第三章-细胞化学染色.ppt
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第三章第三章细胞化学染色细胞化学染色编辑制作何旭春第三章细胞化学染色细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学,是以细胞形态学为基础,结合成的一门科学,是以细胞形态学为基础,结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成分分(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)作定作定性、定位、半定量分析的方法。
性、定位、半定量分析的方法。
定义:
定义:
第一节第一节概概述述第三章细胞化学染色第一节第一节概概述述基基本本步步骤骤第三章细胞化学染色固固定定显显示示复复染染第三章细胞化学染色第一节第一节概概述述第三章细胞化学染色固固定定物物理理法法化化学学法法干燥固定干燥固定火焰固定火焰固定蒸汽固定蒸汽固定液体固定液体固定第一节第一节概概述述偶偶氮氮偶偶联联法法雪雪夫夫反反应应联联苯苯胺胺法法普普鲁鲁士士蓝蓝反反应应金金属属沉沉淀淀法法显显示示第三章细胞化学染色第三章细胞化学染色复染的目的在于使各种细胞能显示出来以复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便于观察。
选择复染液的颜色应与有色沉淀的便于观察。
选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度,即能使细胞结构显示又颜色有明显的对比度,即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。
能清楚地看出细胞化学染色结果。
复复染染第一节第一节概概述述临临床床应应用用第一节第一节概概述述辅助判断急性白血病的细胞类型辅助判断急性白血病的细胞类型辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断观察疾病疗效和预后观察疾病疗效和预后探讨发病机制探讨发病机制第三章细胞化学染色过氧化物酶染色过氧化物酶染色酯酯酶酶染染色色苏苏丹丹黑黑染染色色第二节第二节细胞化学染色细胞化学染色第三章细胞化学染色过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色铁铁染染色色第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【原理原理】POXPOX的染色方法有多种,如复方联苯胺法、二氨基的染色方法有多种,如复方联苯胺法、二氨基联苯胺法、四甲基联苯胺、改良的联苯胺法、四甲基联苯胺、改良的pereirapereira染色法等等。
染色法等等。
二氨基联苯胺染色是临床常用的方法。
二氨基联苯胺染色是临床常用的方法。
二氨基联苯胺法:
血细胞内的二氨基联苯胺法:
血细胞内的POXPOX,能分解,能分解HH22OO22而而释放出新生氧,后者氧化二氨基联苯胺,形成金黄色释放出新生氧,后者氧化二氨基联苯胺,形成金黄色不溶性沉淀,定位于细胞质内酶所在的部位。
不溶性沉淀,定位于细胞质内酶所在的部位。
第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应】1.1.粒细胞系统粒细胞系统分化差的早期原始粒细胞为阴性,分化差的早期原始粒细胞为阴性,分化好的晚期原始粒细胞至中性成熟粒细胞均呈阳性,分化好的晚期原始粒细胞至中性成熟粒细胞均呈阳性,且随着细胞的成熟,阳性反应的程度逐渐增强;中性且随着细胞的成熟,阳性反应的程度逐渐增强;中性分叶核粒细胞呈强阳性,衰老的粒细胞阳性程度减弱分叶核粒细胞呈强阳性,衰老的粒细胞阳性程度减弱甚至呈阴性;嗜酸性粒细胞阳性反应最强,嗜碱性粒甚至呈阴性;嗜酸性粒细胞阳性反应最强,嗜碱性粒细胞为阴性。
细胞为阴性。
第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应】1.1.粒细胞系统粒细胞系统2.2.单核细胞系统单核细胞系统原始单核细胞呈阴性,幼稚及原始单核细胞呈阴性,幼稚及成熟单核细胞多呈弱阳性,其颗粒细少稀疏,分布不成熟单核细胞多呈弱阳性,其颗粒细少稀疏,分布不均。
均。
3.3.其他细胞其他细胞淋巴细胞系统、红细胞系统及巨核淋巴细胞系统、红细胞系统及巨核细胞系统的细胞均呈阴性,浆细胞、组织细胞也呈阴细胞系统的细胞均呈阴性,浆细胞、组织细胞也呈阴性,吞噬细胞有时呈阳性。
性,吞噬细胞有时呈阳性。
1.1.中性成熟粒细胞,呈强阳性;中性成熟粒细胞,呈强阳性;2.2.晚幼红细胞,呈阴性;晚幼红细胞,呈阴性;3.3.单核细胞,呈弱阳性;单核细胞,呈弱阳性;4.4.浆细胞,呈阴性浆细胞,呈阴性第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色成熟中性成熟中性粒细胞过粒细胞过氧化物酶氧化物酶活性的变活性的变化化临临床床意意义义是辅助判断急性白是辅助判断急性白血病细胞类型的首选、血病细胞类型的首选、最重要的细胞化学染色最重要的细胞化学染色帮助鉴帮助鉴别急性别急性白血病白血病的类型的类型第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【临床意义临床意义】1.1.帮助鉴别急性白血病的类型帮助鉴别急性白血病的类型(11)POXPOX染色是鉴别急性淋巴细胞白血病和急性粒细染色是鉴别急性淋巴细胞白血病和急性粒细胞白血病的重要指标。
胞白血病的重要指标。
急性粒细胞白血病时,原始粒细胞可呈阳性。
急性淋急性粒细胞白血病时,原始粒细胞可呈阳性。
急性淋巴细胞白血病时,原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞均呈阴性。
巴细胞白血病时,原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞均呈阴性。
急性单核细胞白血病时,原始单核细胞、幼稚单核细胞多急性单核细胞白血病时,原始单核细胞、幼稚单核细胞多数呈阴性或弱阳性。
数呈阴性或弱阳性。
急性粒细胞白血病(急性粒细胞白血病(MM2a2a)的的POXPOX染色染色原始粒细胞均呈阳性急性淋巴细胞白血病的急性淋巴细胞白血病的POXPOX染色染色1.中性成熟粒细胞,呈强阳性;其他原始淋巴细胞均呈阴性第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【临床意义临床意义】1.1.帮助鉴别急性白血病的类型帮助鉴别急性白血病的类型(22)急性早幼粒细胞白血病有时需与急性单核细胞)急性早幼粒细胞白血病有时需与急性单核细胞白血病鉴别,如果白血病细胞呈过氧化物酶强阳性,应确白血病鉴别,如果白血病细胞呈过氧化物酶强阳性,应确定为急性早幼粒细胞白血病。
定为急性早幼粒细胞白血病。
急性早幼粒细胞白血病的急性早幼粒细胞白血病的POXPOX染色染色.原始红细胞,呈阴性;其他早幼粒细胞均呈强阳性第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【临床意义临床意义】1.1.帮助鉴别急性白血病的类型帮助鉴别急性白血病的类型(33)急性单核细胞白血病有时需与组织细胞白血病、)急性单核细胞白血病有时需与组织细胞白血病、恶性组织细胞病相鉴别,异常组织细胞的过氧化物酶呈阴恶性组织细胞病相鉴别,异常组织细胞的过氧化物酶呈阴性,而白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性。
性,而白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性。
急性单核细胞白血病的急性单核细胞白血病的POXPOX染色染色1.中性成熟粒细胞,呈强阳性;2.原始单核细胞,呈阳性;3.原始单核细胞,呈弱阳性;其他原幼单核细胞呈阴性第三章第二节细胞化学染色一、过氧化物酶(一、过氧化物酶(POX)染色)染色【临床意义临床意义】1.1.帮助鉴别急性白血病的类型帮助鉴别急性白血病的类型2.2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化活性增高:
见于再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细活性增高:
见于再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。
胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。
活性减低:
见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血活性减低:
见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、骨髓增生异常病、急性单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征、放射病及退化性中性粒细胞。
综合征、放射病及退化性中性粒细胞。
第三章第二节细胞化学染色二、苏丹黑(二、苏丹黑(SB)染色)染色【原理原理】苏丹黑是一种脂溶性重氮染料,能溶解于细胞内苏丹黑是一种脂溶性重氮染料,能溶解于细胞内的含脂结构(如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇)中,的含脂结构(如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇)中,使脂类物质呈棕黑色或深黑色而显示出来。
脂类物质使脂类物质呈棕黑色或深黑色而显示出来。
脂类物质在粒细胞中含量丰富,在单核细胞中也有少量。
在粒细胞中含量丰富,在单核细胞中也有少量。
第三章第二节细胞化学染色二、苏丹黑(二、苏丹黑(SB)染色)染色【正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应】结果与结果与POXPOX染色基本一致染色基本一致【临床意义临床意义】与与POXPOX染色基本相似染色基本相似三、酯三、酯酶酶染染色色根据根据酯酶酯酶特异特异性高性高低分低分为为:
特异性酯酶特异性酯酶(氯乙酸氯乙酸AS-DAS-D萘酚酯酶萘酚酯酶)非特异性酯酶非特异性酯酶pHpH值不同值不同第三章第二节细胞化学染色酸性酯酶酸性酯酶(酸性酸性-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶)碱性酯酶碱性酯酶(-(-丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶)中性酯酶中性酯酶-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶醋酸醋酸AS-DAS-D萘酚酯酶萘酚酯酶第三章第二节细胞化学染色【原理原理】血细胞内的氯乙酸血细胞内的氯乙酸AS-DAS-D萘酚酯酶水解基质液中的萘酚酯酶水解基质液中的氯乙酸氯乙酸AS-DAS-D萘酚,产生萘酚,产生AS-DAS-D萘酚,进而与基质液中的萘酚,进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀,定位于细胞质内重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀,定位于细胞质内酶所在的部位。
本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱酶所在的部位。
本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBCGBC,形成的有色沉淀为红色。
形成的有色沉淀为红色。
(一)氯乙酸
(一)氯乙酸AS-DAS-D萘酚酯酶萘酚酯酶(NAS-DCE)(NAS-DCE)染色染色第三章第二节细胞化学染色
(一)氯乙酸
(一)氯乙酸AS-DAS-D萘酚酯酶萘酚酯酶(NAS-DCE)(NAS-DCE)染色染色【正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应】1.1.粒细胞系统粒细胞系统分化差的原始粒细胞呈阴性,分化好分化差的原始粒细胞呈阴性,分化好的呈阳性,自早幼粒细胞至成熟中性的呈阳性,自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性。
嗜酸性粒细胞呈阴粒细胞均呈阳性。
嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性,嗜碱性粒细胞呈阳性。
性或弱阳性,嗜碱性粒细胞呈阳性。
2.2.单核细胞系统单核细胞系统绝大多数为阴性。
绝大多数为阴性。
3.3.其他细胞其他细胞如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核红细胞、血小板等均呈阴性;肥大细胞红细胞、血小板等均呈阴性;肥大细胞呈阳性。
呈阳性。
第三章第二节细胞化学染色【临床意义临床意义】1.1.急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病原始粒细胞呈阳性或阴性。
原始粒细胞呈阳性或阴性。
2.2.急性早幼粒细胞白血病急性早幼粒细胞白血病早幼粒细胞呈强阳性。
早幼粒细胞呈强阳性。
3.3.急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病原始单核及幼稚单核细胞几原始单核及幼稚单核细胞几乎呈阴性。
乎呈阴性。
4.4.急性粒急性粒-单核细胞白血病单核细胞白血病原始粒细胞及早幼粒细胞原始粒细胞及早幼粒细胞呈阳性,原始单核及幼稚单核细胞呈阴性。
呈阳性,原始单核及幼稚单核细胞呈阴性。
5.5.急性淋巴细胞白血病和急性巨核细胞白血病急性淋巴细胞白血病和急性巨核细胞白血病白血白血病细胞均呈阴性。
病细胞均呈阴性。
(一)氯乙酸
(一)氯乙酸AS-DAS-D萘酚酯酶萘酚酯酶(NAS-DCE)(NAS-DCE)染色染色急性粒细胞白血病(急性粒细胞白血病(MM2a2a)氯乙酸)氯乙酸AS-DAS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色1.原
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- 第三 细胞 化学 染色