AB荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx
- 文档编号:1768441
- 上传时间:2022-10-23
- 格式:DOCX
- 页数:22
- 大小:381.96KB
AB荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx
《AB荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《AB荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx(22页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
AB荧光定量荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程仪使用维护校准标准操作规程文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程使用维护标准操作规程颁发部门制订人:
复核人:
批准人:
质保部制订日期:
复核日期:
批准日期:
执行日期版本1.0编号SOP04006制作份数_份发送部门修订记录修订人修订原因修订内容版本修订日期1.目的:
确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用,保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2.范围:
适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。
3.定义:
无4.职责:
荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。
质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。
5.内容:
5.1室内温度控制在1530,相对湿度4575%。
5.2仪器操作5.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入Windows界面。
5.2.2接着打开AB7500仪器电源开关,预热10分钟。
5.2.3点击7500Softwarev2.3图标,打开软件。
5.2.4按压仪器托盘上的按压位,待托盘弹出后,将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位,记下放置位置。
检测8联PCR反应管用*反应孔模块,检测96孔PCR反应板用*反应孔模块。
(检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平,检测96孔PCR反应板无需配平)5.2.5再次按压托盘使其滑入仪器。
5.2.6新建扩增参数模板:
例如新建一个UG-63-62的模板,扩增参数是95,10;(95,10;63,45)5cycles;(95,10;62,35)40cycles,在62时收集荧光信号(HEX、FAM信号),20l反应体系。
5.2.6.1在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples中,将TargetName下的Target1改成FAM;点击AddNewTarget,将新增的Target1改成HEX,点击Reportee下拉菜单,选择VIC。
5.2.6.2在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20(20l反应体系)。
选中第一个HoldingStage,点击DeleteSelected删除;在CyclingStage中的NumberofCycles后输入5,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度63度,输入时间45秒,将63度下面收集荧光图标点掉;点击AddStage下拉菜单选择Cycling,在CyclingStage中的NumberofCycles后输入40,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度62度,输入时间35秒,在62度下面点击图标收集荧光。
3点击Save下拉菜单下的SaveAsTamplate,文件名输入UG-63-62,保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内,关闭设置界面。
5.2.7已有扩增参数模板:
在软件Home界面中点击Template,选择需要的模板,点击打开。
例如:
UG-63-62,其扩增参数就是95,10;(95,10;63,45)5cycles;(95,10;62,35)40cycles,在62时收集荧光信号(HEX、FAM信号),ReactionVolumePerWell:
20l(20l反应体系)。
5.2.8在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置,全部勾选Sample1;UGT1A1*6勾选HEX,UGT1A1*28勾选FAM。
-AmplificationPlot中点击STARTRUN,命名为(当日日期+当日上机次数,例:
2014年1月1日第1次上机编号为),保存在默认文件夹中,开始运行。
结果分析PCR反应结束后自动保存结果,对扩增曲线进行分析。
也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以(用户可根据实际情况自行调整,Start值可以在315、End值可设在520),Threshold值(Rn)推荐设定为500015000,点击Analyze进行分析,然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。
实验结束后取出反应管(切勿打开管盖),顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源,关闭电脑。
5.3仪器维护5.3.1每周维护检查计算机磁盘空间。
如需要,将实验文件归档或备份。
?
至少每周检查一次计算机磁盘空间。
?
如果硬盘的可用空间不足其总容量的20%,应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。
关闭控制7500Instrument的计算机,30秒后再次开启计算机。
用无绒布块(不脱毛)蘸取75%酒精清洁7500Instrument的表面。
(注:
切勿使用有机溶剂清洁7500Instrument。
)使用75%酒精浸泡反应管托架(晾干后放回仪器内)。
执行背景校准。
(可执行一次背景校准以检查是否存在污染物)运行磁盘清理和磁盘碎片整理。
?
至少每月一次。
?
当Windows?
操作系统显示消息提示执行碎片整理时。
?
切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500Real-TimePCRSoftware。
(6个月)维护1检查灯具状态。
在7500Software中,选择InstrumentLampStatus/Replacement以确定卤素灯的状态。
显示LampStatus/Replacement对话框:
?
Condition表示以下其中一种状况:
Good灯具工作良好,不需要更换。
单击Close。
Failed必须更换灯具。
单击Close,然后按照步骤更换卤素灯。
ChangeSoon灯具使用超过2000小时;生产商建议将其更换。
单击Close,然后决定是否更换灯具。
如果决定更换,请按照步骤更换卤素灯。
?
Usage(Hours)灯具已照明的总小时数。
?
LampCurrent灯具的输出电流,以安培为单位(A)。
低电流意味着灯具可能将要失效。
?
DateLastReplaced上次更换灯具的日期。
在执行一次运行之前或期间,7500Software可能显示以下警告:
消息描述WarningCannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.在运行开始时,灯具电流低于可接受水平。
在按照步骤更换卤素灯具之前,无法继续该运行。
WarningCannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.7500Software停止了该次运行,因为在运行中灯具电流下降到可接受水平之下。
在按照步骤更换卤素灯具之前,无法继续该运行。
在消息框中单击OK,检查仪器日志,然后更换灯具。
Warning-Thelampusagehasexceeded2000hr.Werecommendreplacingthelampsoontoensureoptimalassayperformance.在运行开始时,灯具使用时间超过2000小时。
单击CancelRun,然后更换灯具,或者单击ContinueRun。
重新运行ROI、背景、光学和染料校准。
执行目标区(ROI)校正。
执行背景校准。
执行光学校准。
执行染料校准。
执行RNaseP仪器验证试验。
5.3.4其它维护任务(需要时执行)样本块污染清除。
执行以下程序,去除7500Instrument样本块的荧光污染。
荧光污染是导致背景运行失败的常见原因,在此情况下,一个或多个反应孔会持续表现出异常的高信号。
注意!
切勿移去设备上的盖板。
7500Instrument中没有用户可安全维修的组件。
如果怀疑存在问题,请联系生产商服务代表。
全程戴上一次性无粉手套操作。
找到样本块中受污染的反应孔(参阅“如何确定污染”)。
从7500Real-TimePCRInstrument中取出反应板和托盘支架。
a.按压托盘门,将其打开。
b.取出反应板和托盘支架。
c.关闭托盘门。
以一定角度向托盘右侧施加压力。
手动降低样本块:
a.在7500Software中,选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。
b.在InstrumentMaintenanceManager的ROI选项卡中,单击StartManualCalibration。
c.在ROIInspector对话框中,单击MoveBlock。
d.当ROIInspector对话框显示“BlockDown”时,单击Done。
关闭7500Real-TimePCRInstrument,然后拔下其电源电缆。
允许仪器冷却15分钟。
打开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。
a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔内,然后推动以解开门栓。
b.打开仪器前门。
抬起门栓,然后将受热的护盖门推到仪器的背面。
使用少量的双蒸水,清洁样本块中被污染的反应孔:
a.用移液管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反应孔中。
b.抽吸并滴入反应孔中的双蒸水数次,以冲洗反应孔。
c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。
d.使用棉花拭子,擦试每个被污染的反应孔的内壁。
e.使用无绒布料,吸出残余的双蒸水。
7500Real-TimePCRInstrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。
抬起门栓,然后将受热的护盖门紧固到交叉杆。
打开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。
?
插上电源插头并开启7500Instrument。
?
通过执行背景校准运行确认已消除污染(参阅5.4.2“背景校准”)。
?
如果污染仍然存在,重复步骤至,然后使用95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反应孔:
a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反应孔中。
b.抽吸并滴入反应孔中的溶液数次,以冲洗反应孔。
c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。
重要!
使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反应孔之后,应始终使用双蒸水冲洗反应孔。
?
重复步骤至?
,以冲洗样本块的反应孔,并验证已清除掉污染物。
?
如果污染仍然存在,重复步骤至,然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反应孔:
a.用移液管吸取少量10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反应孔中。
b.抽吸并滴入反应孔中的溶液数次,以冲洗反应孔。
c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。
重要!
使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反应孔之后,应始终使用去离子水冲洗反应孔。
?
重复步骤至?
,以冲洗样本块的反应孔,并验证已清除掉污染物。
如果仍有污染,请与生产商技术支持联系。
?
确保受热盖门完全关闭并上闩。
如果没有,则7500Software显示错误消息。
2移动PCR仪。
(更换或移动光学器件的任何部件后,必须执行ROI校准、背景校准、光学校准、染料校准以及RNaseP仪器验证。
)3更换卤素灯。
全程戴上一次性无粉手套操作。
关闭7500Instrument,然后拔下其电源电缆。
允许仪器冷却15分钟。
a.注意!
灼热。
7500Instrument和灯具灼热!
灯具在使用中会变得非常灼热。
在处理灯具之前,应允许灯具冷却15分钟,并戴上无粉防护手套。
b.重要!
为避免灼伤及缩短新灯具的使用寿命,处理灯具时请戴上一次性无粉手套。
c.注意!
7500Instrument按设计仅可使用12V、75W的卤素灯。
打开7500Instrument的检查门。
a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔内,然后推动以解开门栓。
b.打开仪器前门。
从仪器中取出灯具
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- AB 荧光 定量 PCR 使用 维护 校准 标准 操作规程