第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术.docx
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第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术
第十四章免疫细胞的分离及表面标志检测技术
第十五章免疫细胞功能检测技术
SeparationandAssaysforImmunocyte
第一部分目的要求和教学内容
一、目的要求
掌握:
Ficoll—hypaque分层液分离PBMC的原理、方法,淋巴细胞亚群分离的原理、
方法及应用,T细胞增殖试验的方法,B细胞的数量及功能的检测,NK细胞的活性、中
性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法;熟悉:
T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞
毒检测的方法;了解:
淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空
斑试验。
二、教学内容
1.免疫细胞的分离与纯化:
细胞的分离,外周血单个核细胞的分离,淋巴细胞的纯
化与亚群分离,吞噬细胞的分离。
2.淋巴细胞的数量检测:
T细胞数量检测,B细胞数量检测。
3.淋巴细胞的功能检测:
T细胞功能检测,B细胞功能检测,NK细胞活性测定。
4.吞噬细胞功能检测:
中性粒细胞功能检测,巨噬细胞功能检测。
第二部分测试题
一、选择题
(一)单项选择题(A型题)
1.外周血中的单个核细胞主要是指
A.淋巴细胞
B.嗜酸粒细胞
C.单核细胞一淋巴细胞
D.单核细胞
E.中性粒细胞
2.分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为
A.1.030
B.1.035
C.1.092
D.1.020
E.1.077
3.用FicolI—hypaque分层液分离PBMC,分离的PBMC层位于试管的
A.血浆层之上
B.血浆层之中
C.血浆层与分层液之间
D.分层液之中
E.试管底部
4.用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时,从柱上洗脱下的细胞主
要是
A.粒细胞
B.淋巴细胞
C.单核细胞
D.T细胞
E.B细胞
5.能与SRBC占合形成E花环的细胞主要是
A.T细胞
B.B细胞
C.单核细胞
D.粒细胞
E.血小板
6.用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞,其结果代表的是
A.T细胞总数
B.Th胞数
C.Ts细胞数
D.CD4+细胞数
E.CD8+胞数
7.用尼龙棉柱分离细胞时,不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是
A.粒细胞
B.B细胞
C.单核细胞
D.T细胞
E.血小板
8.表示淋巴细胞的活力常用
A.活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比
B.活细胞浓度
C.淋巴细胞浓度
D.活细胞和总细胞的比值
E.T细胞和B细胞的比例
9.用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出
A.血小板
B.B细胞
C.单核细胞
D.T细胞
E.巨噬细胞
10.活细胞经台盼蓝染色后呈
A.蓝色
B.棕色
C.红色
D.不着色
E.天青色
11.荧光标记法计数外周血B淋巴细胞,检测的特有的表面标志是
A.CDl9
B.CD20
C.补体受体
D.SmIg
E.FcR
12.NK细胞特有的表面抗原是
A.CD2
B.CDl6
C.无特异的表面抗原
D.CD23
E.CD56
13.仅能使T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是
A.PHA
B.PWM
C..LPS
D.ConA
E.EBV
14.能使B细胞和T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是
A.PHA
B.PWM
C..LPS
D.SPA
E.EBV
15.检查体液免疫功能最常用的方法是
A.血清免疫球蛋白定量测定
B.溶血空斑试验
C.B淋巴细胞计数
D.淋巴母细胞转化试验
E.SmlgG测定
16.溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能
A.T细胞
B.B细胞
C.中性粒细胞
D.吞噬细胞
E.NK细胞
17.测定T淋巴细胞功能的体内试验是
A.锡克试验
B.狄克试验
C.结核菌素试验
D.天然血型抗体滴度
E.血清:
IgG测定
18.正常人外周血T淋巴细胞转化率为
A.<40%
B.40%~50%
C.60%~80%
D.80%
E.>90%
19.常用检测细胞毒效应的方法是
A.3H-TdR掺人法
B.125I释放法
C.51Cr释放法
D.形态学检测法
E.CD8检测法
20.包被有抗Ig抗体的亲和板,其吸附的是
A.T细胞
B.B细胞
C.NK细胞
D.NKT‘细胞
E.吞噬细胞
21.Ficoll—hypaque液分离淋巴细胞是一种
A.不连续密度梯度离心法
B.连续密度梯度离心法
C.亲和层析法
D.离子交换层析法
E.自然沉降法
22.Ficoll—hypaque淋巴细胞分离液的主要成分是
A.聚蔗糖
B.泛影葡胺
C.聚乙二醇
D.聚蔗糖+泛影葡胺
E.聚蔗糖+聚乙二醇
23.Percoll分离液的主要成分是
A.聚蔗糖
B.泛影葡胺
C.聚乙二醇
D.聚乙烯吡咯烷酮
E.经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒
24.检测中性粒细胞杀菌功能的方法是
A.NBT还原试验
B.白细胞计数
C.溶血空斑试验
D.淋巴母细胞转化试验
E.补体介导的细胞毒试验
25.MTT比色法检测IL-2活性,下列哪项是错误的
A.需要IL一2依赖细胞株
B.增殖细胞具有吸收MTT的能力
C.颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱
D.可反映B细胞的功能
E.可反映T细胞的功能
(二)多项选择题(x型题)
1.淋巴细胞分离液要求符合的条件有
A.对细胞无毒
B.高渗
C.不溶于血液
D.无色
E.有合适的比重
2.与T细胞计数有关的表面抗原是
A.CD2
B.CD3
C.CD4
D.CD8
E.CDl9
3.与B细胞计数有关的表面标志是
A.SmIg
B.CDl9
C.CD20
D.CD21
E.CD2
4.符合淋巴母细胞转化的形态学特征有
A.细胞体积变小
B.核仁明显、核染质疏松
C.可见有丝分裂
D.胞浆极少,呈天青色
E.胞内可见空泡
5.用酶联免疫斑点试验检测B细胞功能的优点有
A.稳定、特异B.可检测抗体分泌细胞
C.可检测抗体的分泌量D.可同时进行B细胞计数
E.可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌
6.细胞免疫功能测定包括以下哪些
A.T细胞计数
B.B细胞计数
C.T细胞功能测定
D.Tc细胞效应测定
E.细胞因子测定
7.检测淋巴细胞亚群常用的方法有
A.免疫荧光法
B.流式细胞仪测定
C.酶免疫组化法
D.放射免疫法
E.免疫金染色法
8.细胞免疫功能体内试验方法有
A.细胞毒试验
B.混合淋巴细胞反应
C.皮肤试验
D.淋巴细胞增殖试验
E.接触性过敏试验
9.T细胞增殖试验常用的检测方法有
A.流式细胞仪法
B.形态学方法
C.51Cr释放法
D.MTT检测法
E.3H一FdR掺人法
10.检测吞噬细胞功能的方法有
A.吞噬试验
B.杀菌试验
C.NBT还原试验
D.化学发光测定法
E.趋化功能测定法
11.淋巴细胞亚群的分离方法有
A.E花环分离法
B.尼龙棉柱分离法
c.亲和板结合分离法
D.免疫磁珠分离法
E.超速离心分离法
12.T细胞数量检测包括
A.T细胞增殖试验
B.间接荧光免疫法
C.酶免疫组织化学法
D.微量细胞毒试验
E.花环技术
13.检测T细胞数量的花环试验有
A.酵母菌花环试验
B.补体C3b花环试验
C.E花环试验
D.葡萄球菌花环法
E.抗体致敏细胞花环法
14.B细胞表面具有、
A.mIg
B.CD抗原
C.Fc受体
D.补体受体
E.EB病毒受体
15.B细胞数量检测的方法包括
A.mIg的检测法
B.CD抗原检测法
C.Fc受体检测法
D.补体受体检测法
E.小鼠红细胞受体检测法
16.B淋巴细胞功能的测定方法有
A.B细胞增殖试验
B.溶血空斑试验
C.酶联免疫斑点法
D.体内测定法
E.形态学检查法
17.中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法
A.形态学检查法
B.显微镜检查法
C.溶菌法
D.NBT还原试验
E.化学发光测定法
18.巨噬细胞功能的检测方法包括
A.炭粒廓清试验
B.吞噬功能检测
C.巨噬细胞溶酶体酶测定
D.细胞毒作用测定
E.巨噬细胞促凝血活性测定
(三)配伍题
问题1-3
A.红细胞层
B.粒细胞层
C.单个核细胞层
D.血浆与血小板层
E.淋巴细胞分离液层
1.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,最上层是
2.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,最下层是
3.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,第二层是
问题4-6
A.淋巴细胞转化试验
B.溶血空斑试验
C.炭粒廓清试验
D.琼脂糖凝胶平板法
E.化学发光测定法
4.巨噬细胞吞噬功能的检测:
5.中性粒细胞趋化功能的检测:
6.中性粒细胞吞噬和杀菌功能的检测:
二、填空题
1.PBMC包括()和()。
2.在反相溶血空斑试验中,每一个空斑代表一个()。
3.B细胞表面特异的标志是()。
4.常用的测定淋巴细胞活力的方法是()。
5.淋巴细胞转化情况的判定方法有()、()和()。
6.淋巴细胞转化试验应用的同位素是(),细胞毒试验应用的同位素是()
7.分离外周血白细胞常用的方法是()和()。
8.去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有()和()。
9.去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有()和()。
10.检测T细胞数量的花环技术包括()()和();检测B细胞数量的花环技术主要有()和()。
11.淋巴细胞和单核细胞的密度为()。
12.外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为()()及()层。
三名词解释
1.外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)
2.E花环试验(erythrocyterosettetest)
3.淋巴母细胞转化试验(1ymphoblasttransformationassay)
4.溶血空斑试验hemolyticplaqueassay)
5.四唑氮蓝还原试验(nitrobluetetrazoliumrecoveryassay,NBT还原试验)
四、简答题
1.简述T淋巴细胞转化的试验原理和镜下淋巴细胞转化形态学特征。
2.叙述T细胞介导的细胞毒试验的原理、意义和方法分类
3.测定吞噬细胞功能有哪些常用方法?
五.论述题
简述Fic011一hypaque分离液分离PBMC的原理、步骤和注意事项。
第三部分参考答案与题解
一、选择题
(一)单项选择题(A型题)
1.C2.E3.C4.B5.A6.A7.D8.A9.E10·D
11.D12.C13.A14.B15.A16.B17.C18.C19.C20·B
21.A22.D23.E24.A25.D
(二)多项选择题(X型题)
1.ACDE2.ABCD3.ABCD4.BCE5.ABCDE6.ACDE
7.ABCE8.CE9.BDE10.ABCDE11.ABCD12.BCDE
13.CDE14.ABCDE15.ABCDE16.ABC
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- 第十四 免疫 细胞 分离 及其 表面 标志 检测 技术