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生化实验讲义1
生物化学实验指导
(试用版)
生物化学教学组
二00八年九月
目录
前言
一、课程目标……………………………………………………………03
二、预习报告、实验记录与实验报告…………………………………04
三、实验室规则…………………………………………………………06
附录一:
常用基本度量仪器的使用……………………………………08
生物化学实验第一部分:
果蔬成分分析(24学时)
实验一果蔬中维生素C的定量测定(4学时)………………16
实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定(4学时)……………19
实验三果蔬中蛋白质含量测定(4学时)…………………………22
实验四果蔬中过氧化物酶分析(12学时)…………………………27
生物化学实验第二部分:
血清成分分析(24学时)
实验五血清胆固醇的定量测定(邻苯二甲醛法)(4学时)……36
实验六血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定(12学时)………38
实验七血清谷丙转氨酶活性的鉴定及活力测定(8学时)………45
前言
欢迎同学们到生物化学实验室来!
对于大多数学生来说,这不是第一次做化学实验,但是我们相信,生物化学实验一定是大家最感兴趣、最激动人心的实验,当然也是花费最大、最辛苦的实验。
同学们在过去几年中所学到的各种实验技术和操作技能,在这些实验中将会经常用到,当然更重要的是要学会一些新的、在生物化学的科学研究中最常用的实验方法。
同学们在生物化学实验方面要取得好成绩,在很大程度上,取决于你们对这些专门化实验技术的熟练掌握和对生物化学原理的深入了解。
当同学们进行实验时,无疑将会与以前做的各种实验进行比较。
在生物化学实验中,大家会发现,极少有像无机化学和有机化学实验那样进行化学反应和分离出“克”数量级的产物。
同学们将进行的是“毫克”和“微克”数量级的研究,并且在多数情况下,生物分子是溶解在溶液中的,而且往往看不到所研究的物质,但是将会看到动态的生物化学过程和由生物分子引起的生物化学变化。
实验中所用到的各种技术和方法,将起到“眼睛”的作用,用以对各种生物化学过程进行监测。
一、课程目标
同学们通过生物化学实验应该做到:
1.学习设计一个实验的基本思路,掌握各个实验的基本原理,学会严密地组织自己的实验,合理地安排实验步骤和时间。
2.训练实验的动手能力,学会熟练地使用各种生物化学实验仪器,包括各种天平、各种分光光度计、各种离心机、自动部分收集器、恒流泵、核酸蛋白检测仪、冰冻干燥机、酸度计、电导率仪、高速分散器、各种电泳装置和摇床等等。
3.学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能,提高实验报告的写作能力,能够整齐清洁地进行所有的实验,培养严谨细致的科学作风。
4.掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术,尤其是各种电泳技术和层析枝术,为今后参加科研工作打下坚实的基础。
预祝同学们以优异的成绩跨进这一新的科学殿堂,成为攀登生物科学高峰的新的勇士!
二、预习报告、实验记录与实验报告
1.预习与讨论
充分预习是做好实验的前提和保证。
只有充分理解实验原理、掌握操作要领,明确所做的实验将要解决哪些问题,怎样去做,为什么这样做,才能主动和有条不紊地进行实验,取得应有的效果。
为此,必须做到以下几点:
⑴钻研实验教材,阅读其它参考资料的相关内容,弄懂实验原理,明了做好实验的关键及有关实验操作的要领和仪器用法。
⑵合理安排好实验。
如,哪个实验反应时间长或需用干燥的器皿应先做,哪些实验先后顺序可以调动,从而避免等候使用公用仪器而浪费时间等,要做到心中有数。
⑶写出预习报告。
内容包括:
每次实验的标题,用反应式、流程图等表明实验步骤,留出合适的位置记录实验数据和实验现象或设计一个记录实验数据和实验现象的表格等。
切忌照抄实验教材。
总之,好的预习报告,应有助于实验的进行。
⑷实验前教师以提问的形式指出实验的关键,由学生回答。
以加深对实验内容的理解,检查预习情况。
对上次的实验进行总结和评述;教师或学生进行操作示范及讲评;不定期举行实验专题讨论,交流实验方面的心得体会。
2.实验记录
详细、准确、如实地作好实验记录是极为重要的,记录如果有误,会使整个实验失败,这也是培养学生实验能力和严谨的科学作风的一个重要方面。
⑴每位同学必须准备一个实验记录本,实验前认真预习实验,看懂实验原理和操作方法,在记录本上写好实验预习报告,包括详细的实验操作步骤(可以用流程图表示)和数据记录表格等。
⑵记录本上要编好页数,不得撕缺和涂改,写错时可以划去重写。
不得用铅笔记录,只能用钢笔和园珠笔。
记录本的左页作计算和草稿用,右页用作预习报告和实验记录。
同组的两位同学合做同一实验时,两人必须都有相同、完整的记录。
⑶实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量的数据,条理清楚,字迹端正,切不可了草以致日后无法辨认。
实验记录必须公正客观,不可夹杂主观因素。
⑷实验中要记录的各种数据,都应事先在记录本上设计好各种记录格式和表格,以免实验中由于忙乱而遗漏测量和记录,造成不可挽回的损失。
⑸实验记录要注意有效数字,如吸光度值应为“0.050”,而不能记成“0.05”。
每个结果都要尽可能重复观测二次以上,即使观测的数据相同或偏差很大,也都应如实记录,不得涂改。
⑹实验中要详细记录实验条件,如使用的仪器型号、编号、生产厂等;生物材料的来源、形态特征、健康状况、选用的组织及其重量等;试剂的规格、化学式、分子量、试剂的浓度等,都应记录清楚。
二人一组的实验,必须每人都作记录。
3.实验报告
实验报告是实验的总结和汇报,通过实验报告的写作可以分析总结实验的经验和问题,学会处理各种实验数据的方法,加深对有关生物化学与分子生物学原理和实验技术的理解和掌握,同时也是学习撰写科学研究论文的过程。
实验报告的格式应为:
⑴实验目的;⑵实验原理;⑶仪器和试剂;⑷实验步骤;⑸数据处理;⑹结果讨论。
每个实验报告都要按照上述要求来写,实验报告的写作水平也是衡量学生实验成绩的一个重要方面。
实验报告必须独立完成,严禁抄袭。
写实验报告要用实验报告专用纸,以便教师批阅,不要用练习本和其他片页纸。
为了使实验结果能够重复,必须详细记录实验现象的所有细节,例如,若实验中生成沉淀,那麽沉淀的真实颜色是什麽,是白色、淡黄色或是其他?
沉淀的量是多还是少,是胶状还是颗粒状?
什麽时候形成沉淀,立即生成还是缓慢生成,热时生成还是冷却时生成?
在科学研究中,仔细地观察,特别注意那些未予想到的实验现象是十分重要的,这些观察常常引起意外的发现,报告并注意分析实验中的真实发现,对学生将是非常重要的科学研究训练。
实验报告使用的语言要简明清楚,抓住关键,各种实验数据都要尽可能整理成表格并作图表示之,以便比较,一目了然。
实验作图尤其要严格要求,必须使用坐标纸,每个图都要有明显的标题,坐标轴的名称要清楚完整,要注明合适的单位,坐标轴的分度数字要与有效数字相符,并尽可能简明,若数字太大,可以化简,并在坐标轴的单位上乘以10的方次。
实验点要使用专门设计的符号,如:
○、●、□、■、△、▲等,符号的大小要与实验数据的误差相符。
不要用“×、+”和“•”小园点。
有时也可用两端有小横线的垂直线段来表示实验点,其线段的长度与实验误差相符。
通常横轴是自变量,往往知道的很准确,纵轴是应变量,是测量的数据。
曲线要用曲线板或曲线尺画成光滑连续的曲线,各实验点均匀分布在曲线上和曲线两边,且曲线不可超越最后一个实验点。
两条以上的曲线和符号应有说明。
实验结果的讨论要充分,尽可能多查阅一些有关的文献和教科书,充分运用己学过的知识和生物化学原理,进行深入的探讨,勇于提出自己独到的分析和见解,并欢迎对实验提出改进意见。
三、实验室规则
1.实验前必须认真预习实验内容,明确本次实验的目的和要求,掌握实验原理,写好实验预习报告,否则,不能进行实验。
2.实验时自觉遵守实验室纪律,保持室内安静,不大声说笑和喧哗。
3.实验过程中要听从教师指导,认真按照实验步骤和操作规程进行实验。
若想改进和设计新的实验方法,必须取得教师的同意。
实验时认真进行实验记录,实验完毕及时整理数据,按时上交实验报告。
4.实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整齐,药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架,严禁瓶盖及药勺混杂,切勿使药品(尤其是NaOH)洒落在天平和实验台面上,毛刷用后必须立即挂好,各种器皿不得丢弃在水池内。
5.配制试剂和用无离子水要注意节省,按实验实际使用量配制,多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收,昂贵的Sephadex、Sepharose凝胶和DEAE纤维素等,用后必须及时回收,不得丢弃。
6.配制的试剂和实验过程中的样品,尤其是保存在冰箱和冷室中的样品,必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等,放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液,必须严密封口。
7.配制和使用洗液必须极为小心,强酸强碱必须倒入废液缶或冲稀后排放。
电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池,只能倒入废物桶。
8.使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。
使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。
使用高速冷冻离心机和HPLC等大型仪器必须经过考核。
仪器发生故障应立即报告教师,未经许可不得自己随意检修。
9.实验室内严禁吸烟、饮水和进食,严禁用嘴吸移液管和虹吸管。
易燃液体不得接近明火和电炉,凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验,均应在通风条件下进行。
10.实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器,插好自动部分收集器上的试管,保持实验台面和实验柜内的整洁。
11.每组的仪器和玻璃器皿要用油漆编号,严禁抄拿他组仪器,不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上,打破了玻璃仪器要及时向教师报告,并自觉登记,学期结束时按规定进行处理。
12.每位学生要熟悉实验室内电闸的位置,烘箱和电炉用毕必须立即断电,不得过夜使用,要严格遵守实验室安全用电规则和其他安全规则。
13.每日实验完毕,值日生要认真做好实验室的卫生值日工作。
最后离开实验室的实验人员,必须检查并关好水、电、门、窗。
附录一:
常用基本度量仪器的使用
一、量筒
量筒是化学实验室最常使用的度量液体体积的仪器。
它有各种不同的容量,可以根据不同的需要来选用。
例如,需要量取8.0mL液体时如果使用100mL量筒测量液体的体积至少有lmL的误差。
为了提高测量的准确度,可以换用10mL量筒,此时测量体积的误差可以降低到0.1mL。
读取量筒的刻度值,一定要使视线与量筒内液面(半月形弯曲面)的最低点处于同一水平线上。
否则会增加体积的测量误差。
量筒不能做反应器用,不能装热的液体。
二、移液管的使用
移液管又名吸管,是将一定体积的液体从一个容器移至另一容器的仪器。
【一】移液管的分类
1.容量移液管
(1)单刻度线容量移液管
(2)双刻度线容量移液管
2.刻度移液管
(1)刻度达尖端刻度移液管
(2)刻度不达尖端刻度移液管
说明:
为便于准确快速地选取所需的吸管,国际标准化组织统一规定在分度吸管的上方印上各种彩色环,其容积标志如下:
标称容量(mL)
色标
标注方式
0.1
红
单
0.2
黑
单
0.25
白
双
0.5
红
双
1
黄
单
2
黑
单
5
红
单
10
桔红
单
25
白
单
50
黑
单
【二】移液管的使用
1.使用移液管前的准备
(1)检查移液管尖端是否完整,如果有破损则不能使用。
(2)把移液管洗净,用滤纸把外壁上的水拭干。
(3)除去移液管内的水分,用少量待量液体冲洗3~4次,每次2~3mL。
(目的是以免管内有水,把量取的液体冲稀。
)
2.使用移液管吸取液体
(1)用右手拇指,中指拿住移液管上端,把它的下端插入液体深处,用橡皮球小心吸取液体。
(2)当移液管内的液面上升到稍高于刻度线时,用拇指迅速堵紧移液管上口,并把移液管垂直提起,使移液管尖端离开液面,但不要从容器中取出。
(3)视线与标线成水平,左右移动拇指和中指,使移液管在拇指和中指之间移动,但食指仍然轻轻按住管口,液面缓慢下降,到液体弯月面与标线相切时,立即停止转动并按紧食指,使液体不再流出。
3.使用移液管放出液体
(1)垂直地拿移液管,下口靠受液容器的内壁,受液容器与移液管成45°。
(2)放开食指,使液体自由流出。
(3)液体自由流完后,停10s再把移液管拿开。
洗耳球
【三】注意事项
在调定零点和排放溶液的过程中,移液管都要保持垂直,其流液口必须接触倾斜的器壁并保持不动;等待15s后,流液口内残留的一点,除特别注明“吹”字以外,溶液绝不能用外力使其被振出或吹出。
另外,移液管用完应放在管架上,不要随便放在实验台上,尤其防止管颈下端被沾污。
三、滴定管的使用
【一】按构造分类
1.酸式滴定管
下端有玻璃活塞,用来装酸。
(因为NaOH和KOH等强碱溶液能腐蚀玻璃,是活塞粘牢,不能转动,故不能装碱溶液)
2.碱式滴定管
下端有一橡皮管(用弹簧或玻璃球来控制流量),用来装碱。
(注:
其不能装与橡皮起作用的溶液)
【二】精确度
1.滴定管有50mL和25mL两种。
(注:
刻度是从上部开始,第一刻度为零)
2.50mL的滴定管有50个大刻度,每两个大刻度内有10个小刻度,故最小刻度值为0.1毫升,加入估计位可读数到小数点后第二位。
3.滴定管的允许误差约为0.1%。
【三】用途
滴定管是容量分析中最基本的量器,多用来测定滴定时所能消耗溶液体积。
【四】滴定管的用法
1.滴定管的读数
(1)液体在滴定管内的液面呈弯月形,读数时,应使视线与弯月面最低点处相平,读取与最低点相切的刻度。
(2)有的滴定管后壁有一条乳白底兰线,在液面处兰色变细,使读数准确。
读法是读液面上下两兰线的焦点处,若没有白底兰线,可以用一张白纸为背景,便于读数。
2.滴定前的准备
(1)滴定管的选择和修理
①根据要装的液体选择酸式或碱式滴定管
②检查滴定管是否漏水
方法
酸式滴定管时,关闭活塞,用水充满至“0”线以上,直立约2min,观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出,然后将活塞转180°,重复以上操作一次。
碱式滴定管只需装水直立2min即可。
修理
如果发现滴定管漏水或酸式滴定管活塞转动不灵,则碱式滴定管需换玻璃球及橡皮管。
酸式滴定管需拆下活塞涂油。
涂油时要涂均匀的一薄层,即转动活塞,从外面观察时,全部为透明。
(2)蒸馏水洗涤
一共洗涤2~3次,第1次10mL,以后几次可各用5mL。
洗涤时边转动边倾斜,使水布满全管,并稍微振荡,立起以后,打开活塞使水流出一些冲洗管口,然后关闭活塞,将其余的水从上部管口倒出。
(3)洗净滴定管
滴定前,用少量待装溶液润洗3~4次,每次约5~10mL。
(4)把溶液由试剂瓶直接倒入滴定管,直到液面略高于刻度“0”为止。
不要用漏斗或烧杯,以保证在转移过程中溶液的浓度不变。
(5)出口管中气泡的清除
酸式滴定管
滴定管倾斜约30°,左手迅速打开活塞使溶液冲出即可。
碱式滴定管
橡皮管向上弯曲,出口斜向上方,用两指挤压玻璃球稍上侧边橡皮管,使溶液从出口管喷出,气泡便逸出,继续一边挤橡皮管,一边放直橡皮管,则气泡可以完全除去。
3.滴定管的操作法
滴定管必须保持垂直的夹在夹子上。
控制溶液流速的3种方式滴加法:
连续式滴加、间隙式滴加、液滴悬而不落。
4.滴定
(1)排出气泡后,调整液面至零刻度线或零刻度以下附近处,记下读数,是为初读数。
观察滴定管尖端是否悬有液滴,若有,应除掉。
(2)滴定时锥形瓶口接近滴定管尖端,不断摇动锥形瓶,使溶液混合均匀。
(3)滴定时不应太快,每秒3~4滴为宜,滴定将近终点时更要慢,确保每一滴都充分混合均匀。
(4)滴定到终点后,关闭活塞,等1~2min可读数,为终读数。
完毕后,剩余液不能倒回原瓶,用少量蒸馏水洗滴定管2~3次,装满蒸馏水至“0”以上,用试管罩好。
四、容量瓶的使用
【一】构造
1.有磨口塞子
2.细颈上有标线
表示在所指温度,一般为20°,当液体充满到标线时,液体体积恰好与瓶上所注明的体积相等。
【二】用途
配制一定体积的溶液。
(只能配制溶液,保存溶液需移到细口瓶中去)
【三】使用
1.检查是否漏水
注入自来水至标线附近,盖好盖子,左手按住塞子,右手指尖握住瓶底边缘。
把瓶子倒立2min,观察有无漏水现象。
2.将溶液从烧杯转入容量瓶
多次洗涤烧杯,把洗涤液转移入容量瓶中,保证溶质全部转移。
3.注入蒸馏水
缓慢注入到接近标线1cm处,等1~2min,以便粘附在瓶粳上水自然下流。
4.滴加水至标线(用洗瓶或滴管)注意视线平行标线。
5.重复倒转容量瓶十余次,使瓶中溶液混合均匀。
【四】注意
1.为了避免打破塞子,应该用一根线绳把塞子系在瓶颈上。
2.假如固体经加热溶解,则必须待冷却后才能转移到容量瓶中。
3.假如把浓溶液稀释,则用移液管吸取一定体积的浓溶液放入容量瓶中,操作同上。
生物化学实验第一部分:
果蔬成分生化分析(24学时)
实验一果蔬中维生素C的定量测定(4学时)
实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定(4学时)
实验三果蔬中蛋白质含量测定(4学时)
实验四果蔬中过氧化物酶分析(12学时)
实验一果蔬中维生素C的定量测定(4学时)
一、目的
1、掌握微量测定维生素C的方法和技术。
2、了解果蔬中维生素C含量。
二、原理
还原型维生素C可被氧化型2,6-二氯酚靛酚(下面简称染料)所氧化,成为氧化型维生素C。
氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色,在酸性溶液中呈红色。
成为还原型后为无色。
用氧化型染料来滴定还原型维生素C,当滴至全部还原型维生素C被氧化后,在稍滴一点呈微红色为终点。
滴定用去染料量与样品中还原型维生素C量成正比。
此法虽简单迅速,但氧化型染料亦能使其他还原型物质氧化,所以有一定缺点。
其反应式如下:
三、器材
1、微量滴定管及架
2、台秤
3、50mL量筒
4、1mL、10mL吸管
5、100mL锥形瓶
6、剪刀
7、滤纸
四、试剂与材料
1、1%草酸溶液:
称1g草酸溶于水,稀释到100mL刻度处。
2、2%草酸溶液:
称2g草酸溶于水,稀释到100mL刻度处。
3、维生素C标准液:
准确称取30.0mg维生素C溶于1%草酸溶液中,稀释至300mL刻度处(即1mL溶液中含有0.1mg维生素C),储存于棕色瓶中,最好用时配制。
4、氧化型0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液:
准确称300mg氧化型2,6-二氯酚靛酚溶于200mL含有52mgNaHCO3的热水中,冷却后加水至300mL刻度处,摇匀过滤,将滤液储于棕色瓶中,置冰箱中冷藏。
用标准维生素C溶液标定,每一星期标定一次。
5、各种果蔬
五、操作
1、制备新鲜果蔬液:
洗净新鲜果蔬,擦干表面水分,剥去外皮,称取20.0g放入50mL量筒中,加2%草酸液至40mL刻度处,研磨成匀浆。
用玻璃棒搅拌,静置10min,过滤,滤液即是(若样品中含大量铁,可用8%醋酸溶液提取,可在一定程度上延缓Fe2+还原染料)。
2、染料液装入滴定管中:
应驱除滴定管中的气泡,调整好零点。
3、滴定维生素C标准液:
吸取1.0mL维生素C标准液放入锥形瓶中,加9mL1%草酸溶液,摇匀,用染料液滴定至微红色保持15s不褪色即为终点。
记下所用去染料液数量,可算出1mL染料相当于多少mg维生素C。
4、滴定样品液:
吸取10.0mL样品液放入锥形瓶中,同上操作进行滴定。
可做两份,求平均值。
5、注意事项:
(1)某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿等)浆状物泡沫太多,可加数滴丁醇或辛醇。
(2)整个操作过程要迅速,防止还原型抗坏血酸被氧化。
滴定过程一般不超过2min。
滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL,如果样品含维生素C太高或太低时,可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。
(3)提取的浆状物如不易过滤,亦可离心,留取上清液进行滴定。
六、计算
m=×100=每百克样品中含维生素C毫克数
m:
每100克样品中含维生素C毫克数
V:
滴定样品液所用去染料液(2,6-二氯酚靛酚)容积(mL)。
C:
1mL染料液相当于维生素C的质量(mg/mL,由操作3计算得出)。
W:
10mL样品稀释液中含有样品的质量数(g)。
注:
预习实验二,提取还原糖和总糖,提取液密封并署名,置冰箱中备用。
实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定
——蒽酮比色法(4学时)
一、目的
掌握总糖和还原糖含量的测定方法。
二、原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
其原理:
糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物,再与蒽酮缩合成蓝色化合物,在620nm处有最大吸收。
多糖为非还原糖,可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖,再利用还原糖的性质进行测定,这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
三、器材
1、吸管1.0mL(×2)、5.0mL(×1)、0.1mL(×1)、0.2mL(×1)、0.5mL(×3)
2、试管1.5cm×15cm(×7)
3、分光光度计
4、水浴锅、
5、电子分析天平
6、电炉
7、容量瓶(100mL×1)、玻璃漏斗
8、量筒、研钵、三角烧瓶
四、试剂与材料
1、蒽酮试剂:
取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为80%的硫酸中,当日配制使用。
2、标准葡萄糖溶液(0.1mg/mL):
称取100mg葡萄糖,溶于蒸馏水并稀释至1000mL(可加几滴甲苯作防腐剂)。
3、6mol/LHCl溶液
4、20%NaOH溶液:
称取20gNaOH固体,溶于蒸馏水并稀释至100mL。
5、各种果蔬材料
五、操作
1、葡萄糖标准曲线的绘制:
取洁净试管6支,按表1进行操作:
表1蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作
0
1
2
3
4
5
标准葡萄糖溶液/mL
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
蒸馏水
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
置冰水浴中5min
蒽酮试剂
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
煮沸10′,冷却后室温放置10′,在620nm处比色
A620nm
以吸光度为纵坐标,各标准液浓度(mg/mL)为横坐标做图得标准曲线。
2、样品中还原糖的提取和测定
称取1g实验材料,加水约3mL,在研钵中磨成匀浆,转入三角烧瓶中,并用约30mL蒸馏水冲洗研钵2~3次,洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温约0.5h(使还原糖浸出),取出,冷却后定容至100mL。
过滤后冰箱保存。
不同果蔬需进行不同程度稀释。
葡萄:
取滤液0.5mL→100mL;梨:
取滤液1mL→100mL;盘菜、萝卜取滤液10mL→100mL。
取1mL最终稀释液置于试管中,浸于冰浴中冷却,再加入4mL蒽酮试剂,沸水浴中煮沸10min,取出冷却后比色,其他条件与做标准曲线相同。
测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
3、样品中总糖的提取、水解和测定
称取1g实验材料,加水约3mL,在研钵中磨成匀浆,转入三角烧瓶中,并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2~3次,洗出液也转入三角烧瓶中。
再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10mL,搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h,冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性。
然后用蒸馏水定容至100mL,过滤后冰箱保存。
不同果蔬需进行不同程度稀释。
葡萄:
取
- 配套讲稿:
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- 关 键 词:
- 生化 实验 讲义