实验诊断学临床血液学检验.docx
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实验诊断学临床血液学检验
Documentserialnumber【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
实验诊断学临床血液学检验
临床血液学检验
Ⅰ、血液一般检验----红细胞系统
一、红细胞生成起源
二、红细胞及血红蛋白增多
1、男:
RBC>×1012/L,Hb>170g/L
女:
RBC>×1012/L,Hb>160g/L
2、红细胞及血红蛋白增多的【临床意义】
⑴、相对增多:
血浆容量减少血液浓缩
⑵、绝对增多
①继发性:
非造血系统疾病,主要环节是EPO增多
代偿性增加:
血氧饱和度低,组织缺氧所致
生理性:
新生儿、高原居民
病理性:
慢性心肺疾病、异常血红蛋白病
非代偿性增加:
无血氧饱和度低和组织缺氧
肿瘤和肾病所致:
肾癌、肝细胞癌、卵巢癌、子宫肌瘤、肾盂积水、多囊肾等
②原发性:
真性红细胞增多症
三、红细胞及血红蛋白减少
1、贫血:
男<120g/L,女<110g/L
贫血程度:
轻度:
>90g/L
中度:
90-60g/L
重度:
60-30g/L
极重度:
<30g/L
2、红细胞及血红蛋白减少的【临床意义】
⑴、生理性减少:
婴幼儿(生长发育迅速),妊娠中、后期(血容量增加,血液稀释),老人(骨髓造血减少)
⑵、病理性减少
①生成减少
骨髓造血障碍
造血干细胞异常:
再障
骨髓浸润:
急性白血病等
原因不明或多种机制:
慢性感染、肿瘤、肝病、内分泌病等伴发的贫血
细胞分化和成熟障碍
DNA合成障碍:
巨幼细胞贫血
血红蛋白合成障碍
血红素合成障碍:
IDA
珠蛋白合成障碍:
海洋性贫血
2破坏过多
红细胞内在缺陷(遗传性):
遗球、红细胞酶缺陷的溶贫、珠蛋白生成障碍性贫血、异常血红蛋白病、PNH
红细胞外在缺陷(获得性):
免疫性、机械性
3失血
急性失血
慢性失血
四、网织红细胞(reticulocyte)
【定义】网织红细胞是晚幼红细胞到成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞,胞质中尚残存多少不等的核糖核酸等嗜碱性物质。
用煌焦油蓝或新亚甲蓝进行活体染色,这些嗜碱性物质被凝聚沉淀并着色,在胞浆中呈现蓝色细颗粒状,颗粒间又有细丝状联缀而构成网状结构,故称网织红细胞。
【正常值】~%~%)
【临床意义】
(一)反映骨髓的造血功能
1.网织红细胞增多:
溶血性贫血;急性大量溶血
2.网织红细胞减少:
再生障碍性贫血
(二)贫血治疗的疗效判断
缺铁性贫血和巨幼细胞贫血给予铁剂或叶酸治疗有效,网织红细胞增高;
溶血性贫血和失血性贫血治疗有效,网织红细胞减低
五、红细胞沉降率(erythrocytesedimentationrate,ESR)
【定义】是指红细胞在一定条件下沉降的速率。
【正常值】男性:
0~15mm/h女性:
0~20mm/h
【临床意义】
(一)生理性增快:
妇女月经期(与子宫内膜破损及出血有关);妊娠3月后至分娩后3周(与生理性贫血及纤维蛋白原含量增加有关);老年人(与血浆纤维蛋白原含量增加有关)
(二)病理性增快:
1.炎症性疾病:
①急性细菌性炎症(与肝脏释放急性时相反应物质增多,包括α1抗胰蛋白酶,α2巨球蛋白,CRP,结合珠蛋白,转铁蛋白,纤维蛋白原等有关);
②风湿热活动期(与γ及α2球蛋白增高有关);
③慢性炎症(如结核)活动期(与球蛋白,纤维蛋白原增加有关)
2.组织损伤及坏死:
大范围组织损伤,手术创伤,心肌梗塞(心绞痛时正常,可作为鉴别),肺梗塞
3.恶性肿瘤:
与α2巨球蛋白,纤维蛋白原增高,肿瘤组织坏死,继发感染,贫血等有关。
4.高球蛋白血症
多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、风湿性疾病(SLE、类风湿关节炎)、亚急性感染性心内膜炎、慢性肾炎、肝硬化
红细胞沉降率的临床意义
5.贫血
HB低于90g/L时,血沉增快,随贫血加重而增快明显
*血沉加快不与红细胞减少呈正比(严重贫血,红细胞过少不易形成缗钱状排列)
*遗传性球形红细胞增多症、镰形细胞贫血、红细胞异型症:
异型红细胞不易聚集成缗钱状,血沉加快不多
6.高胆固醇血症
六、血细胞比容(hematocrit,Hct)
【定义】又称血细胞压积(packedcellvolume,PCV),指血细胞在血液中所占容积的比值。
【正常值】温氏法:
男—L(40-50容积%),平均l
女(37-48容积%),平均l
【临床意义】
Hct增高:
(1)相对性增高:
血液浓缩
(2)绝对性增高:
真性红细胞增多症
Hct减低:
各种贫血
*由于贫血类型不同,红细胞体积不同,Hct的减少与红细胞数减少不一定呈正比
七、平均红细胞体积(meancorpuscularvolume,MCV)
每个红细胞的平均体积MCV=Hct/RBC(L)×1015(fl)
正常值:
80-94fl(1ml=1012fl)
八、平均红细胞血红蛋白含量(meancorpuscularhemoglobin,MCH)
每个红细胞内所含Hb的平均量
MCH=Hb/RBC(g)×1012(pg)
正常值:
26-32pg(1g=1012pg)
九、平均红细胞血红蛋白浓度(meancorpuscularhemoglobinconcentration,MCHC)
每升红细胞中平均所含Hb浓度
MCHC=Hb/Hct(g/L或%)
正常值:
310~350g/L或31%-35%
Anemia-MorphologicClassification
类型MCV(fl)MCH(pg)MCHC(%)病因
大细胞性贫血>100>3231-35VitB12andfolatedef
正常细胞性贫血80-9426-3231-35急性失血、白血病
小细胞低色素性贫血<80<26<30IDA
单纯小细胞性贫血<80<2631-35chronicdisease
Ⅱ、白细胞计数与白细胞分类计数
1、中性粒细胞增多的【临床意义】
⑴生理性:
剧烈运动、寒冷、高温、新生儿、妊娠、分娩
⑵病理性:
①反应性
急性感染或炎症:
化脓性球菌
组织损伤或坏死:
外伤、心梗
急性溶血、急性失血、急性中毒、恶性肿瘤
其他:
风湿性关节炎、AIHA等
②异常增生
粒细胞白血病:
AML,CML
骨髓增殖性疾病(MPD):
真红、原发性血小板增多症、骨髓纤维化
2、中性粒细胞减少
白细胞减少:
WBC<×109/L
粒细胞减少症:
NAC<×109/L
粒细胞缺乏症:
NAC<×109/L
【临床意义】
⑴感染性疾病:
病毒、伤寒
*某些严重细菌感染、晚期肿瘤等WBC减少,但N%增高,核左移,预后差。
⑵血液系统疾病:
AA,粒缺,非白血性白血病,恶组,PNH
⑶理化因素:
氯霉素、抗甲状腺药
⑷脾亢
⑸其他:
SLE
3、中性粒细胞核象变化
核左移:
杆状核粒细胞增多,甚至出现杆状核前更幼稚阶段的粒细胞,见于急性感染,急性中毒,急性溶血,急性失血。
核右移:
分叶核粒细胞分叶过多,分叶在5叶以上的细胞超过3%,见于巨幼贫,抗代谢药治疗后,感染恢复期。
4、类白血病反应(leukemoidreaction)
指机体对某些刺激因素所产生的类似白血病表现的血象反应。
周围血中白细胞大多明显增高,并可有数量不等的幼稚细胞出现。
当病因去处后,类白血病反应也逐渐消失。
引起类白血病反应的病因以感染及恶性肿瘤最多见,其次还有急性中毒、外伤、休克、急性溶血或出血、大面积烧伤、过敏及电离辐射等。
Ⅲ、溶血性贫血的实验室检查
一、溶贫的概念:
是指红细胞提早破坏超过骨髓造血代偿能力时所发生的贫血。
二、分类及发病机理
⑴按贫血场所血管内溶血血管外溶血、原位溶血
⑵按遗传倾向先天性(遗传性)、获得性
⑶按发病机制
红细胞内部异常所致膜结构与功能异常;酶缺陷;遗传性Hb病;获得性
红细胞外部因素所致免疫;物理机械;化学;感染
三、如何诊断溶血性贫血
肯定溶血的依据
确定主要溶血部位
寻找溶血原因
确定是否有溶血
1、找出RBC破坏增多的依据
(1)RBC寿命测定(最佳)
正常值:
25~32天
51Cr同位素标记,半衰期<15天,说明有溶血存在。
(2)红细胞形态改变
破碎红细胞、盔形红细胞等
FragmentofRBC
左:
盔形、三角形、棘形、碎片等右:
人工造成的皱缩红细胞(涂片太厚、天气湿热、玻片带碱性)
(3)血清乳酸脱氢酶活性测定(serumlacticdehydrogenase,LDH)
正常值:
80U~250U/L
升高为RBC破坏指标(>600U/L)
(4)血浆游离Hb测定(plasmfreehemoglobin)
正常值:
<40mg/L
意义:
血管内溶血的指征
(5)血清结合珠蛋白测定(haptoglobin,Hp)
正常值:
~L
溶血存在时,Hp减少。
(6)血浆高铁血红素白蛋白试验(methemalbumintest)
正常:
阴性
严重血管内溶血时呈阳性
(7)Hb尿测定(hemoglobinuria)
血管内有大量红细胞破坏,血浆中的游离Hb量超过1000mg/L时出现
正常值:
阴性
溶血时阳性
(8)尿含铁血黄素试验(Roustest)
正常值:
阴性
溶贫中阳性只占10~20%
2、红细胞代偿增生的证据
(1)外周血网织红?
(2)外周血涂片红细胞大小不均,嗜多色性,Howoll-Jolly小体,Cabot环,有核红细胞
(3)增生性骨髓象
多色性红细胞
Howell-Jollybody
Howell-Jolly小体Cabot环
3、溶血发生的部位
血管内溶血(严重溶血)
血管外溶血
血清胆红素
↑
正常或↑
尿胆红素
正常或↑
正常
血浆游离Hb
明显升高
正常/轻度升高
血清结合珠蛋白
↓
正常或↓
血浆高铁血红素
白蛋白复合物
常出现/轻者可
不出现
不出现
血浆血红素结合
蛋白
常减低/正常
正常
含铁血黄素尿
(+)/(-)
(-)
血红蛋白尿
可出现
不出现
4、确定溶血的原因
⑴红细胞膜缺陷的检验
①RBC渗透脆性试验(erythrocyteosmoticfragilitytest)
检测红细胞在不同浓度低渗NaCl溶液中的抵抗力,即检测红细胞渗透脆性。
RBC表面积/RBC容积比值与RBC脆性成反比。
②自身溶血试验及其纠正试验
HS(Hereditaryspherocytosis)时低渗溶液中的异常溶血
参考值:
开始溶血%~%(NaCl液)
完全溶血%~%(NaCl液)
③酸溶血试验(Hamtest)(acidserumhemolysistest)
特异性高,是国内外公认的PNH确诊试验
利用补体在弱酸性环境中激活,并攻击RBC膜,致溶血。
受检者RBC+正常血清(补体)-----------------溶血(+)-----说明受检者RBC对补体敏感性很高。
稀HCl、37℃30min
④蔗糖溶血试验(sucroselysistest)
特异性敏感性均不如Ham试验,仅做筛选。
参考值:
阴性
⑵红细胞酶缺陷的检验
①自身溶血试验及其纠正试验
变性珠蛋白小体生成试验
高铁血红蛋白还原试验
酶活性测定
G6PD缺陷:
+ATP:
可纠正,但不能纠至正常
+G:
同上
•PK缺陷:
+ATP:
可纠正
+G:
不纠正
②变性珠蛋白小体生成试验
受检RBC+乙酰苯肼--------作活体染色(甲基紫)
37℃1~2h
有变性珠蛋白小体,则膜上形成紫黑色颗粒
结果:
此类细胞>5%即(+),正常人<30%
意义:
不稳定Hb也可出现,故仅作筛选
⑶珠蛋白合成异常的检验
Hb电泳
HbF测定
HbH包涵体生成试验
异丙醇试验
正常血红蛋白的种类
类型肽链所占比例
HbAα2β2正常成人>95%
HbFα2γ2正常成人<2%,为胎儿期Hb主要成分
HbA2α2δ2正常成人2%-3%
靶形红细胞(targetcell)
①血红蛋白电泳分析(hemoglobinelectrophresis)
主要检查有无异常Hb区带
在HbA前出现——快速异常:
HbH,J,K组
在HbA后出现——慢速异常:
HbG,D,E组
HbA2定量测定
正常值:
~3%,>5%为升高
②HbF定量测定(碱变性试验)(alkalidenaturationtest)
HbF具抗碱作用
正常值:
成人<2%,新生儿55%~85%,1岁左右同成人
>4%为升高,主要见于β地中海贫血
③异丙醇沉淀试验(isopropanoltest)
正常人Hb40min后开始沉淀。
有不稳定血红蛋白存在,10min内出现混浊沉淀。
HbF、H、E、α-地贫杂合子、G6PD缺陷,也可假阳性。
④变性珠蛋白小体生成试验
⑷免疫性溶血的检验
抗人球蛋白试验(Coombs`test)
为检查温抗体(不完全抗体)敏感的试验
主要用于诊断AIHA(autoimmunehemolyticanemia)
①直接抗人球蛋白试验(DAGT)
测RBC表面结合的抗体(更重要,价值高)
受检者RBC悬液+等量抗人球蛋白试剂,低速离心后观察凝集否--------37℃,15min
如病人RBC膜上有IgG型抗体或C3d抗体则出现凝集反应(+)
抗人球蛋白试剂内有抗IgG抗体,抗C3d抗体(抗抗体)
阳性反应条件:
结合在RBC膜上自身抗体(100~500分子数/RBC),分子数过少致假阴性。
②间接法(IAGT)
测游离特异的抗体(先使RBC致敏,再与抗人球蛋白血清结合
将病人血清和正常RBC混合,再加入抗IgG试剂
Ⅳ、骨髓细胞形态学检查
急性白血病的FAB分型(French-American-British(FAB)classificationofacuteleukemias)。
(一)急性髓系白血病FAB分类(M0-M7)
M0:
急性髓系白血病微分化型
M1:
急性粒细胞白血病未分化型
M2:
急性粒细胞白血病部分分化型
M3:
急性早幼粒细胞白血病
M4:
急性粒-单核细胞白血病
M5:
急性单核细胞白血病
M6:
红白血病
M7:
急性巨核细胞白血病
*分类依据:
①形态学;②髓系细胞分化阶段(粒、单、巨核、红白)。
(二)急性淋巴细胞白血病(L1-L3)
L1→原始、幼稚淋巴细胞偏小,直径≤12μm(成人多见,65%)。
L2→原、幼淋巴细胞以大淋巴细胞为主,直径≥12μm;(成人多见,65%)
L3→大淋巴细胞为主,胞浆嗜硷性,有明显空泡(少见,约2~3%)。
*分类依据:
形态学
(三)急性白血病的实验室检查特点:
①外周血
WBC计数多增加,也可减少,范围~200×109/L;当WBC计数>100×109/L,称为白细胞增多性白血病;当WBC计数正常或减少,称为白细胞不增多性白血病,血涂片可见原始或幼稚细胞;Hb↓,pt↓。
*②骨髓检查
意义:
a.是诊断急性白血病的主要依据,必做;
b.骨髓增生明显或极度活跃,某一系列的原始细胞占全部骨髓有核细胞(ANC)≥20%。
概念:
a.白血病细胞“裂孔”现象——急性白血病时,骨髓中有核细胞以原始细胞为主,中间阶段细胞缺如,而残留少数成熟粒细胞的现象。
b.低增生性白血病——指骨髓增生低下,但原始细胞≥30%者。
c.奥氏小体(Auer小体)仅见于急非淋白血病,不见于急淋。
本质:
髓系颗粒聚集物(核糖体),瑞氐染色呈粉红色。
③细胞化学染色:
急性髓性白血病(AML)——过氧化物酶染色阳性(Myeloperoxidase,MPO=POX)
急性淋巴细胞性白血病(ALL)——过氧化物酶染色阴性,糖原染色(PAS)阳性,末端脱氧核糖核苷转移酶(terminaldeoxynuc-leotidyltransferase,TdT)阳性。
急性单核细胞白血病(AML-M5)——非特异性酯酶阳性。
④细胞表面标志——免疫学检查
急淋---→B细胞标志(5%);
T细胞标志(15~20%)——CD2、CD3、CD5
常见急淋白血病抗原(commonacutelymphoblasticantigen,CALLA),CD10(50%~65%)
急非淋→CD13(+),CD33(+),HLA-DR(-)→急非淋M3型(APL)
⑤细胞遗传学变化
急粒M3→t(15,17),早幼粒白血病基因(PML)/维甲酸受体基因(RARa)重排,见于90%以上的M3(见图1)。
急粒M2→t(8,21),形成AML1/ETO融合基因,见于M2(见图2)。
急淋(L3)→t(8,14),异常c-myc基因。
某些急淋→可有t(9,22),BCR/ABL融合基因
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- 实验 诊断 临床 血液学 检验