乳腺癌前哨淋巴结活检及其微转移检测的临床意义Word文档格式.docx
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免疫组织化学;
RT-PCR;
CK19;
乳腺癌
ClinicalValueofSentinelLymphNodeBiopsyandDetectionofMicrometastasisin
Abstract:
【Objective】Toinvestigatethepossibilitythatmethylenebluebeingusedonsentinellymphnodebiopsy(SLNB)inbreastcancerandthevalueofhematoxylinandeosinstaining(HEstaining),immunohistochemistry(IHC)andRT-PCRinjudgingmicrometastasisinsentinellymphnode(SLN).【Methods】Sixty-sixpatientswithbreastcancerwereinjectedmethylenebluetodetecttheaxillarySLN.TheSLNandaxillarylymphnodewereexaminedwithHEstaining.Random40caseswereevaluatedwithIHCexaminationofcytokine19(CK19)andRT-PCR.Theaccuracy,sensitivity,andfalse-negativeratioofHEstaining,IHCexaminationandRT-PCRwerecomparedtoseeiftheyhadanydiscrepancy.【Result】SLNweresuccessfullyidentifiedin63(%)of66patients.IHChadnodiscrepancycomparedwithRT-PCRintheaccuracy,sensitivity,andfalse-negativeratio,butithadobviousdiscrepancywithHEstaining.【Conclusion】MethylenebluecanbeusedontheSLNBinbreastcancersuccessfully.SincethesensitivityofHEstainingwaslow,combinedexaminationofIHCandRT-PCRwouldevaluatethemicrometastasismoreeffectively,raisetheefficiencyofestimateofmetastasisinSLN,andreducethefalse-negativeratio.
Keywords:
sentinellymphnodebiopsy;
immunohistochemistry;
RT-PCR;
cytokine19;
breastcancer
目前的研究证实,对腋窝淋巴结转移阴性的乳腺癌患者行腋窝淋巴结清扫,并不能提高其总体生存率和延长无病生存期[1],其术后的并发症也一直是临床外科治疗的一大难题。
近年来,通过前哨淋巴结活检替代ALND来评价早期乳腺癌的腋窝淋巴结状况,从而使部分早期患者免行ALND,避免了其并发症。
但常规病理在检测微转移灶方面相当困难,甚至可能漏诊,从而导致错误治疗决策。
这一直是制约SLNB临床应用的重要原因。
本研究在HE染色基础上,对其中40例联合应用免疫组织化学染色及逆转录聚合酶链反应(retro-polymerasechainreaction,RT-PCR)方法检测SLN中CK19的表达,评价其对预测腋窝淋巴结转移准确性及其临床意义。
1材料与方法
标本
选取2005年6月至2006年10月在本科室住院的乳腺癌患者66例,行SLN活检。
66例患者平均年龄27~65岁。
其中Ⅰ期40例,Ⅱ期26例。
病理类型:
浸润性导管癌30例,浸润性小叶癌13例,单纯癌15例,其它类型8例。
术式:
保乳术6例,改良根治术60例,术前均未行化疗。
并对其中40例的SLN同时进行3种方法检测。
方法
SLN的定位和取材66例患者经穿刺或术中切除乳腺肿块快速活检确诊后,术中将1%美蓝分4点注射于乳晕下或肿瘤周围的皮下组织,按摩注射部位5~10min,向乳腺尾部用电刀解剖寻找蓝染的淋巴管,沿蓝染淋巴管解剖鉴别蓝染的淋巴结即为SLN,共识别成功63例。
切除SLN后,与随后清扫的腋窝ALN一起送常规病理检查。
随机选取40例SLN,每个SLN均从中间剖开,一半用于常规HE及IHC染色,另一半置–80℃冻存,用于RT-PCR检测。
整个过程严格避免上皮细胞的交叉污染。
病理学和免疫组织化学检查对所有SLN及ALN均行常规HE染色检查。
其中40例SLN进一步行免疫组织化学染色。
免疫组织化学染色采用SP法。
抗人细胞角蛋白单克隆抗体CK19染色试剂盒,DAB显色试剂盒等均购自福州迈新生物技术公司,染色步骤按试剂盒说明书进行,每批染色均设立阳性对照和阴性对照。
光镜下见细胞膜及细胞质呈棕黄色颗粒判定为阳性染色。
参照文献,在显微镜下测量淋巴结内癌细胞巢直径2mm者判定为“转移”,直径~2mm者为“微转移”,直径 mm者为“孤立肿瘤细胞群”。
应用RT-PCR检测SLN中CK19mRNA的表达SLN中RNA提取、cDNA合成、PCR试剂均由中山大学达安基因股份有限公司提供,实验方法参考试剂说明书。
CK19的上游引物为5′-CTGAGTGACATGCGAAGCCAATA-3′,下游引物为5′-ATCTTCCTGTCCCTCGAGCA-3′。
cDNA模板对照:
β2微球蛋白的cDNA;
阳性对照:
乳腺癌细胞系MCF-7的cDNA;
阴性对照:
胃肠道的良性病变淋巴结的cDNA;
假基因扩增对照:
乳腺癌细胞系MCF-7的基因组DNA,其中1枚者31例,2枚者19例,3枚者9例,3枚者4例;
NSLN共切除726枚,每例8~24枚,平均12枚。
未探测到SLN的3例肿瘤分别位于乳腺内上象限。
病理学观察
SLN的HE结果与IHC、RT-PCR检测结果比较;
在40例中HE检测SLN转移阳性9例,阴性31例,假阴性2例;
ALN转移阳性11例,阴性29例。
IHC法除证实其中9例外,对HE染色阴性31例SLN行间距为100?
滋m的6~8个层切片HE及IHC染色又发现10例微转移灶;
RT-PCR法除证实其中9例外,又发现11例微转移灶;
两例SLNHE检测假阴性者,经IHC、RT-PCRCK19检测均为阳性,故可判定为假阴性。
3种检测SLN转移阳性率中,HE分别与IHC和RT-PCR比较差异有显着性,而IHC与RT-PCR两组间比较差异无显着性。
3种检测对腋窝淋巴结转移预测的敏感度、准确率、假阴性率比较,经统计学处理,HE分别与IHC和RT-PCR比较差异有显着性;
而IHC与RT-PCR比较差异无显着性。
3讨论
对乳腺癌来说,前哨淋巴结是乳腺癌细胞转移的第一站淋巴结,其是否存在转移,可预测区域淋巴结的状况。
前哨淋巴结活检术是由Cabanas于1977年首次报道,其后被Alex等用γ探头示踪法以及Giuliano等用染料示踪法用于乳腺癌。
随后,乳腺癌SLNB的研究在国际上广泛开展,取得了很大的进展。
近年来国内外的研究显示,乳腺癌SLNB能够准确评估区域淋巴结状态,在一定程度上可替代传统的腋窝淋巴结清扫术,避免ALND带来的后遗症。
意大利米兰SNB185试验提供了SLNB与腋窝淋巴结清扫术比较的结果,证实SLN阴性患者SLNB可以安全替代腋窝淋巴结清扫术,同样具有较低的复发率。
因此,乳腺癌SLNB取代ALND并不是减弱外科治疗作用,而是向更合理的方向发展。
目前公认乳腺癌是全身性恶性疾病,在早期即可发生血行播散,影响乳腺癌预后的主要原因是远处的转移。
而淋巴结微转移预示着可能出现或已经发生了远处转移。
临床发现,仍有近30%腋淋巴结转移阴性患者于术后5年内出现复发、转移而导致死亡。
其主要原因是淋巴结、骨髓及血液中微转移灶的存在。
因此,早期发现淋巴结微转移有着重要的意义。
检测乳腺癌患者微转移,是预测乳腺癌患者无瘤生存率及长期生存率的重要指标。
乳腺癌微转移是指常规病理学检查检测不到的存在于患者淋巴结、血液及骨髓等体内的微小转移灶。
它常以单个细胞或微小细胞团的形式存在,并在一定的条件下分裂增殖成巨转移灶。
大量研究表明,腋淋巴结转移与乳腺癌预后有直接关系,但常规病理学检查阴性者并不完全表明腋淋巴结无转移。
相对于HE染色而言,连续切片、免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术能提高对SLN微小转移癌的检出率[9,10]。
细胞角蛋白19(Cytokeratin,CK19)是一种针对上皮细胞的单抗,是上皮性细胞的标志基因,仅在正常乳腺细胞和乳腺癌细胞中表达,而不在淋巴细胞、骨骼和外周血中表达,可作为乳腺癌在淋巴结、骨骼和外周血等间叶组织转移的标志物[11]。
因此,如果在SLN中检测到CK-19表达则表明有乳腺癌的微转移。
RT-PCR技术是在分子水平上检测CK-19,是目前乳腺癌SLN微转移的检测中最敏感和特异的方法。
Pendas等[12]对478例乳腺癌进行前哨淋巴结图谱分析研究,其中385例HE染色检查阴性者中,以CK19为标志物经免疫组化法再次检测,有41例(%)发现转移癌细胞,从而使这部分病例的临床病理分期由Ⅰ期提高到Ⅱ期。
Choi等[13]对行SLN活检术的81例乳腺癌进行复查,发现常规HE染色阳性15例(%),经免疫组化法再次检测,则使阳性数增至23例(%)。
本组40例SLN常规HE染色阳性9例(%),经免疫组化法再次检测,则使阳性数增至19例(%),而RT-PCR检测则增至20例(50%)。
可见常规病理学方法在SLN检测上并不可靠,故在SLNB中,应强调对SLN微转移灶的检测。
目前临床上进行淋巴结的病理检查通常把淋巴结一分为二,取中间1~2个层面进行常规HE染色检查,可基本为临床提供较准确的病理分期资料,然而对微小转移灶很难避免假阴性问题,从而造成治疗决策上的失误,HE染色阴性的淋巴结微转移可达39%~40%[14]。
而本组微转移检出率达%。
文献报道,1~4个层面的切片加免疫组化检查可发现10%~15%单张HE染色阴性的淋巴结内有微小转移灶;
如果行全淋巴结连续切片加免疫组化检查,则发现微小转移灶的机率更大[15],但其工作
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- 乳腺癌 前哨 淋巴结 活检 及其 转移 检测 临床意义