生工专业基因工程复习题Word文档格式.docx
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转化:
受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。
停滞效应:
PCR中后期,随着目的DNA扩展产物逐渐积累,酶的催化反应趋于饱和,DNA扩增产物的增加减慢,进入相对稳定状态,即为停滞效应,又称平台期。
逆转录PCR:
以mRNA为原始模板进行的PCR反应。
PCR:
即聚合酶链式反应。
在模板,引物,4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下,特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。
α-互补(α-complementation):
指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中,插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列(又称α-肽),该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。
感染(infection)特指以λ噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
其中,由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导(transduction)。
47、转染(transformation)指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。
二、填空题(20%)
1、DNA片段重组连接的方法主要有平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接。
2、感受态细胞是指具有摄取外源DNA分子能力的细胞。
3、λ噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时,包装长度为野生型λDNA的75~105%。
5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶,化学合成的寡核苷酸引物,四种dNTP,合适的缓冲液体系。
6、核酸探针包括:
cDNA探针;
基因组DNA探针;
寡核苷酸探针和RNA探针。
7、部分酶切可采取的措施有:
(1)____________
(2)___________(3)___________等。
(1)减少酶量;
(2)缩短反应时间;
(3)增大反应体积
8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:
(1)____________;
(2)________________的活性。
枯草杆菌蛋白酶;
(1)5'
-3'
合成酶的活性;
(2)3'
-5'
外切核酸酶
9、为了防止DNA的自身环化,可用_____________去双链DNA__________________。
碱性磷酸酶;
5’端的磷酸基团
10、基因工程中有3种主要类型的载体:
_______________、_____________、______________。
质粒DNA;
病毒DNA;
质粒和病毒DNA杂合体
11、pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于,它的四环素抗性基因来自于,它的氨苄青霉素抗性基因来自于。
pMBl;
pSCl01;
pSF2124(R质粒)
13、DNA重组连接的方法大致分为四种:
(1)_________________
(2)_______________(3)_____________(4)_______________________。
(1)黏性末端连接;
(2)平末端连接;
(3)同聚物接尾连接;
(4)接头连接法
14、差示杂交(differentialhybridization)技术需要__________________________。
两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因
16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。
基因组DNA克隆;
基因组DNA文库
17、根据Northern杂交的结果可以说明:
_____________________________。
外源基因是否进行了转录
18、在________________技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。
Southern印迹
19、可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有____________和_______的活性。
5’3’合成酶;
3’5’外切核酸酶
20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素:
(1)_______________
(2)__________________(3)_________________。
(1)克隆的是完整的基因;
(2)使用的是表达载体;
(3)不含内含子
21、放射免疫筛选的原理基于以下三点:
(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;
(2)同一个抗原可以同几种抗体结合;
(3)抗体能够被标记
22、黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自、COS位点序列来自,最大的克隆片段达到 kb。
质粒;
噬菌体;
45
23、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自_______,第二、三两个字母取自_________,第四个字母则用___________表示。
属名的第一个字母;
种名的前两个字母;
株名
24、第一个分离的限制性内切核酸酶是___________;
而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
EcoK;
EcoRl
25、切口移位(nicktranslation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
DNA聚合酶I:
5'
一3'
外切核酸酶;
合成酶
26、就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:
_______________、_____________、______________。
另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
复制区:
含有复制起点;
选择标记:
主要是抗性基因;
克隆位点:
便于外源DNA的插入
27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过
和两种质粒改造而来。
它的复制子来自,Amp抗性基因则是来自。
pBR322和M13;
转座子
28、噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:
一是;
二是。
它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;
对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别:
(1)__________________________________________________________________
(2)_________________________________________________________________。
(1)印迹的对象不同:
Northern是RNA,Southern是DNA;
(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件
30、限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。
31、II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。
它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。
32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性(RFLP)。
33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。
0C;
42C
34、野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:
(1)
(2)(3)。
(1)分子量大,
(2)酶的多切点,(3)无选择标记
35、形成平末端的方法有:
用产生平末端的限制酶切,用S1核酸酶切除粘末端,用DNA聚合酶填平粘末端。
36、回收DNA片段时,在确定DNA条带位置时,应使用长波长紫外灯,以最大限度减少对DNA的照射损伤。
37、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型,m-表示修饰缺陷型,rec-表示重组缺陷型。
38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时,DNA以DNA-Ca2+复合物形式吸附于细胞表面。
39、TaqDNA聚合酶具有,缺乏因此无。
5‘→3‘聚合酶活性,3’→5‘外切酶活性,校正功能
40、PCR循环次数一般设定为,过多的循环次数会导致的出现。
25-30次,PCR反应“平台效应”。
41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端,则可以用__________进行3’末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端,可以用__________________进行3’末端标记。
Klenow酶填补的方法;
T4DNA聚合酶
42、限制酶是一类专门切割DNA的酶,它能特异性识别切割双链DNA。
43、需要部分酶切时可采取的方法有:
减少酶的用量;
缩短反应时间;
增大反应体积。
45、重组DNA技术的基本过程:
①目的基因的制备;
②载体的选择和制备;
③DNA分子的体外连接;
④将重组DNA导入宿主细胞;
⑤重组体的筛选和鉴定;
⑥重组体的扩增、表达和其他研究。
46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:
可以扩增质粒DNA;
抑制了菌体的数量,有利于裂解。
48、II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。
50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型,m-表示修饰缺陷型,rec-表示重组缺陷型。
52、核酸的体外标记法分为和。
化学法;
酶法
53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。
125I;
光敏生物素标记。
54、影响核酸分子杂交的因素有:
(1)核酸分子的浓度与长度;
(2)温度;
(3)离子强度;
(4)甲酰胺;
(5)核酸分子的复杂性;
(6)非特异性杂交反应等。
三、选择题(20%)
1、下列有关基因工程技术的叙述,正确的是(
)C
A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体
B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
2、下列不属于获取目的基因的方法是(
)B
A.“鸟枪法” B.转录法 C.反转录法 D.根据已知氨基酸序列合成法
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- 工专 基因工程 复习题