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高效液相教材
第十三章高效液相色谱法
第一节概述
案例13-1
1.宠物食品事件:
2007年3月,美国发生宠物因食用含有毒物质食品而导致死亡的事件。
美国食品药品管理局调查显示,在回收的宠物食品、死亡动物的尿液结晶和肾脏细胞中都发现有三聚氰胺。
2.奶粉事件:
2008年9月,甘肃等地报告多例婴幼儿泌尿系统结石病例,经相关部门调查,患儿食用某品牌的婴幼儿配方奶粉受到三聚氰胺污染。
三聚氰胺被不法厂商用作食品添加剂,以提升食品检测中的蛋白质含量指标。
但大量摄入三聚氰胺,会损害人体和动物的生殖、泌尿系统,产生肾、膀胱结石,因此,进行食品中三聚氰胺的检测非常必要而且重要。
问题:
1.通用的“凯氏定氮法”能测出食品中含有的三聚氰胺吗?
2.怎样判断食品中是否添加三聚氰胺?
3.如何确定食品中三聚氰胺的含量?
在色谱分析法中,尽管气相色谱法获得广泛应用,但是由于其不能直接分析难挥发和受热易分解的物质,因此对于不具有足够的热稳定性和难于气化的物质的检测使用受到一定的限制。
依据气相色谱法的分离理论,在经典液相色谱法的基础上,于20世纪70年代发展起来的高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC),因采用了更高效的固定相、高压流动相、高灵敏度的在线检测器等使其具有选择性优良、分析快速、分离效率高、灵敏度高及操作自动化等优点。
因此,高效液相色谱又称高压液相色谱(highpressureliquidchromatography)、高速液相色谱(highspeedliquidchromatography)、高分离度液相色谱(highresolutionliquidchromatography)等,正是这些优越性使其在分离分析领域占据了重要的地位。
一、高效液相色谱法与经典的液相色谱法比较
其固定相规则均匀且颗粒极细(<10μm),因此传质阻抗小,分离效率高;其流动相采用高压泵输送,流速快,因此分析速度快(一般只需几分钟到几十分钟);其检测器(紫外、荧光、电化学等检测器)柱后检测,可高度自动化,检测灵敏度高。
二、高效液相色谱法与气相色谱法比较
其分析试样不受沸点、分子量和热稳定性的限制;其固定相颗粒更细,供选用的种类更多,分离效率更高;其流动相可选用离子型、极性、弱极性、非极性溶液,具有更高的分离选择性;其柱温一般在室温即可,不需要高温;其流出组分易于收集,可用于制备色谱。
高效液相色谱法因以上的优点,更因为其温和的分离分析条件和良好的生物兼容性,已成为分离纯化生物大分子应用最广泛的手段之一。
如今,高效液相色谱法已在生物化学、生物工程研究、制药工业研究和生产等领域,尤其是药物及其制剂的分析测定中获得广泛的应用。
第二节高效液相色谱法的主要类型和原理
一、高效液相色谱法的主要类型
高效液相色谱法同其他的色谱法一样,都是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的分配过程,是借不同组分在两相间亲和力、吸附能力、离子交换或分子排阻作用等的差异进行分离的方法。
按照分离原理不同,高效液相色谱法可分为吸附色谱法(absorptionchromatography,AC)、分配色谱法(partitionchromatography,PC)、离子交换色谱法(ionexchangechromatography,IEC)、分子排阻色谱法(moleculexclusionchromatography,MEC)四种基本类型;按实际应用情况,高效液相色谱法包括化学键合相色谱法(chemicallybondedphasechromatography,CBPC)、离子抑制色谱法(ionsuppressionchromatography,ISC)、离子对色谱法(ionpairchromatography,IPC)、亲和色谱法(affinitychromatography,AC)、手性色谱法(chiralchromatography,CC)、胶束色谱法(micellarchromatography,MC)、电色谱法(electrochromatography,EC)等类型。
目前最常见的高效液相色谱法是化学键合相色谱法及其衍变和发展而来的离子抑制色谱法、离子对色谱法。
本章重点讨论化学键合相色谱法的原理及其分离条件的选择。
二、化学键合相色谱法
化学键合相色谱法简称键合相色谱法(bondedphasechromatography,BPC),是采用化学键合相作固定相的液相色谱法。
化学键合相(chemicallybondedphase)是利用化学反应通过共价键将有机分子键合在载体(硅胶)表面,形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相。
常以微粒多孔硅胶为载体,采用酯化键合(Si-O-C型)、硅烷化键合(Si-O-Si-C型)和硅氮键合(Si-N型)等反应,其中硅烷化键合反应获得的这类键合相具有相当的耐热性和化学稳定性,是目前应用最为广泛的键合相。
这类固定相的突出特点是耐溶剂冲洗,并且可以通过改变键合相有机官能团的类型来改变分离的选择性,因此键合相色谱法是应用最广的色谱法,兼有吸附和分配两种分离机理,但多数以分配机理为主。
与液液分配色谱相类似,根据化学键合相与流动相的极性相对强弱不同可以将键合相色谱法分为正相(normalphase,NP)和反相(reversedphase,RP)色谱法。
(一)正相键合相色谱法
采用极性键合相为固定相,非极性或弱极性溶剂作流动相的色谱法称为正相键合相色谱法(NP-bondedphasechromatography)。
氨基(—NH2)、氰基(—CN)或二羟基等极性键合相,流动相由烷烃(常用正己烷等)加适量极性调节剂(如醇类)组成。
氰基键合相的分离选择性与硅胶相似,但极性小于硅胶,当流动相及其他条件相同时,同一组分的保留时间将小于硅胶。
许多需用硅胶柱的分离可用氰基键合相柱完成。
氨基键合相与硅胶的性质有较大差异,前者为碱性,后者为酸性,在作正相洗脱时,表现出不同的选择性。
氨基键合相色谱柱是分析糖类最重要的色谱柱,也称为碳水化合物柱。
正相键合相色谱法主要用于分离中等极性和极性较强的可溶于有机溶剂的分子型化合物。
其分离机制主要靠范德华作用力的定向作用力、诱导作用力或氢键作用力。
例如,用氨基键合相分离极性化合物时,主要靠被分离组分分子与键合相的氢键作用力的强弱差别而分离。
若分离含有芳环等可诱导极化的非极性样品,则键合相与组分分子间的作用力,主要是诱导作用力。
氰基键合相对双键异构体或含双键数不等的环状化合物的分离有较好的选择性。
氨基键合相具有较强的氢键结合能力,对甾体、强心甙等某些多官能团化合物有较好的分离能力,因其氨基能与糖类分子中的羟基产生选择性相互作用,而广泛用于糖类的分析,但它不能用于分离羰基化合物,如甾酮、还原糖等,因为它们之间会发生反应生成Schiff碱。
二醇基键合相适用于分离有机酸、甾体和蛋白质。
在正相键合相色谱法中,混合组分的分离选择性与键合相种类、流动相极性及试样性质有关。
一般极性强的组分在固定相上保留因子k大,极性弱的组分保留因子k小,在同一流动相条件下,极性弱的先洗脱出柱,因此保留时间tR短,极性强的保留时间tR长。
当流动相极性增强时,保留时间tR减小;反之则tR增大。
因此可调节流动相极性来改善分离度。
(二)反相键合相色谱法
采用非极性键合相为固定相,极性溶剂作流动相的色谱法称为反相键合相色谱法(RP-bondedphasechromatography)。
常用的非极性键合相主要有各种烷基(C1~C18)和苯基、苯甲基等硅烷键合相,以十八烷基硅烷键合相(octadecylsilane,ODS或C18)应用最广;流动相常用甲醇-水或乙腈-水体系。
非典型反相色谱系统,由弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。
对于反相键合相色谱法的分离机制,目前还没有一致的看法,大致有两种观点:
一种认为属于分配色谱,另一种认为属于吸附色谱。
分配色谱的作用机制是假设流动相中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面,组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。
吸附色谱的作用机制是把非极性的烷基键合相看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的“分子毛”,这种“分子毛”有强的疏水特性,溶质在固定相上的保留是疏溶剂作用的结果(即疏溶剂理论),当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时,一方面,非极性组分分子或组分分子的非极性部分,由于疏溶剂的作用,将会从水中被“挤”出来,与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用,这种“结合”,是由于溶质和极性溶剂之间的斥力造成的,而不是非极性溶质和非极性固定相之间的微弱的非极性作用力的缘故。
另一方面,被分离物的极性部分受到极性流动相的作用,使它离开固定相,减少保留值,此即解缔过程。
显然,这两种作用力之差,决定了分子在色谱中的保留行为。
一般固定相的烷基配合基或分离分子中非极性部分的表面积越大,或者流动相表面张力及介电常数越大,则缔合作用越强,分配比也越大,保留值越大。
在反相键合相色谱中,极性大的组分先流出,极性小的组分后流出。
非极性键合相的烷基链长对样品容量、溶质的保留值和分离选择性都有影响,样品容量随烷基链长增加而增大,且长链烷基可使溶质的保留值增大,并常常可改善分离的选择性;但短链烷基键合相具有较高的覆盖度,分离极性化合物时可得到对称性较好的色谱峰。
苯基键合相与短链烷基键合相的性质相似。
另外C18柱稳定性较高,这是由于长的烷基链保护了硅胶基质的缘故,但C18基团空间体积较大,使有效孔径变小,分离大分子化合物时柱效较低。
分离非极性和极性较弱的化合物可选择非极性键合相。
利用特殊的反相色谱技术,例如反相离子抑制技术和反相离子对色谱法等,非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。
在反相键合相色谱中,流动相的pH发生变化时,溶质的解离程度将随着pH的变化而发生改变,而溶质的解离程度越高,则分配比越小,保留值就越小。
反相离子抑制色谱就是在流动相体系中加入少量的弱酸、弱碱或缓冲溶液,调节流动相的pH,抑制溶质的解离,增加其与固定相之间的缔合作用,增大分配比,使保留值增大而得以分离的色谱法。
一般来说,在不超过键合相允许pH范围的情况下,进行弱酸分析时,应降低流动相的pH,增大分配比,延长保留值;反之,进行弱碱分析时,则应升高流动相的pH,增大分配比,延长保留值。
该方法特别适用于弱酸(pKa=3~7)和弱碱(pKb=6~7)的分离分析。
可见,反相键合相色谱法既可以用于分离分析非极性至中等极性的各类分子型化合物,又因为键合相表面的官能团不易流失,溶剂的极性可以在很大范围内调整,由它派生的反相离子对色谱法与离子抑制色谱法,可以分离有机酸、碱、盐等离子型化合物,因此其应用范围很宽,基本上80%左右的液相色谱分离问题可以用反相液相色谱法解决。
(三)反相离子对色谱法
离子对色谱法(ionpairchromatography)由反相键合相色谱法衍生而来。
离子抑制色谱法主要用于对弱电解质的分离分析,当溶质属于较强电解质时,单靠离子抑制其保留值并不能获得显著提高,此时就需采用反相离子对色谱法(RP-ionpairchromatography),即仍然采用非极性键合相,在流动相中加入离子对试剂,因为加入的离子对试剂中的反离子可与被分析组分的离子在流动相中生成中性离子对,增加了溶质与固定相之间的相互作用,使分配比增加,保留值增大,分离度提高。
该色谱法主要用于离子型或可离子化的化合物的分离分析。
分析碱类常用的离子对试剂为烷基磺酸盐,如正戊烷磺酸钠(PICB5)、正己烷磺酸钠(PICB6)、正庚烷磺酸钠(PICB7)、正辛烷磺酸钠(PICB8)等。
另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。
分析酸类常用四丁基季铵盐,如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐(TBA)为离子对试剂。
三、其他高效液相色谱法
高效液相色谱法中除了最常见的化学键合相色谱法外,还有离子色谱法、分子排阻色谱法、亲和色谱法和手性色谱法等。
(一)离子色谱法
离子色谱法(ionchromatography,IC)在色谱领域中具有重要的地位,它是基于被测物的可解离性(离子性)进行分离分析的液相色谱方法。
H-Small等人于1975年提出的离子色谱是以低交换容量离子交换剂作固定相、用含有合适淋洗离子的电解质溶液作流动相使无机离子得以分离,并成功地用电导检测器连续测定流出物的电导变化。
离子色谱法的发明开创了离子化合物分离分析的新局面,发展非常迅速,目前,离子色谱法已广泛用于无机阴离子、无机阳离子、有机酸、糖醇类、氨基糖类、氨基酸、蛋白质、糖蛋白、DNA、RNA水解产物等物质的定性和定量分析。
离子色谱法的分离机理主要为离子交换,即基于离子交换树脂上可解离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子之间进行的可逆交换;离子色谱的其他分离机理还有离子对色谱、离子排阻色谱、离子抑制色谱和金属离子配合物色谱等。
(二)分子排阻色谱法
分子排阻色谱法(moleculeexclusionchromatography,MEC)又称凝胶过滤色谱法(gelfiltrationchromatography,GFC)、凝胶渗透色谱法(gelpermeationchromatography,GPC)、尺寸排阻色谱法(sizeexclusionchromatography,SEC)和空间排阻色谱法(stericexclusionchromatography,SEC)。
它是根据分子大小进行分离的一种液相色谱技术,主要用于较大分子的分离。
分子排阻色谱法的分离原理为凝胶色谱柱的分子筛机制,它不具有吸附、分配和离子交换作用。
色谱柱多以亲水硅胶、凝胶或修饰凝胶如葡聚糖凝胶Sephadex和聚丙烯酰胺凝胶Sepherose等为填充剂,这些填充剂表面分布着不同尺寸的孔径,凝胶的孔径与被分离组分分子大小相应,被测物质分子进入色谱柱后,它们中的不同组分按其大小进入相应的孔径内,大于所有孔径的分子不能进入填充剂颗粒内部,在色谱过程中不被保留,最早被流动相洗脱至柱外,保留时间较短;小于所有孔径的分子能自由进入填充剂表面的所有孔径,在柱子中滞留时间较长,保留时间较长;其余分子则按分子大小依次洗脱。
(三)手性色谱法
手性色谱法(chiralchromatography,CC)是对手性化合物的对映异构体进行分离分析的色谱法。
要实现手性识别,手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶极-偶极作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
(四)亲和色谱法
亲和色谱法(affinitychromatography,AC)是依据生物分子间亲和吸附和解离的原理建立起来的色谱法。
在生物体内,许多大分子具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性,例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等,生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力。
将具有特异性相互作用力的其中一种物质称为配基,另一种物质称为亲和物,它们也可彼此称为配基。
亲和色谱法的固定相是将配基通过共价键键合到载体上形成的,当含有亲和物的流动相流经固定相时,亲和物被固定相选择性吸附,而试样中其他组分被洗脱,然后改变流动相条件以降低配基与亲和物之间的亲和力,使亲和物得以洗脱。
第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择
要实现最理想的分离分析,必须选择最佳的色谱操作条件,因此进行高效液相色谱法研究的关键步骤就是对色谱操作条件的优化。
在所有色谱条件中,影响分离度、选择性的关键因素就是固定相和流动相。
而目前在HPLC中用得最多的是键合相色谱法,因此,本节重点讨论键合相色谱法中的固定相、流动相及分离条件的选择。
一、固定相
化学键合相简称键合相(bondedphase),是通过化学反应将有机官能团键合在载体表面形成的,化学键合相色谱法的固定相就是键合相。
(一)键合相的类型
根据键合反应的不同,键合相具有许多种类,如离子交换型键合相、手性固定相和亲和固定相等。
在所有的键合相中,最常用的是键合相色谱法中的化学键合相。
如前所述,键合相色谱法中的化学键合相是以微粒多孔硅胶为载体,根据反应后键合基团的极性大小不同,可将键合相分为极性、弱极性和非极性三类。
1.极性键合相常用的极性键合相是将氨丙硅烷基[Si(CH2)3NH2]或氰乙硅烷基[Si(CH2)2CN]键合在硅胶上制成的氨基(-NH2)或氰基(-CN)键合相,一般用于正相色谱。
氨基键合相既能接受氢键,又能给予氢键,与酸性硅胶具有完全不同的性能,对多官能团化合物该键合相具有很好的分离选择性。
如氨基与糖类化合物分子中的羟基之间发生选择性作用,因此可广泛用于糖类的分离;在酸性介质中,氨基还可作为弱阴离子交换剂分离核苷酸。
但是因为氨基可与醛或酮发生反应,因此当氨基键合相作固定相时,流动相中不能含有羰基化合物,更不宜用于分离羰基化合物,如甾酮、还原糖等。
氰基键合相的分离选择性与硅胶相似,但其与双键化合物可发生选择性作用,因此对双键异构体或含有不同双键数目的环状化合物显示出较好的分离能力。
2.弱极性键合相常见的弱极性键合相有醚基和二羟基键合相,这类固定相用得很少,视流动相的极性,该类固定相既能用于正相色谱,又能用于反相色谱。
3.非极性键合相常用的非极性键合相是在硅胶上键合非极性烃基,如甲基(C1)、辛烷基(C8)、苯基和十八烷基(C18)等。
非极性键合相一般用于反相色谱。
非极性键合相的烃基链长对分离选择性和载样量产生较大影响。
一般短链或苯基非极性键合相的分离速度快,但是烃基链越长,键合相的稳定性越好,并且对溶质的保留值越大,分离选择性更好,因此十八烷基(C18)键合相在HPLC中应用最为广泛。
(二)键合相的性质
键合相的性质取决于载体本身和键合基团的性质。
对硅胶载体进行改进可改良键合相的性能,如在硅胶基质内键合桥式乙烷形成Si-C杂化硅胶可显著提高键合相的机械强度和耐碱性能,使柱效提高。
如上节所述,与硅胶表面发生反应的基团不同则形成不同性质的键合相,如十八烷基(C18)键合相是用十八烷基氯硅烷与硅胶表面的硅醇基发生反应键合而成的。
(三)键合相的特点
键合相的特点体现在以下几个方面:
1.柱效高,分离选择性好,适用于分离几乎所有类型的化合物。
一方面通过控制化学键合反应,可以把不同的有机基团键合到硅胶表面上;另一方面可以通过改变流动相的组成和种类,从而使分离的选择性大大提高。
2.对不太强的酸及各种极性的溶剂都有很好的化学稳定性和热稳定性,并且适于梯度洗脱,为复杂体系的分离创造了条件。
3.键合相表面均一性好,且使用过程中不易发生流失,稳定性好,重现性好,柱寿命长。
4.载样量大。
但是,酸度对以硅胶为载体的键合相的稳定性有很大的影响,硅胶键合相一般应在pH=2~8的介质中使用,经过改良的一些硅胶载体如Si-C杂化硅胶制备的键合相可使流动相介质pH范围得以扩展。
二、流动相
HPLC的流动相又称为洗脱剂(eluant),它是影响键合相色谱法分离效果的主要因素。
键合相色谱法对流动相的要求与其他液相色谱法相似,一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低黏度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
选择流动相时应考虑以下几个方面:
①流动相化学稳定性好,不应与固定相发生化学反应。
②流动相纯度要高。
以免其中杂质在柱上积累,缩短色谱柱的寿命。
流动相在使用前必须过滤除去尘埃微粒以免堵柱,还应脱气除去溶解的气体,以免产生气泡影响分离和检测。
③流动相黏度要低。
高黏度溶剂会影响溶质的扩散、传质,降低柱效,还会使分离时间延长。
④流动相对样品要有适宜的溶解度。
如果溶解度欠佳,样品会在柱头沉淀,不但影响了纯化分离,且会使柱子恶化。
⑤流动相必须与检测器匹配。
用UV检测器时,所用流动相在检测波长下应没有吸收,或吸收很小。
当使用示差折光检测器时,应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相,以提高灵敏度。
在化学键合相色谱法中,溶剂的洗脱能力即溶剂的强度与其极性直接相关。
在正相色谱中,强极性的溶剂洗脱能力越强,则为强溶剂;而在反相色谱中,弱极性的溶剂为强溶剂。
即在正、反相色谱中,溶剂的洗脱能力大体相反。
选好填料(固定相)后,强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少,相应的容量因子k降低;而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加,相应的容量因子升高。
因此,k值是流动相组成的函数,改变流动相配比就能改变其洗脱能力,强溶剂比例增加,使k变小。
第四节分离条件的选择
一、高效液相色谱法的速率理论
速率理论是色谱动力学理论的代表。
它把色谱过程看作一个动态非平衡过程,研究过程中的动力学因素对峰展宽(或柱效)的影响。
在范第姆特方程式的基础上,Giddings和Synder等人根据液体与气体的性质差异,提出了液相色谱速率方程式即Giddings方程式:
H=A+Bu+Cmu+Csmu+Csu(13-1)
式中,H为理论塔板高,A称为涡流扩散项,Bu称为纵向扩散项,Cmu为流动相传质阻抗项,Csmu为静态流动相传质阻抗项,Csu为固定相传质阻抗项,u为流动相线速度。
其中纵向扩散系数B=2γDm,γ为常数,Dm为组分在流动相中的扩散系数,它与流动相黏度成反比,与温度成正比,因在HPLC中流动相为液体,其黏度大,柱温低,一般在室温,故Dm比气相的Dg小4~5个数量级,纵向扩散项Bu很小,可以忽略不计,于是(13-1)式可简写成为:
H=A+Cmu+Csmu+Csu(13-2)
因此,速率理论认为影响柱效的因素包括:
1.流动相流速u:
(13-2)式表明,流速越快,塔板高度越高,因此,HPLC应尽量采用较低的流速,对于分析型的HPLC,一般采用1ml·min-1左右的流速即可。
2.涡流扩散A(eddydiffusion):
因为A=2λdp,dp为颗粒平均直径;λ为填充不规则因子,填充越不均匀λ越大。
因此,要降低涡流扩散的影响,HPLC的固定相应采用小粒度,仄粒度分布及球形或接近球形固定相(一般为3~10μm,最好3~5μm,粒度分布RSD≤5%),并采用匀浆高压填充。
3.传质阻抗(masstransferresistance):
组分在流动相和固定相中溶解、扩散、“平衡”和转移的过程称为传质过程。
影响此过程进行速度的阻力称为传质阻抗。
如果不存在传质阻抗,则不会发生峰展宽。
传质阻抗在固定相和流动相中都存在,在HPLC中存在三种传质阻抗:
固定相传质阻抗(stationaryphasemasstransferresistance)、流动相传质阻抗(mobilephasemasstransferresistance)和静态流动相传质阻抗(staticmobilephasemasstransferresistance)。
总之,要提高色谱柱的柱效,必须提高柱内填料装填的均匀性并减小粒度以加快传质速率,减小涡流扩散和流动相传质阻力;选用低黏度的流动相(如甲醇、乙腈)也有利于减小传质阻力,提高柱效;降低流动相流速可降低传质阻力项的影响,但会增加纵向扩散项并延长分析时间,所以流速不宜太低;选择适当的柱温也可减小传质阻力,提高柱效。
二、正相键合相色谱法的分离条件
正相键合相色谱法一般选用极性键合相,如氰基、氨基键合相等。
正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调节剂。
常用极性调节剂为乙醇、异丙醇、四氢呋喃、氯仿等。
流动相的组成也可采用三角形法进行优化以达到所需要的分离选择性。
进行梯度洗脱时,在流动相组成中逐渐增大极性相对较高的溶剂如异丙醇或氯仿的比例。
三、反相键合相色谱法的分离条件
反相键合相色谱法通常选用非极性键合相,最常用的是十八烷基(C18)键合相。
流动相通常以水作为基础溶剂,再加入一定量的能与水互溶的极性调节剂,
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