)香豆精类的检出:
异羟肟酸铁反应取秦皮粗粉0.2g,置具塞试管中,加乙醚3ml,浸渍5~10分钟,时加振摇,放置,吸取上清液(或滤过)于试管中加新配制的盐酸羟胺甲醇溶液2~3滴,l0%氢氧化钾甲醇溶液2~3滴,水浴温热1~2分钟,冷后加l0%盐酸,使pH为3~4,再加l%三氯化铁乙醇溶液1~2滴,两液混合面或溶液应显什么颜色?
(2)强心苷的检出:
三氯化铁一冰醋酸反应取洋地黄叶粉末0.5g,加水5ml,水浴加热20分钟,滤液加3mlCHCl3,振摇萃取后,再加乙醚3ml,待分层,用吸管吸取取下层,将CHCl3层转于蒸发皿中蒸干,放冷,加冰醋酸lml使残渣溶解,移人试管中,加三氯化铁溶液1滴,并沿管壁缓缓注入浓H2S04l5~20滴,观察上层液及界面的颜色变化。
(3)皂苷的检出:
①泡沫反应取桔梗粉末0.2g,加水5ml,加热煮沸,过滤,滤液在试管中强烈振摇,注意是否产生大量持久性泡沫。
②溶血试验取穿山龙的l%生理盐水溶液lml和l%生理盐水lml,分别置试管中,各加2%红血球悬浮液0.3ml,摇匀后放置,注意观察哪支试管溶液变清而透明。
(示溶血现象)
(4)鞣质的检出:
显色及沉淀反应取五倍子,儿茶粉末各0.5g,分别置于锥形瓶中,加25ml水,水浴加热,过滤备用。
各取滤液2ml,分别加下列试剂,观察反应现象。
1%盐酸奎宁试液
明胶液
铁铵矾试液、
五倍子
儿茶
(5)氰苷类的检出:
苦味酸钠反应取苦杏仁一粒捣碎,用水湿润置试管中,试管中悬挂用NaHC03饱和溶液湿润的苦味酸试纸一条,用软木塞塞紧,置40—50○C水浴中,观察试纸颜色变化。
(6)黄酮苷的检出:
盐酸镁粉反应取黄芩(槐米)粉末约0.2g,加乙醇5ml,水浴温热约5分钟,滤过,取滤液2ml,加镁粉少量,混匀,滴加盐酸数滴,注意有气泡产生,同时观察呈现什么颜色。
1、香豆精苷,强心苷,氰苷,黄酮苷及鞣质的反应机理是什么?
2、黄酮类成分遇盐酸一镁粉是否都显红色?
如不显红色是否可以否定黄酮成分的存在?
实验三根类生药
黄芪RabixAstragali、甘草RadixClycyrrbizae
一、实验目的:
l、掌握黄芪、甘草生药性状。
2、掌握黄芪、甘草粉末显微特征。
二、实验主要仪器及试剂:
显微镜、临时装片用具、蒸馏水、水合氯醛溶液、白瓷板、蒸发皿、蒸馏水、80%硫酸。
三、实验材料:
蒙古黄芪AstragalismembranaceusBgc.Var.mongholieus(Bgc.)Hsiao粉末、甘草clycyrrbizauralensisFisch.粉末。
四、实验内容及步骤:
1、镜检黄芪粉末,分别以蒸馏水和水合氯醛试液装片,注意以下特征:
①纤维众多,成束,细长,直径9~36μm,壁厚,非木化,孔沟不明显。
另取黄芪生药,刮取少量纤维(粉末),透化后装片,注意纤维的先端常纵裂成扫帚状。
②导管主为具缘纹孔导管,纹孔呈椭圆形,类方类或斜方形。
③木栓细胞表面观呈多角形或类方形。
④淀粉粒单粒类圆形、椭圆形或类肾形,直径3~13μm,复粒由2~4分粒组成。
2、镜检甘草粉末分别以蒸馏水和水合氯醛试液装片,注意以下特征:
①纤维众多,成束或散离,细长,直径6~14μm,壁厚,木化或非木化,孔沟不明显;
晶鞘纤维易察见,草酸钙方晶类双锥形,长方形或类方形,含晶细胞的壁增厚,微木化或非木化。
②导管主为具缘纹孔导管,多破碎,纹孔椭圆形或略呈斜方形,对列或互列,有的导管旁可见小型具缘纹孔管胞。
③木栓细胞棕红色,壁薄,微木化,表面观呈多角形。
④淀粉粒众多,单粒椭圆形、卵形或类球形,直径3~16μm,脐点点状或短缝状。
复粒稀少,由2分粒组成。
此外,尚有少数黄棕色或红棕色的色素块。
五、作业:
1、绘黄芪粉末特征图,示纤维,导管,木栓细胞与淀粉粒。
2、绘甘草粉末显微特征图,示晶纤维,具缘纹孔导管,木栓细胞和淀粉粒。
六、思考题:
l、甘草的组织构造中,有哪些较显著的鉴别特征?
2、什么是晶鞘纤维?
3、如何能方便而有效地鉴别甘草和黄芪粉末?
实验四根茎类生药
黄连、大黄
l、掌握黄连、大黄的生药性状特征。
2、掌握黄连大黄的粉末显微待征。
3、了解其它根及根茎类中药的性状特征
显微镜、临时装片用具、蒸馏水、水合氯醛试液。
黄连CoptischinensisFranch.原植物标本、生药(味连)组织切片及粉末。
1、取黄连粉末分别以蒸馏水及水合氯醛试液装片,镜检下列特征:
①石细胞鲜黄色、类圆形、类方形或类多角形,有时稍延长,长径25~75μm,孔沟及纹孔明显。
②韧皮纤维鲜黄色,纺锤形或长梭形,直径:
20~40μm,壁较厚,纹孔少。
③木纤维众多,常成束,鲜黄色,直径l5~35μm,壁具裂隙状纹孔。
④导管多为孔纹导管,也有具缘纹孔,网纹及螺纹导管。
⑤鳞叶表皮细胞类方形或长方形,壁薄曩垂厨壁微波状。
⑥淀粉粒单粒长圆形、肾形或类球形,直径l~l0μm,复粒少,由2~4分粒组成。
2、取大黄粉末分别以蒸馏水及水合氯醛试液装片,镜检下列特征:
①草酸钙簇晶大而多,棱角大多短钝。
,。
②导管主为网纹导管,并有具缘纹孔及细小螺纹导管,直径约至140μm,非木化。
③淀粉粒单粒呈圆球形或长圆形,脐点大多呈星状,复粒由2~7个分粒组成。
3、观察所示标本的性状特征。
l、绘黄连粉末显微特征图,示石细胞、韧皮纤维、木纤维、导管、鳞叶表皮细胞及淀粉粒。
2、绘大黄粉末显微特征图,示草酸钙簇晶、导管、淀粉粒。
l、如何从性状与组织上鉴别“味连”、“雅连”和“云连”?
实验五皮类生药
肉桂、黄柏
1、掌握肉桂、黄柏的生药性状与组织鉴别特征。
2、掌握皮类生药的鉴别特征。
显微镜、临时装片用具、蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油,间苯三酚溶液、浓HCl、小试管、氯仿、10%盐酸苯肼试液
肉桂、黄柏粉末。
1、取肉桂粉末分别用蒸馏水及水合氯醛试液装片后进行镜检,注意下列显微特征:
①纤维大多单个散在,长梭形,壁极厚,木化,纹孔及纹孔沟不明显。
②石细胞较多,类方形或类圆形,壁厚,有的一面菲薄。
③油细胞类圆形或长圆形,有时尚含黄色挥发油滴。
④草酸钙针晶众多,细小,散在或成束,常存在于射线细胞中。
⑤木栓细胞多角形,壁木化,内含红棕色物。
⑥淀粉粒单粒或2~4分粒组成的复粒。
2、理化鉴定
(1)取肉粉末约0.1g置小试管中,加氯仿l~2ml浸数分钟。
吸取氯仿浸出液2滴置载玻片上,再加10%盐酸苯肼试液l滴,加盖玻片后镜检,可见桂皮醛苯肼杆状结晶o
(2)取肉桂粉末少许,进行微量升华,于升华物上加l0%盐酸苯肼液l滴,加盖玻片镜检,可见桂皮醛苯肼杆状结晶。
3、取黄柏粉未分别用蒸馏水及水合氯醛试液装片进行镜检,注意下列显微特征:
①纤维及晶鞘纤维较多,鲜黄色,直径18—32μm,多成束存在o
②石细胞鲜黄色,成群或单个散在,类圆形者直径40~128μm,分枝状石细胞较多,长可至240μm,壁厚,层纹细密,孔沟不明显或较短。
③草酸钙方晶较多,直径8~24μm。
④粘液细胞多见,直径可至80μm。
⑤淀粉粒细小,多单粒球形,直径2~8μm。
l、绘肉桂粉末特征图、示木栓细胞、纤维、石细胞及草酸钙针晶。
2、绘黄柏粉末特征图,示纤维及晶鞘纤维,石细胞,粘液细胞等。
1、如何从性状及组织上鉴别川黄柏与关黄柏?
2、黄柏的石细胞有何特征?
3、肉桂横切组织有何特征?
实验六叶类、花类、果实、菌类生药
大青叶、金银花、小茴香、茯苓
l、掌握大青叶、金银花、小茴香、茯苓的生药性状及粉末显微特征。
2、熟悉其它叶类、花类生药的显微特征。
显微镜,临时装片用具,水合氯醛试液,甘油醋酸液,5%KOH溶液。
大青叶、金银花、小茴香生药、茯苓。
四、实验内容入步骤:
1、取大青叶粉末少量,水合氯醛试液透化装片,镜检下列特征:
。
①靛蓝结晶蓝色,存在于叶肉细胞和表皮细胞中,呈细小颗粒状或片状,常聚集成堆。
②上表皮细胞垂周壁近平直,下表皮细胞垂周壁稍弯曲,略呈连珠状增厚。
③气孔多存在于下表皮,不等式,副卫细胞3—4个。
2、取金银花粉末,以水合氯醛装片后镜检,可见以下特征:
(1)腺毛多见,有两种:
一种头部倒圆锥形,顶部平坦,约10~30个细胞,排成2~4层,柄2~5个细胞;
另一种头部类圆形或扁圆形,约6~20个细胞,柄2~4个细胞。
(2)非腺毛有两种:
一种为厚壁性,多为单细胞,表面有微细疣状突起,有的具角质螺纹;
另一种为薄壁性,单细胞,甚长,弯曲或皱缩。
(3)花粉粒类球形,表面有细密短刺及颗粒状雕纹,具3孔沟。
(4)草酸钙簇晶多见,常存在于萼筒组织中。
3、小茴香的鉴别
(1)性状鉴定
注意其为完整双悬果还是分果、双悬果的形态特征和色泽,顶端有无花柱残基,外表有几条棱线,基部果柄着生的状态及质地、气味等。
显微鉴定
(2)镜检小茴香双悬果横切片,观察一个分果的组织特征:
A:
外果皮为一列切向延长的扁平细胞。
B:
中果皮由数列薄壁细胞组成,分布有6个油管,分果棱脊间(果谷)各1个,接合面2个,油管呈椭圆形或半圆形,内含红棕色油脂,维管束柱位于分果棱脊
部位,由2个外韧型维管束及纤维束连接而成,使韧皮部位于木质部两侧,木质部由导管与纤维组成。
维管束柱四周围有大形木化网纹细胞o
C:
内果皮为一列扁平细胞,长短不一o
D:
种皮细胞扁平,含棕色物质,合生面的内果皮与种皮问有种脊维管束。
E:
胚乳细胞呈多角形,含糊粉粒和少数脂肪油,糊粉粒中含有细小的草酸钙族晶。
胚呈新月形,位于胚乳中央。
4、茯苓的鉴别
A:
性状鉴定观察茯苓性状,注意其形状、表面特征、色泽、质地、断面等特征。
茯苓粉末的观察
(1)甘油醋酸液装片:
不规则颗粒状团块,末端钝圆的分枝状团块及少量菌丝。
(2)5%KOH溶液装片:
菌丝细长、有分枝、无色或棕色、长短不一、横隔偶见。
1、绘金银花粉末图、示腺毛、非腺毛及花粉粒。
2、绘大青叶粉末显微特征图,示靛蓝结晶,表皮细胞及气孔。
3、绘小茴香分果横切面简图。
4、描述茯苓的性状特征、绘茯苓粉末的显微特征图,示茯苓团块及茯苓菌丝。
1.洋金花与金银花的花粉粒有什么区别?
2.伞形科植物果实组织的共同特点是什么?
小茴香的特异香气与其所含的哪些化学成份有关?
小茴香内果皮系镶嵌层细胞,在表面观时应呈何状排列?
3.如何从性状及显微特征上区别茯苓与猪苓?
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