SOP-QC-011培养基配制标准操作规程.doc
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SOP-QC-011培养基配制标准操作规程.doc
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文件编号:
SOP-QC-011
文件名称:
培养基配制标准操作规程第3页共3页
1、玻璃器皿的洗涤。
1.1制备培养基所用的吸管、试管,三角瓶和平皿等新的玻璃器皿,因有灰尘和游离碱性物质,先用水冲洗干净。
然后置3%的盐酸中浸泡约12小时。
取出后,用清水冲洗干净,再用蒸馏水冲洗1~2次,晾干后备用。
1.2凡各种装量大而又不宜高压的含糖培养基,所用的玻璃器皿应事先灭菌,以免因一次性低压灭菌不彻底而染菌。
2、用具包装与灭菌。
2.1硅胶塞:
应用水冲洗干净,再以蒸馏水冲洗1~2次,烘干备用。
2.2试管:
各种试管最好先配上合适的硅胶塞,待高压灭菌后再分装培养基,可防止污染。
2.3平皿:
取洗净凉干的平皿,每7套作一个包装,121℃30分钟灭菌后烘干备用;也可用160℃2小时干热灭菌后备用。
2.4供染菌限度检验用的吸管,应防止堵塞,故选用红刻度粗下口的。
用前洗净烘干,上口塞进少许普通棉花,松紧适度,以防污染。
然后按其容量大小,分别放在用双层牛皮纸作成的纸袋或者金属盒内,包严经121℃30分钟灭菌后烘干备用。
3、操作
3.1根据用途选择培养基,按其用法进行准确称量和加蒸馏水,并填写配制记录如名称、配制量、配比、配制日期、配制者。
3.2培养基完全溶解后,进行过滤和分装,液体培养基一般应澄清无沉淀,否则影响观察细菌生长的结果。
过滤时可用滤纸或脱脂棉。
4、分装
4.1各种液体培养基分装试管时,每支应按试管大小及用途不同定量分装,可用吸管或注射器分装,也可用漏斗分装。
一般漏斗下口连接一段橡胶管,管口插一小段玻璃管,再加上一个弹簧夹控制流量,分装时将漏斗放在支架上,内装培养基,然后将下口插入试管中即可按量将培养基逐管分装,注意,不同品种的培养基用过的漏斗,应充分洗净后再用,以防两种培养基互相混淆,影响使用效果。
4.2固体培养基应趁热分装,以防冷后凝固:
分装时也可用支架漏斗,但须注意勿将培养基沾污管口,以防污染杂菌。
4.3制备固体斜面培养基时,每管装量宜少,堵严硅胶塞灭菌后摆成的斜面,凝固后应大小适宜,否则易染菌。
4.4制备琼脂平板,一般先装在瓶内,高压灭菌后冷至45~50℃时,再倾注平皿,凝固后置温箱内烘干凝结的水分备用。
5、灭菌
5.1各种培养基的灭菌时间和压力,一般按其品种的成分不同而定。
耐热的多采用121℃灭菌15分钟(即15磅15分钟);但容器和装量较大时,可延长至20分钟。
凡含有葡萄糖或其他糖类等不耐热的成分,宜用116℃灭菌20分钟(即10磅20分钟);如为装量较小的糖类发酵管,也可用110℃灭菌10分钟(即8磅10分钟),以防压力大、温度高、时间长破坏糖分。
总之,应严格遵守各种培养基规定的灭菌温度和时间。
5.2高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的冷空气,使灭菌物品同器内的温度一致时,再逐渐升压保持预定的压力和时间之后,令其自然降压为宜。
6、培养基的保存
6.1环境条件:
各种培养基均应在洁净的普通冰箱内保存,以5℃左右为宜,不得冻结。
否则,融化后常因理化条件改变而不能再用。
6.2保存时限
6.2.1基础营养培养基应在2周内用完。
6.2.2生化鉴别培养基应在1周内用完。
6.2.3选择性分离鉴别培养基制成平板后当日用完。
6.3管理
6.3.1贮存培养基的冰箱内不得存放食品、饮料等无关物品。
6.3.2管理员应按规定的时间检查培养基的外观,如失水、沉淀、过期、棉花塞松弛或脱落等异常情况。
发现问题及时处理。
7、培养基过滤澄清须注意:
7.1按培养基的制法说明进行加热或煮沸溶化后滤清。
须注意趁热时滤清,因在碱性溶液中加热煮沸后大部分沉淀物均可滤除,冷后较难滤净,灭菌后仍可出现沉淀物。
7.2滤除异物沉淀后,应将蒸发失去的液量按原液量加纯化水补足,以保证原有成分的配比量和理化性能。
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