标准曲线的绘制吸光度标准曲线绘制.docx
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标准曲线的绘制吸光度标准曲线绘制
标准曲线的绘制-吸光度标准曲线绘制
生物化学实验报告ALT与其吸光度的标准曲线绘制
采集样本:
广西医科大学口腔医学2016级13班四个组中7组生物化学实验数据采集时间:
2016年11月15日2016~2016上学期第十一周周一下午采集人:
何洁梅
一、几组ALT与其吸光度的标准曲线数据记录
ALT活力单位A520吴修团1组A520黎丁菱1组A520杨璇璇1组A520谢晓兰2组A520莫雪玲2组A520李文良3组A520文全海4组
00000000
二、各采集样本汇总图
样本1测定得待测血清ALT活力单位为50U/L
样本2测定得待测血清ALT活力单位为
97U/L
样本3测定得待测血清ALT活力单位为
135U/L
样本4测定得待测血清ALT活力单位为
70U/L
样本5测定得待测血清ALT活力单位为
148U/L
样本6测定得待测血清ALT活力单位为
45U/L
样本7测定得待测血清ALT活力单位为
98U/L
四、采集数据处理结果分析
1.数据总结
样本编号测定的ALT活力单位是否大于40U/L正常/非正常
150是非正常
297是非正常
3135是非正常
470是非正常
5148是非正常
645是非正常
798是非正常
平均值92均为“是”均为“非正常”
2.针对数据处理结果的分析
采集的7组数据经标准曲线测量后,得到的ALT活力单位值均大于40,即均为非正常值,综上,认为待测血清中ALT含量超于正常值。
3.针对源数据的分析
采集的7组数据中样本4、5、6的数据经画图后可基本分布呈过原点的线性关系,符合理论规律,但其他的数据误差较大。
另外,比较符合理想标准曲线的4、5、6样本的三个ALT活力单位值也存在较大的出入。
4.经分析,总结可能的误差来源如下
配置丙酮酸标准溶液、底物溶液、磷酸缓冲液的混合溶液时,丙酮酸标准溶液的剂量都很小,容易造成误差。
加入2,4—二硝基苯肼的时间可能有误差,保温的时间,以及加入NaOH以停止反应的时间都有可能有偏差,容易造成较大。
如何用EXCEL绘制标准曲线
Excel是Microsoftoffices系统的重要组成,它是界于WORD字处理软件与ACCESS数据库软件之间的电子表格工具,功能十分强大,特别适合于日常工作使用。
使用得好,完全比目前所有的检验科办公系统优秀。
现就先介绍一下如何使用Excel绘制标准曲线。
首先,将数据整理好输入Excel,并选取完成的数据区,并点击图表向导,如下图所示。
点击图表向导后会运行图表向导如下图,先在图表类型中选“XY散点图”,并选了图表类型的“散点图”。
点击“下一步”,出现如下图界面。
如是输入是如本例横向列表的就不用更改,如果是纵向列表就改选“列”。
如果发现图不理想,就要仔细察看是否数据区选择有问题,如果有误,可以点击“系列”来更改,如下图。
如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标,结果如下图:
出现上图后,如图在表上选取正确的数据区域。
然后点击“下一步”出现图表选项界面,如下图,上应调整选项,以满足自己想要的效果。
点击“下一步”,现在一张带标准值的完整散点图就已经完成,如下图。
完成了散点图,现在需要根据数据进行回归分析,计算回归方程,绘制出标准曲线。
其实这很简单,先点击图上的标准值点,然后按右键,点击“添加趋势线”。
如下图。
由于本例是线性关系,在类型中选“线性”如下图
点击“确定”,标准曲线就回归并画好了。
标准曲线是画好了,可是我们怎么知道回归后的方程是什么样呢?
这了简单,点击趋势线然后按右键,选趋势线格式,如下图:
在显示公式和显示R平方值前点一下,勾上。
再点确定。
好了,现在公式和相关系数都出来了。
如图:
呵R的平方达,线性相当好。
可是有时候有的项目是成指数增加的,散点图如下图,
从上图看并不值关,除了最大的一个点外其余的几乎都成了直线。
这不难理解,对于10000000而言,10与10000都差不了多少。
因此我们平时常使用半对数坐标纸画图。
对于Excel也可以,先点中Y坐标轴,再按右键,选“坐标轴格式”如下图
将左下方的对数刻度选中,确定。
完整的一个半对数标准曲线就做好了。
用Excel绘制标准曲线
用Excel绘制标准曲线
将数据整理好输入Excel,并选取完成的数据区,并点击图表向导,如下图:
点击图表向导后会运行图表向导如下图,先在图表类型中选“XY散点图”,并选了图表类型的“散点图”。
点击“下一步”,出现如下图界面。
如是输入是如本例横向列表的就不用更改,如果是纵向列表就改选“列”:
如果发现图不理想,就要仔细察看是否数据区选择有问题,如果有误,可以点击“系列”来更改,如下图:
如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标,结果如下图:
在表上选取正确的数据区域,点击“下一步”,出现图表选项界面如下图,调整选项,以满足自己想要的效果:
点击“下一步”,一张带标准值的完整散点图完成,如下图:
现在要根据数据进行回归分析,计算回归方程,绘制出标准曲线:
先点击图上的标准值点,然后按右键,点击“添加趋势线”。
如下图:
本例是线性关系,在类型中选“线性”,如下图:
点击“确定”,标准曲线回归画好:
回归后的方程是什么样呢?
点击趋势线然后按右键,选趋势线格式,如下图:
在显示公式和显示R平方值前点一下,勾上。
再点确定,公式和相关系数都出来了。
如图:
由此标准曲线可得出浓度:
切换到“选项”标签页,选择“显示公式”,确定。
在图表中出现一个公式,即浓度对吸光度的关系。
在单元格中输入该公式,即可根据该公式计算出样品的浓度。
有时候有的项目是成指数增加,散点图如下图:
从上图看并不相关,除了最大的一个点外其余的几乎都成了直线。
这不难理解,因为对于10000000而言,10与10000都差不了多少。
因此我们平时常使用半对数坐标纸画图。
对于Excel,先点中Y坐标轴,再按右键,选“坐标轴格式”如下图:
将左下方的对数刻度选中,确定。
完整的一个半对数标准曲线就做好了:
利用Excel制作标准曲线,如果认真调整参数可以得到不同的效果。
绘图时最好用XY散点图。
生成图表后,选择生成的曲线,之后在曲线上点击右键,选择“添加趋势线”,在“类
型”中,选择最接近的曲线形式。
比如你的曲线接近线性,则选择“线性”,若接近乘幂的形式,则选择“乘幂”,如果比较难判断,则选择“多项式”,并调整其阶数。
荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制
荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制
1.绝对定量定义
绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。
将标准品稀释至不同浓度,作为模板进行PCR反应。
以标准品拷贝数
的对数值为横坐标,以测得的CT值为纵坐标,绘制标准曲线,对未知样品进行
定量时,根据未知样品的CT值,即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。
*Log(起始浓度)与循环数呈线性关系,通过已知起始拷贝数的标准品可作出标
准曲线,即得到该扩增反应存在的线性关系
*由样品CT值,就可以计算出样品中所含的模板量
2.绝对定量标准品
标准品的一些标准
*必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增,并且扩增效率相同
*标准品必须是经过准确定量的
*标准品必须是标准化的
*在每组实验时,必须用相同的阈值设定来确定CT值
标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA,也可以是比扩增片
段长的纯化后的PCR产物,当然也可以是基因组DNA,甚至cDNA,但前提是
所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。
3.标准品的制备
一般一条标准曲线取四到五个点,浓度范围要能覆盖样品的浓度区间,以保
证定量的准确性。
一般一个点重复三至五次,对于常期稳定使用的标准品可以适
当减少重复的次数。
倍比梯度稀释方法:
1v原液+9v稀释缓冲液,得标准品ii
1v标准品ii+9v稀释缓冲液,得标准品iii
1v标准品iii+9v稀释缓冲液,得标准品iv
1v标准品iv+9v稀释缓冲液,得标准品v
依次倍比稀释
拷贝数的计算:
详见核酸拷贝数的计算
4.实例
标准品的制作:
将标准品依次进行10倍稀释,ASP-3700测得其拷贝数×
108copy/ul
标准曲线的绘制
设置对照:
浓度为×107、×106、×105、×104、×103、
×102、×101的标准样品各一个,设空白对照
PCR反应:
以不同浓度标准品作为模板
标准品的扩增曲线
标准品的溶解曲线
标准品的标准曲线图
扩增效率计算:
E=10-1/斜率=10-1/-=,E%=()×100%=104%
若未知样本的CT值为,将CT值代入线性方程:
即=,所以X=()/(-)=
Quantityunknow==50118copies
核酸拷贝数的计算
一、分步推理如何计算核酸拷贝数
1A260吸光度值=dsDNA50ug/ml=ssDNA33ug/ml=ssRNA40ug/ml
核酸浓度=(OD260)×(dilutionfactor)×=ng/ul
MW代表克/摩尔,单位dolton:
1dolton即表示1g/mol
1摩尔=摩尔分子(拷贝数)
平均分子量(MW):
dsDNA=(碱基数)×(660道尔顿/碱基)
ssDNA=(碱基数)×(330道尔顿/碱基) ssRNA=(碱基数)×(340道尔顿/碱基)
得到拷贝数计算公式:
(拷贝数/摩尔)×(浓度)/(MWg/mol)=copies/ml.
即()×(g/ml)/(DNAlength×660)=copies/ml.
或(×1023)×(ng/ul×10-9)/(DNAlength×660)=copies/ul.
例:
3000碱基质粒,浓度100ng/ul
MW=3000bp×660dalton/bp=×106daltons,即1mol=×106g
(100ng×10-9)g/×106=摩尔数
copy数=摩尔数××1023=3×1010copies/ul.
二、这是一个小小的计算器,使你计算更加方便快捷,免去算数之苦……
什么是拷贝数?
/html/
如何计算拷贝数?
计算方法:
(×1023拷贝数/摩尔)×(浓度g/ml)/(MWg/mol)=copies/ml
蛋白质水解度测定及其标准曲线绘制研究
2102年3月
广东轻工职业技术学院学报
JOURNAL OF GUANGDONG NDUSITRY TECHNICAL COLLEGE
VO.1 1l
No. 1
Ma.r
22O1
蛋白质水解度测定及其标准曲线绘制研究
蒋 婧
密8239
摘 要:
应用茚三酮显色法对蛋白质水解度的测定及其标准曲线生成进行了分析。
进 而,于一元线性回归分别在Ecl和Maa基xeltb平台上对标准曲线的生成进行了研究,l并 给出了相应的标准曲线生成源代码,为蛋白质水解度的控制及工业分析中各标准曲线的
绘制提供了必要的手段和方法。
关键词:
蛋白质;水解度;准曲线 标
中图分类号:
Q一3 3
文献标识码:
A
文章编号:
17.9021)100.36215连接的氨基 键酸组成的链。
这些氨基酸中有一部分是可以由人体 自己合成的,为非必需氨基酸;称而另外一部分是必
需由食物供给的,约有八种,为必需氨基酸。
如果 称食物中所含必需氨基酸的品种多、数量全,么这种 那
1水解度的定义
水解度
度,代表水解过程中蛋白质肽键被裂解的程度,它常
用百分数来表示:
DH=h x-0% 0
食物蛋白质的营养价值就高。
于是,关键问题就是
如何使蛋白质或氨基酸有利于人体的吸收。
现有研
式中,h是水解后每克蛋白质被裂解的肽键数, 毫摩尔数h/
究表明¨“J蛋白质通过水解变为二肽或三肽产物 :
后,与没有水解的氨基酸比,或相更
毫摩尔数注1/ 当蛋白质特指时h是
一
个常数,比如酪蛋白质的h为82imog还可 . l;n/
有利于其
在人体内被吸收。
同时,蛋白质的酶水 在
解过程中,要对其水解程度进行控制,需因为过度水 解会产生苦味肽,致蛋白质风味的改变,响水解 导影
以根据组成蛋白质的氨基酸组含量来计
算,大豆蛋白质的 为78mmlg如. o。
一般地,1/【j 于每裂解一个肽键就可同时生成一个一Ⅳ和一个
一
蛋白质在食品中的使用。
因此,白质的水解研究 蛋
一
CO,以,OH所只要定量地测出一Ⅳ和一CO OH
直备受关注,而其水解度的测定就变成关注的焦
可见,不管用什么蛋白质酶对蛋白质进行水解,
基团的量即可知道h值。
也就是说,只要测出水解 后蛋白质被裂解的肽键数即h值,能计算出相廊 就
的D值。
H
点。
都必须对其水解度进行测定。
水解度测定的常用方
2蛋白质水解度的测定
21主要试剂与仪器 .
法是茚三酮法,就需进行其标准曲线的绘制为此,文结合应用茚三酮法对蛋白质水解 ,本度进行测定及其标准曲线的绘制进行研究。
水解蛋白液:
不同条件下酶水解大豆分离蛋 在白,活后离心分离得到的清液即为水解蛋白液。
灭 主要试剂均为分析纯级,括:
包
收稿日期:
02—1—1 2105
作者简介:
蒋
婧女,科。
18,本
第1期
蒋 婧:
白质水解度测定及其标准曲线绘制研究 蛋
三酮显色液 0m1;
两个或两个以上变量间数量相互依赖关系的一种统
计分析方法,对现有数据进行处理、中发现有用 是从
信息的一种重要手段。
一般地说,回归分析的实质 是根据已掌握实测的变量数据建立合适的回归模型
0的乙醇溶液 00;3甲醛溶液 ;4甘氨酸; 准氢氧化钠溶液 5标01lNO/;
然后求解 ,
模型中的各个参数,价回归模型是否能够很好地 评
拟合实测数据。
如果拟合很好,可根据自变量的 则
变化情况对因变量的变化进行推测与控制,拟合回 归方程,应用十分广泛 。
在回归分析中,果 其如
模型只包括一个自变量、一个因变量,且二者的数量
%的硼酸溶液其它有关 62重及
指示剂。
主要仪器:
71光光度计、H计、自动凯氏定氮仪、2分p半磁
力搅拌器。
22标准溶液的测定 .
关系可用一条直线近似表示,称为一元线性回归 则
分析,且一元线性回归分析是人们在数据分析中通 常采用的一种方式。
为此,于一元线性回归分别 基在Ecl及Maaxeltb平台上对标准曲线的生成进行 l
介绍。
31基于Ecl离散点图 . xel的
在分析天平上称取010g干燥过后的甘氨 .00
酸,溶解并定容至lOl再从中取出20m定容 Om,.0l
至10l此时溶液浓度为2 ̄/。
然后分别取 0m,0gml
001020304050608和10、.、.、.、.、.、.、..mL于试管 中,1L的显色剂,在沸水浴中加热1mi,加m放5n然 后冷却,再加入50ml0的乙醇溶液混匀,置 .0 %4放
1ri5n后,1m的比色皿,零管调零于波长 a用a以
在离散点图的生成过程中,结合表1中的有关 参数,可使用Eclxe统计函数简便快速地对浓度与
吸光度的相关性进行线性回归分析。
首先,行数据输入,选中数据散点图,图1所示。
观察散点图后 作如
50m处测定其吸光值如下表1所示。
表1标准甘氨酸溶液测定值
c0e/ 2 4 6 8 1 21 62 0
发现数据分布具有线性分布特性,为此可进行线性
回归即可获得相应的 具,标准曲线,相关系数为0986,其.992回归模型为Y=
0.08073X+
0.4 042
A0006011028035056066091平 .8 .7 .4 .4 .1 .7 .0
23水解蛋白液中一Ⅳ的测定 . 日,取水解蛋白液10m定容至10l取04ml.0l0m,.0
稀释液于试管中并加入16l馏水、.m蒸其后所加药 品与上述标准溶液配制一致,利用前述标准曲线 再
^
即可计算水解蛋白液中一Ⅳ:
的含量,位为 日单
imo/ml。
zl
《
V
诖
3标准曲线的绘制
在用茚三酮法进行蛋白质水解度测定时,首先,
要用欲测组分的标准样品绘制标准曲线,用标准 即
样品配制成不同浓度的标准系列,以此进行标准曲 线的绘制;然后,在测定样品中的组分含量时,再利
浓度
图1标准工作曲线散点图
用标准曲线直接查出样品组分的浓度。
可见,准 标曲线法一种简便、是快
32基于Maa.tb的标准曲线绘制 l
运用Maltb中多元线性回归的基本命令r-ae
ges处理一元线性回归问题。
以表1中标准甘 rs来
速的定量方法,中标准曲线的绘制又非常重要,其它
涉及到回归分析rgesnaai技术。
oys 回归分析是统计学中的一个重要分支,确定 是
氨酸溶液测定值为例,体程序如下:
具
6
cerla
广东轻工职业技术学院学报
第1 1卷
标准曲线法的优点是在完成标准曲线绘制后,
x024681 62] =[ 21 O;Y0006011028035056066=[ .8 .7 .4 .4 .1 .7
可直接从标准工作曲线上读出未知含量,以,所特别
适合于大量样品的分析,也是其在工业分析中得 这以广泛应用的关键原因。
该法的不足是每次样品分
091;.0]
pox] [,itrrtrgesyx) b
bn,,n]=ers
llsi ne;
4结果与讨论
1对蛋白质中一Ⅳ的测定,三酮法是一 茚
种常用的非常灵敏的方法,采用一般方法配制的 但
xae
显色剂稳定性较差,存时间有限。
保
2在工业分析中应用标准曲线法对大量样品 的分析方便、直观,中标准曲线绘制可借助相关软 其
stgaXi'0:
:
0,Tc.0021)e13—167. []赵新淮,志彪.白质水解物水解度的测定 J.2 冯蛋]食
品科学,94,119:
5—719166.
[]Adr—Nse 3 leinJ.DtmntnoteDgeo yseriai fh er fH—eo e
doyi fFodPrti rlsso o oenHydoyae b iirbnzne rlstsyTrntoee—
slncAi[].Ar odCe,99 uficJ.JgiFo h
- 配套讲稿:
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- 关 键 词:
- 标准 曲线 绘制 光度