版高考生物苏教版复习因工程含答案.docx
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版高考生物苏教版复习因工程含答案
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2021版高考生物(苏教版)复习:
因工程含答案
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__________________
第1讲 基因工程
1.基因工程的诞生(Ⅰ)
2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)
3.基因工程的应用(Ⅱ)
4.蛋白质工程(Ⅰ)
5.生物武器对人类的威胁(Ⅰ)
6.生物技术中的伦理问题(Ⅰ)
1.基因的结构与功能。
(生命观念)
2.基因工程的操作流程图及蛋白质的流程图等。
(科学思维)
3.基因工程的应用和蛋白质工程。
(科学探究)
4.正确看待转基因生物的安全性以及生物武器对人类的威胁等。
(社会责任)
基因工程的基本工具
1.基因工程的概念
(1)概念:
按照人们的愿望、进行严格的设计、并通过体外DNA重组和转基因等技术、赋予生物以新的遗传特性、从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
(2)遗传原理:
基因重组。
(3)优点
①与杂交育种相比:
克服了远缘杂交不亲和的障碍。
②与诱变育种相比:
定向改造生物的遗传性状。
2.基因工程的基本工具
(1)限制性核酸内切酶(简称限制酶)。
①来源:
主要来自原核生物。
②特点:
具有专一性、表现在两个方面:
识别——双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。
切割——特定核苷酸序列中的特定位点。
③作用:
断裂特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
④结果:
产生黏性末端或平末端。
(2)DNA连接酶
种类
E·coliDNA连接酶
T4DNA连接酶
来源
大肠杆菌
T4噬菌体
特点
缝合黏性末端
缝合黏性末端和平末端
作用
缝合双链DNA片段、恢复两个核苷酸之间的磷酸二酯键
(3)载体
①种类:
质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
②质粒的特点
③运载体的作用:
携带外源DNA片段进入受体细胞。
1.基因工程技术使用限制酶需注意的四个问题
(1)获取目的基因和切割载体时、经常使用同一种限制酶(也可使用能切出相同末端的不同限制酶)、目的是产生相同的黏性末端或平末端。
(2)获取一个目的基因需限制酶切割两次、共产生4个黏性末端或平末端。
(3)限制酶切割位点的选择、必须保证标记基因的完整性、以便于检测。
(4)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接、也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒。
2.限制酶和DNA连接酶的关系
(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。
(2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(3)DNA连接酶起作用时、不需要模板。
3.载体
(1)条件与目的
条件
目的
稳定并能复制
目的基因稳定存在且数量可扩大
有一个至多个限制酶切割位点
可携带多个或多种外源基因
具有特殊的标记基因
便于重组DNA的鉴定和选择
(2)作用
①作为运载工具、将目的基因转移到宿主细胞内。
②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。
4.载体上标记基因的作用
载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。
目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。
当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后、抗性基因在受体细胞内表达、使受体细胞能够抵抗相应抗生素、所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞、原理如图所示:
人的胰岛素基因可以与细菌的质粒重组、并在细菌细胞中表达。
其能重组的物质基础和结构基础分别是什么?
成功表达的遗传学基础呢?
[提示] 人的胰岛素基因可以与细菌的质粒重组的物质基础是二者都是由四种脱氧核苷酸组成、结构基础是二者都是有遗传效应的DNA片段、都具有规则的双螺旋结构。
成功表达的遗传学基础是遗传密码在生物界是通用的。
考查限制酶、DNA连接酶等酶的作用
确定选择限制酶种类的方法
(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类
①应选择切点位于目的基因两端的限制酶、如图甲可选择PstⅠ。
②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶、如图甲不能选择SmaⅠ。
③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接、也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒、如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。
(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类
①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致、以确保具有相同的黏性末端。
②质粒作为载体必须具备标记基因等、所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构、如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因;如果所选酶的切点不止一个、则切割重组后可能丢失某些片段、若丢失的片段含复制起点区、则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。
1.(20xx·全国卷Ⅲ)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点、图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。
图(a)
图(b)
根据基因工程的有关知识、回答下列问题:
(1)经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被________酶切后的产物连接、理由是_______________________。
(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子、如图(c)所示。
这三种重组子中、不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有________、不能表达的原因是
____________________________________________________。
图(c)
(3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶、常见的有______________和______________、其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是________。
[解析]
(1)由题图可知、BamHⅠ和Sau3AⅠ两种限制性内切酶的共同识别序列是
、二者切割可以形成相同的黏性末端、因此经BamHⅠ酶切得到的目的基因可以与图(b)所示表达载体被Sau3AⅠ酶切后的产物连接。
(2)在基因表达载体中、启动子应位于目的基因的首端、终止子应位于目的基因的尾端、这样基因才能顺利地转录、再完成翻译过程、即顺利表达。
图中甲所示的目的基因插入在启动子的上游、丙所示目的基因插入在终止子的下游、二者的目的基因均不能被转录、因此目的基因不能表达。
(3)常见的DNA连接酶有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶、其中T4DNA连接酶既能连接黏性末端又能连接平末端。
[答案]
(1)Sau3AⅠ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端
(2)甲和丙 甲中目的基因插入在启动子的上游、丙中目的基因插入在终止子的下游、二者的目的基因均不能被转录
(3)E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 T4DNA连接酶
2.下表是几种限制酶识别序列及其切割位点、图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点、其中切割位点相同的酶不重复标注。
请回答下列问题:
图1 图2
(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒、应选用__________两种限制酶切割、酶切后的载体和目的基因片段、通过________酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒、需将其转入处于________态的大肠杆菌。
(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌、应在筛选平板培养基中添加________、平板上长出的菌落、常用PCR鉴定、所用的引物组成为图2中________。
(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接、连接部位的6个碱基对序列为________、对于该部位、这两种酶________(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。
(4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。
[解析]
(1)选择的限制酶应在目的基因两端且在质粒中存在识别位点、故可以用来切割的限制酶为BclⅠ、HindⅢ、BamHⅠ和Sau3AⅠ、但由于BamHⅠ和Sau3AⅠ可能使质粒中的启动子丢失或破坏抗性基因、所以应选用BclⅠ、HindⅢ两种限制酶切割。
酶切后的载体和目的基因片段、通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒、需将其转入感受态的大肠杆菌中、使其增殖。
(2)根据质粒上抗性基因、为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌、应在筛选平板培养基中添加四环素。
平板上长出的菌落、常用PCR鉴定、目的基因DNA受热变性后解链为单链、引物需要与单链两端相应互补序列结合、故所用引物组成是图2中的引物甲和引物丙。
(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端和BclⅠ酶切的DNA末端连接、连接部位的6个碱基对序列为
、由于两种酶均不能识别该部位的碱基对序列、所用两种酶都不能切开该部位。
(4)根据BclⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点、Sau3AⅠ在质粒上有三个酶切位点、完全酶切可得到记为A、B、C三种片段、若部分位点被切开、可得到AB、AC、BC、ABC四种片段、所以用Sau3AⅠ切质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。
[答案]
(1)BclⅠ和HindⅢ DNA连接 感受
(2)四环素 引物甲和引物丙
(3)
都不能 (4)7
考查载体的作用及特点等
3.(20xx·全国卷Ⅰ)某一质粒载体如图所示、外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因、Tetr表示四环素抗性基因)。
有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后、与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合、加入DNA连接酶进行连接反应、用得到的混合物直接转化大肠杆菌。
结果大肠杆菌有的未被转化、有的被转化。
被转化的大肠杆菌有三种、分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。
回答下列问题:
(1)质粒载体作为基因工程的工具、应具备的基本条件有________________________(答出两点即可)、而作为基因表达载体、除满足上述基本条件外、还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选、在上述四种大肠杆菌细胞中、未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的、其原因是_________________;并且____________和___________的细胞也是不能区分的、其原因是__________________。
在上述筛选的基础上、若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落、还需使用含有________的固体培养基。
(3)基因工程中、某些噬菌体经改造后可以作为载体、其DNA复制所需的原料来自于________。
[解析]
(1)质粒作为载体、应具备的基本条件有:
有一个至多个限制酶切割位点、供外源DNA片段(基因)插入其中;在受体细胞中能自我复制、或能整合到染色体DNA上、随染色体DNA进行同步复制;有特殊的标记基因、供重组DNA的鉴定和选择等等。
(2)在培养基中加入氨苄青霉素进行筛选、其中未被转化的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌、因不含氨苄青霉素抗性基因而都不能在此培养基上存活、二者不能区分。
含有质粒载体的大肠杆菌和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨苄青霉素抗性基因、都能在此培养基上存活、二者也不能区分。
若要将含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌进一步筛选出来、还需要使用含有四环素的固体培养基。
(3)某些噬菌体经改造后作为载体、导入受体细胞后、其DNA复制所需的原料来自于受体细胞。
[答案]
(1)能自我复制、具有标记基因、具有一至多个限制酶切割位点(答出两点即可)
(2)二者均不含有氨苄青霉素抗性基因、在该培养基上均不生长 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒) 二者均含有氨苄青霉素抗性基因、在该培养基上均能生长 四环素 (3)受体细胞
基因工程的基本操作
1.基因工程的基本程序
(1)获取目的基因
①从基因文库中获取
②人工合成
③利用PCR技术扩增
(2)构建基因表达载体——基因工程的核心
①目的:
使目的基因在受体细胞中稳定存在、并且可以遗传给下一代、同时使目的基因能够表达和发挥作用。
②基因表达载体的组成
(3)导入目的基因
①转化含义:
目的基因进入受体细胞内、并且在受体细胞内遗传和表达的过程。
②转化方法
生物类型
植物
动物
微生物
受体细胞
体细胞
受精卵
大肠杆菌或酵母菌等
常用方法
农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法
显微注射法
感受态细胞法
(4)检测和鉴定目的基因
方法
检测或鉴定目的
水平
DNA分子杂交技术
检测目的基因的有无
分子水平
分子杂交技术
目的基因是否转录
抗原—抗体杂交
目的基因是否翻译
抗虫或抗病接种实验
是否具有抗虫抗病特性
个体水平
2.PCR技术
(1)原理:
DNA双链复制。
(2)条件
(3)过程
(4)结果:
上述三步反应完成后、一个DNA分子就变成了两个DNA分子、随着重复次数的增多、DNA分子就以2n的形式增加。
PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。
1.基因工程操作的四个易错点
(1)目的基因的插入位点不是随意的、基因表达需要启动子与终止子的调控、所以目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。
(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象。
(3)农杆菌转化法原理:
农杆菌易感染双子叶或裸子植物的细胞、并将其Ti质粒上的TDNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。
(4)启动子≠起始密码子、终止子≠终止密码子
启动子和终止子位于DNA片段上、分别控制转录过程的启动和终止;起始密码子和终止密码子位于mRNA上、分别控制翻译过程的启动和终止。
2.基因组文库与eDNA文库(部分基因文库)的比较
文库类型
部分基因文库
基因组文库
构建基因文库的过程
文库大小
小
大
基因中启动子
无
有
基因中内含子
无
有
基因多少
某种生物的部分基因
某种生物的全部基因
物种间的基因交流
可以
部分基因可以
说明
基因文库的组建过程就包含基因工程的基本操作步骤。
从基因文库中获取目的基因的优点是操作简便、缺点是工作量大、具有一定的盲目性
用箭头及简要的文字简述基因组文库和部分基因文库构建过程。
[提示] 基因组文库的构建过程:
某种生物全部DNA
许多DNA片段
受体菌群体。
部分基因文库的构建过程为:
某种生物发育的某个时期的mRNA
cDNA
受体菌群体。
考查基因工程的操作程序
1.(20xx·晋冀鲁豫高三联考)真核生物基因中通常含内含子、而原核生物基因中没有、原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。
研究发现绿色木霉合成并分泌的环氧化水解酶可降解黄曲霉素B1。
现有含绿色木霉的菌液、为获得环氧化水解酶、研究小组进行以下两种尝试:
(1)方法一
①从含有绿色木霉的菌液中提取细胞的mRNA、在________酶的催化下、合成cDNA。
②以cDNA为模板、通过________技术大量扩增、获得目的基因。
③构建目的基因表达载体、导入大肠杆菌的体内。
④目的基因在大肠杆菌体内正常转录、但是翻译产生的环氧化水解酶没有生物活性、需做进一步的处理加工、原因在于___________________。
(2)方法二
①提取绿色木霉的全部DNA、选用适当的________酶处理后、会获得一些小的DNA片段。
②选择一些合适的载体与获取的DNA片段构建基因表达载体。
与从cDNA文库中获取目的基因构建表达载体所用载体相比、该载体组成不需要添加__________________成分。
③载体和这些DNA片段连接起来、导入受体菌的群体中储存。
④从这些受体菌的群体中筛选出含有目的基因的受体菌、分离出目的基因、将该目的基因和载体结合、通过________法导入大肠杆菌体内。
⑤该目的基因在大肠杆菌的体内正常转录、但其不能进行翻译、原因在于___________________________。
[解析]
(1)以mRNA合成cDNA的过程为逆转录。
以已知的cDNA为模板扩增目的基因的过程称为PCR技术。
绿色木霉为真核生物、合成并分泌的环氧化水解酶为分泌蛋白、而大肠杆菌为原核生物、细胞内无内质网和高尔基体、因此在其体内翻译产生的环氧化水解酶没有生物活性。
(2)由提取绿色木霉的全部DNA获取一些小的DNA片段需要用限制酶进行处理。
从cDNA文库中获取目的基因中无启动子和终止子。
将该目的基因导入大肠杆菌的方法为转化法。
从基因组文库里分离出的该目的基因在大肠杆菌的体内正常转录、但其不能进行翻译、原因在于目的基因中存在内含子。
[答案]
(1)①逆转录 ②PCR ④环氧化水解酶是分泌蛋白、需要内质网和高尔基体加工
(2)①限制 ②启动子、终止子 ④转化 ⑤目的基因中存在内含子
2.(2019·××市高三二模)甘蔗黄叶综合症是一种由甘蔗黄叶病毒所引起的禾本科植物病毒、科学家通过甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因(简称CP蛋白基因)转化植物来获得抗病转基因新品种。
(1)首先从甘蔗黄叶综合症的病叶中提取RNA、此过程中为了防止RNA被分解、需加入________抑制剂、以提取的RNA为模板通过________获得cDNA。
(2)对获取的cDNA进行PCR扩增、在此反应体系中、除了模板DNA、dNTP外、还需加入________、获得大量的cDNA需要在4℃的低温下保存备用、原因是_______________。
(3)将cDNA和质粒用同一种限制酶切割、产生相同的平末端、再用________将二者进行连接(填“E·coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
在培养基上接种培养大肠杆菌作为受体细胞、同时加入一定量的CaCl2低温冷却液、目的是制备________细胞、其具有的特殊功能是____________________________。
(4)为检测大肠杆菌是否产生CP蛋白、需要将病毒颗粒注射入兔子体内、并从血清中分离获得________作为检测剂。
[解析]
(1)RNA酶可将RNA水解、因此为了防止RNA被分解、需加入RNA酶抑制剂;以RNA为模板获得cDNA的过程称为逆转录。
(2)采用PCR技术扩增目的基因时的条件有模板DNA、dNTP、引物、Taq酶(热稳定DNA聚合酶);获得大量的cDNA需要在4℃的低温下保存备用、原因是高温条件下、易使DNA分子中的氢键断裂、双螺旋结构打开而发生变性。
(3)DNA连接酶包括E·coliDNA连接酶、T4DNA连接酶、这二者都能连接黏性末端、此外T4DNA连接酶还可以连接平末端。
用CaCl2处理微生物细胞可使其成为感受态细胞、其具有的特殊功能是能吸收周围环境中的DNA分子。
(4)为检测大肠杆菌是否产生CP蛋白、需要将病毒颗粒注射入兔子体内、并从血清中分离获得CP蛋白抗体(黄叶病毒外壳蛋白抗体)作为检测剂。
[答案]
(1)RNA酶 逆转录
(2)引物、Taq酶(热稳定DNA聚合酶) 高温条件下、易使DNA分子中的氢键断裂、双螺旋结构打开而发生变性 (3)T4DNA连接酶 感受态 能吸收周围环境中的DNA分子 (4)CP蛋白抗体(黄叶病毒外壳蛋白抗体)
3.(20xx·××市东北育才学校高三模拟)青蒿素是最有效的抗疟疾药物、但野生黄花蒿青蒿素产量低、为缓解青蒿素供应不足的状况、科学家将tms基因和tmr基因导入黄花蒿的愈伤组织从而获得了黄花蒿的冠瘿组织、改造过程用到的部分结构如图。
(1)科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞的常用方法是______________________________________。
(2)图中结构P、T是基因成功转录的保证、其中结构P的作用____________________________________。
为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因、并将含有目的基因的细胞筛选出来、图中还缺少的结构是________________。
(3)在获得转基因的冠瘿组织过程中、_________是核心步骤、在具体操作中常常使用两种能产生不同黏性末端的限制酶对目的基因和运载体的两端分别进行切割、这样做的好处是___________。
(4)TDNA的作用是可以使______________________、并插入到植物细胞中染色体的DNA上、要检测目的基因是否插入到冠瘿组织细胞的染色体DNA上、可采用________技术。
(5)与愈伤组织相比、冠瘿组织的生长速度更快、原因可能是______________________________。
[解析]
(1)目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、而导入植物细胞最常用农杆菌转化法、因此、科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞的常用方法是农杆菌转化法。
(2)图中结构P、T与基因的转录有关、即基因成功转录的保证、T为终止子、则P为启动子、它的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位。
为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因、并将含有目的基因的细胞筛选出来、图中还缺少的结构是标记基因。
(3)在获得转基因的冠瘿组织过程中、基因表达载体的构建是核心步骤、在具体操作中常常使用两种能产生不同黏性末端的限制酶对目的基因和运载体的两端分别进行切割、这样做的好处是可以避免目的基因和运载体的自身连接成环和反向连接。
(4)TDNA的作用是可以使目的基因进入植物细胞、并插入到植物细胞中染色体的DNA上、要检测目的基因是否插入到冠瘿组织细胞的染色体DNA上、可采用DNA分子杂交技术。
(5)冠瘿组织的生长与细胞的分裂和伸长等有关、由此推知冠瘿组织的生长速度更快、原因可能是tms和tmr基因编码产物控制合成了生长素和细胞分裂素、促进其生长。
[答案]
(1)农杆菌转化法
(2)RNA聚合酶识别和结合的部位 标记基因 (3)基因表达载体的构建(或构建基因表达载体) 可以避免目的基因和运载体的自身连接成环和反向连接 (4)目的基因进入植物细胞 DNA分子杂交 (5)tms和tmr基因编码产物控制合成了生长素和细胞分裂素、促进了冠瘿组织的生长
关注基因工程
1.基因工程的应用
(1)植物基因工程:
培育抗虫转基因植物、抗病转基因植物和抗逆转基因植物;利用转基因改良植物的品质和利用植物生产药物。
(2)动物基因工程:
用于提高动物生长速度从而提高产品产量;用于改善畜产品品质;用转基因动物生产药物;用转基因动物作器官移植的供体等。
(3)比较基因治疗与基因诊断
项目
原理
操作过程
进展
基因治疗
基因表达
利用正常基因导入有基因缺陷的细胞中、以表达出正常性状来治疗(疾病)
临床实验
基因诊断
碱基互补配对
制作特定DNA探针与病人样品DNA混合、分析杂交带情况
临床应用
2.转基因生物的安全性
(1)转基因植物的安全性
①食用安全问题。
②对生态系统的影响
a.转基因植物的扩散对生物多样性有无影响。
b.导入的目的基因是否会扩散漂移到其他物种体内而导致自然界的混乱。
c.若大面积种植转基因植物、其残体分解物、根部分泌物等是否会对生态与环境造成大规模的负面效应等。
(2)转基因动物的安全性
①对人体健康的影响。
②对生态系统的影响。
(3)转基因生物安全性的保障措施
①保障公众对所购食品是否来源于转基因生物拥有知情权。
②国家应建立相应的评估及预警机制。
3.生物武器的危害性
(1)所用微生物种类
①细菌:
霍乱弧菌、炭疽杆菌等。
②病毒:
埃博拉
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