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4)分子细胞生物学的兴起
(1)电镜标本固定技术的改进;
(2)人们认识到细胞的各种活动与大分子的结构变化和分子间的相互作用的关系。
第二章细胞生物学研究方法
1.透射电镜与普通光学显微镜的成像原理有何异同?
透射电镜与光学显微镜的成像原理基本一样,不同的是:
1)透射电镜用电子束作光源,用电磁场作透镜,
2)光学显微镜用可见光或紫外光作光源,以光学玻璃为透镜。
2.放射自显影技术的原理根据是什么?
为何常用3H、14C、32P标记物做放射自显影?
用60Co是否可以?
1)原理根据:
放射性同位素发射出的各种射线具有使照相乳胶中的溴化银晶体还原(感光)的性能。
利用放射性物质使照相乳胶膜感光,再经显影以显示该物质自身的存在部位.
2)用3H、14C、32P标记物做放射自显影原因:
(1)有机大分子均含有碳、氢原子,DNA和RNA等物质中存在磷元素,
(2)且14C和3H均为弱β放射性同位素,半衰期长。
3)不可以用60Co,原因:
有机大分子中Co原子存在不普遍,且微量
3.核型制作技术的主要步骤有哪些?
1)首先用秋水仙素破坏纺锤丝的形成,使中期染色体停留在赤道面处;
2)然后用低渗法将细胞胀破,使细胞的染色体铺展到载片上;
3)最后将染色体的显微图象剪裁排列即成。
4.何谓免疫荧光技术?
可自发荧光的细胞物质是否可在普通显微镜下看到荧光?
1)免疫荧光技术是将免疫学方法(抗体同特定抗原专一结合)与荧光标记技术相结合用来研究特异蛋白抗原在细胞内分布、对抗原进行定位测定的技术。
它主要包括荧光抗体的制备、标本的处理、免疫染色和观察记录等过程。
2)不能。
首先,荧光是因一定波长(能量)的光(一般为紫外光)照射到物体后瞬间产生的,作为普通显微镜光源的可见光,其能量不足以使物体产生荧光;
其次,所产生荧光的波长要比入射光的要长,即使可以激发出荧光,肉眼也看不到。
5.超离心技术的主要用途有哪些?
1)制备和纯化亚细胞成分和大分子,即制备样品;
2)分析和测定制剂中的大分子的种类和性质如浮力密度和分子量。
6.细胞融合有那几种方法?
病毒诱导与PEG的作用机制有何不同?
1)细胞融合的方法有四种:
病毒法、聚乙二醇(PEG)法、电激和激光法。
2)病毒诱导:
是先足够数量的紫外灭活的病毒颗粒黏附在细胞膜上起搭桥作用,使细胞黏着成堆,细胞紧密靠近,同时细胞膜发生了一定的变化,在37℃温浴条件下,粘结部位的细胞膜破坏,形成通道,细胞质流通并融合,病毒颗粒也随之进入细胞。
两个细胞合并,细胞发生融合;
聚乙二醇(PEG)法:
PEG使能改变各种细胞的末结构,使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,利用两细胞接口处双分子层质膜的相互亲何以彼此的表面张力作用,使细胞发生融合。
第三章细胞的基本概念
1、说明原核细胞与真核细胞的主要差别。
要点原核细胞真核细胞
细胞核无膜包围,称为拟核有双层膜包围
染色体形状
数目
组成
DNA序列环状DNA分子
一个基因连锁群
DNA裸露或结合少量蛋白质
无或很少重复序列核中的为线性DNA分子;
线粒体和叶绿体中的为环状DNA分子
两个或多个基因连锁群
核DNA同组蛋白结合;
线粒体和叶绿体中的DNA裸露
有重复序列
基因表达RNA和蛋白质在同一区间合成RNA在核中合成和加工;
蛋白质在细胞质中合成
细胞分裂二分或出芽有丝分裂或减数分裂
内膜无独立的内膜有,分化成细胞器
细胞骨架无普遍存在
呼吸作用和光合作用酶的分部质膜线粒体和叶绿体(植物)
核糖体70S(50S+30S)80S(60S+40S)
2、为什么说病毒不是细胞?
蛋白质感染子是病毒吗?
1)病毒不是细胞,原因是病毒缺少进行独立代谢的某些基因和机构,在细胞中的复制和装配是靠细胞的代谢活动来完成的,从而在单独存在时不能独立存活、自我繁殖,在细胞外环境中存在时没有生命活动。
因此病毒不是细胞,既不是生命,也不是有机体,只是具有部分生命特征的感染物。
2)蛋白质感染子不是病毒,病毒是由核酸(DNA或RNA)芯和蛋白质外壳所构成具有部分生命特征的感染物。
而蛋白质感染子不含核酸,它的增殖在是由于正常分子的构象发生转变造成的,这种构象异常的蛋白质分子成了致病因子,这不同于传统概念上的病毒的复制方式和传染途径,所以蛋白质感染子不是病毒。
3、酶是细胞中的主要催化剂,与无机催化剂相比它有哪些优越性?
1)反应高效性;
2)高度特异性;
3)最适pH和最适温度;
4)可调性;
5)需辅因子的结合。
4、RNA催化剂的发现有何重大意义?
否定了只有蛋白质才具有丝催化活性的传统观点,由于任何生命都要依赖于蛋白质的合成,RNA催化剂得发现对于弄清地球上生命起源的最初形式具有启示作用。
5、如何理解E.B.Wilson所说的”一切生物学问题的答案最终要到细胞中去寻找“。
1)细胞是一切生物体的最基本的结构和功能单位。
2)所谓生命实质上即是细胞属性的体现。
生物体的一切生命现象,如生长、发育、繁殖、遗传、分化、代谢和激应等都是细胞这个基本单位的活动体现。
3)生物科学,如生理学、解剖学、遗传学、免疫学、胚胎学、组织学、发育生物学、分子生物学等,其研究的最终目的都是要从细胞水平上来阐明各自研究领域中生命现象的机理。
4)现代生物学各个分支学科的交叉汇合是21世纪生命科学的发展趋势,也要求各个学科都要到细胞中去探索生命现象的奥秘。
5)鉴于细胞在生命界中所具有的独特属性,生物科学各分支学科若要研究各种生命现象的机理,都必须以细胞这个生物体的基本结构和功能单位为研究目标,从细胞中研究各自研究领域中生命现象的机理。
第四章质膜和细胞表面
1、膜的流动镶嵌模型是怎样形成的?
它在膜生物学研究中有什么开创意义?
1)形成的原因及前提:
(1)单位膜模型无法满意的解释许多膜属性,如膜结构不断地发生动态变化;
各种膜没有一成不变的统一性;
各种膜均具有各自的特定厚度,提取膜蛋白的难易程度不同;
各种膜的蛋白质与脂类的成份比率不同等。
(2)本世纪60年代,新技术的发明和应用,对质膜的认识越来越深入。
(3)利用冰冻蚀刻法显示出膜上有球形颗粒,
(4)用示踪法表明膜的结构形态在不断地发生变动。
在此基础上,S.J.Singer和G.L.Nicolson在1972年提出了膜的流动镶嵌模型(fluidmosaicmodel)。
2)意义:
流动镶嵌模型除了强调脂类分子与蛋白质分子的镶嵌关系外,还强调了膜的流动性,主张膜总是处于流动变化之中,脂类分子和蛋白质分子均可做侧向流动。
后来有许多实验结果支持了流动镶嵌模型的观点。
2、质膜在细胞生命活动中都有哪些重要作用?
1)细胞识别,血性抗原,酶
2)细胞连接,细胞间信号传递,细胞分化,协调代谢,电兴奋传导,
3)物质运输,与周围环境进行物质和能量的交换
4)形成运动细胞器
3、质膜的膜蛋白都有哪些类别?
各有何功能?
膜脂有哪几种?
1)膜蛋白根据功能的不同,可将分为四类:
运输蛋白,连接蛋白,受体蛋白和酶。
运输蛋白:
物质运输,与周围环境进行物质和能量的交换;
连接蛋白:
细胞连接;
受体蛋白:
细胞识别,信号传递;
酶:
具有催化活性。
2)膜脂:
膜脂主要为磷脂和胆固醇,磷脂主要包括有卵磷脂和脑磷脂(cephalin),鞘脂(带有一个氨基)和糖脂(结合有寡糖链)。
4、物质穿膜运输有哪几种方式?
它们的异同点。
穿膜运输:
直接进行穿膜转运的物质运输,又分为简单扩散、协助扩散和主动运输。
1)简单扩散:
顺物质电化学梯度,不需要膜运输蛋白,利用自身的电化学梯度势能,不耗细胞代谢能;
2)协助扩散:
顺物质电化学梯度,需要通道蛋白或载体蛋白,利用自身的电化学梯度势能,不耗细胞代谢能;
3)主动运输:
逆物质电化学梯度,需要载体蛋白,消耗细胞代谢能。
5、质膜在细胞吞排作用(cytosis)中起什么作用?
1)识别被内吞物质;
2)形成陷穴小泡;
3)包围细胞外物质,形成小泡;
脱离质膜,进入细胞内部;
4)同细胞质中的小泡融合,把其所含的物质派到细胞外。
6、何谓细胞外被?
它有哪些功能?
1)细胞外被是指动物细胞表面的由构成质膜的糖蛋白和糖脂伸出的寡糖链组成的厚约10~20nm的绒絮状结构。
2)功能:
(1)细胞识别;
(2)血型抗原;
(3)酶活性
7、细胞连接都有哪些类型?
各有何结构特点?
细胞连接按其功能分为:
封闭连接,锚定连接,通讯连接。
按结构可分为9种:
1)紧密连接(封闭小带),细胞质膜上,紧密连接蛋白(门蛋白)形成分支的链索条,与相邻的细胞质膜上的链索条对应结合,将细胞间隙封闭。
2)黏合连接(黏合带):
带状,环绕整个细胞;
黏合带处相邻细胞间有间隙,两侧的质膜上的钙黏蛋白相互粘合,内连肌动蛋白质丝束。
3)隔状连接:
与封闭连接相似,但连接蛋白排列规则,连接蛋白自己形成一个封闭,
4)点接触:
整连蛋白将肌动蛋白丝束与细胞外基质相连。
5)桥粒(粘合斑):
细胞质膜下由蛋白质构成一个细胞质斑,斑下与中间丝相连,并依赖钙黏蛋白与相邻细胞的粘合斑上的钙黏蛋白相连。
6)间隙连接:
细胞间由跨膜蛋白构成的通道,连接处有规则的微型管道,由相邻细胞各提供一半,每一半由6个跨膜蛋白构成,成为连接子。
7)胞间连丝由穿过细胞壁的质膜围成的细胞质通道,直径约20-40nm。
通道中由光面内质网特化而成的筒状结构,称为连丝小管(desmotubule),管的两端各与一个细胞中的内质网相连。
连丝小管与胞间连丝的质膜内衬之间,填充有一圈细胞质溶质(cytosol)
第五章细胞外基质
1、细胞外基质与细胞外被有何区别?
它们如何相互作用?
1)细胞外被是指动物细胞表面的由构成质膜的糖蛋白和糖脂伸出的寡糖链组成的厚约10~20nm的绒絮状结构,是细胞膜的一部分。
2)细胞外基质是存在细胞之间的非细胞性的物质,是由一些蛋白质和多糖大分子构成的精密有序的网络结构,是细胞的分泌物在细胞附近构成的精密结构,它不同于细胞外被之处是,通过与细胞质膜中的细胞外基质受体结合,同细胞建立了相互关系。
2、动物结缔组织中的细胞外基质都包括哪些成分?
各起何作用?
1)细胞外基质(EM)成分可表示如下:
多糖:
糖胺聚糖,蛋白聚糖
细胞外基质
纤维蛋白:
胶原,弹性蛋白,纤连蛋白,层粘连蛋白
2)作用:
细胞外基质可影响细胞的发育、极性和行为活动。
(1)糖胺聚糖(GAG)链构成的网络,形成了水化凝胶,各种蛋白质纤维埋藏于凝胶之中。
GAG多糖链带负电荷,同蛋白质共价结合形成蛋白聚糖。
(2)蛋白聚糖:
a.渗滤作用;
b.细胞表面的辅受体;
c.调节分泌蛋白的活性;
d.细胞间化学信号传递。
(3)胶原,弹性蛋白:
结构作用
(4)纤连蛋白,层粘连蛋白:
黏着作用
3、胶原纤维的装配过程都经过哪些步骤?
胶原纤维是经多步过程装配而成,包括胶原分子的合成、分泌和修饰等步骤。
1)内质网膜结合的核糖体上合成胶原分子的多肽链,最初合成的多肽链为前体肽链,称为前α链(pro-αchain)。
2)合成的前体肽链进入内质网腔,此前体链除在氨基端带有信号肽序列外,在氨基端和羧基端尚带有称为前肽(propeptides)的氨基酸序列。
在内质网腔中,前肽链中的脯氨酸和赖氨酸残基分别被羟化为羟脯氨酸和羟赖氨酸。
每一条前α链与其它两条前α链通过由羟基形成的氢键相互结合,构成了3股螺旋的前胶原(procollagen)分子。
此分子的装配起始于内质网,后经高尔基体装配完成,被包装到分泌泡中,分泌到细胞外。
3)前胶原被分泌到细胞外之后,前肽序列被专一的蛋白质水解酶切除,前胶原转变成了胶原分子。
4)胶原分子在细胞外又进一步装配成了胶原原纤维,最后后者又装配成了胶原纤维。
原纤维一旦形成,胶原分子便通过在赖氨酸间的共价结合,加固了原纤维的结构。
这种结合要依赖于原纤维结合胶原(fibril-associatedcollagen)(如IX型和II型胶原分子)的参与。
4、纤连蛋白分子有哪些结构特点?
如何发挥作用?
1)分子是由两个亚基组成的二聚体,在靠近羧基端有一对二硫键将两个亚基连在一起,使两个亚基排成“V”字形。
亚基多肽链折叠成5-6个棒状和球形功能区,各功能区分别可同特定的分子或细胞发生转移结合,功能区之间的连接部位可折屈,对蛋白酶敏感。
2)多肽链含有三种重复序列,即I、II、III型组件,功能区即是由这三种组件重复组合而成。
在III型重复中含有一专一的三肽序列,-Arg-Gly-Asp-(RGD),此RGD序列可被细胞表面基质受体中的整联蛋白(integrin)所识别,从而同细胞结合,促使细胞同基质结合。
促进细胞迁移,对细胞的迁移有导向作用
第六章内质网和核糖体
1.在细胞中,细胞质基质的存在有何生物学意义?
1)中间代谢反应的进行
2)细胞的形态与运动、胞内物质运输以及各种大分子的定位;
3)蛋白质的修饰与选择性降解;
4)维持细胞内环境(pH、离子环境)的稳定性。
2.内膜系统包括哪几部分?
单列为一个系统的依据是什么?
1)它主要包括核膜、内质网和高尔基复合体三大部分,质膜、溶酶体和分泌泡均可看作是它的衍生物。
线粒体和叶绿体不属于内膜系统。
2)依据:
核膜、内质网和高尔基复合体结构和功能上是连续的,在形成上具有一定的序列相关性;
内膜之间通过出芽和融合的方式进行交流。
3.糙面内质网和光面内质网在细胞的生命活动中各自承担了什么样的角色?
1)糙面内质网:
(1)蛋白质的合成;
(2)合成蛋白质的修饰与加工;
(3)膜的生成;
(4)物质的运输;
(5)贮积钙离子。
2)光面内质网:
(1)脂类的合成;
(2)解毒作用;
(3)糖原代谢。
4.糙面内质网上所进行的糖基化的机制如何?
其添加的寡糖链又有什么特点?
1)糖基化的机制
(1)Asn;
N-连接;
(2)寡糖链已预先合成;
(3)以焦磷酸键连在跨膜的磷酸多萜醇上;
(4)新生肽链一旦出现Asn残基,糖基转移酶以焦磷酸键的能量将寡糖链从磷酸多萜醇上转移至多肽链的Asn残基上;
2)添加的寡糖链特点:
寡糖链可分为两部分,一部分称为核心区,该区在各种寡糖链中均是相同的,且与天冬酰胺残基直接相连的第一个糖总是N-乙酰葡萄糖胺;
另一部分称为末端区,该区在各种寡糖链中是不同的;
第七章高尔基复合体与细胞分泌
1.根据高尔基复合体的结构和功能,说明高尔基复合体在内膜系统中所承担的角色及其地位。
1)结构:
高尔基复合体由成摞的潴泡叠置而成。
。
潴泡的边缘部分连接有许多大小不等的表面光滑的小管网,其周围还存在有衣被小泡和无被小泡。
一个成摞存在的潴泡又称为分散高尔基体,由5~8层潴泡组成,构成了高尔基复合体的主体结构。
分散高尔基体在结构和生化成分上具有极性,和内质网临近的近核一侧,潴泡弯曲呈凸面,称为形成面或顺面;
在远核的一侧,渚泡呈凹面,称为成熟面或反面。
从顺面到反面,潴泡膜的厚度逐渐增大。
2)功能:
(1)形成和包装分泌物;
(2)蛋白质和脂类的糖基化;
(3)蛋白质的加工改造;
(4)细胞内的膜泡运输;
(5)膜的转化。
高尔基复合体在内膜系统中处于中介地位,它在对细胞内合成物质的修饰和改造中具有重作用。
许多重要大分子的运输和分泌都要通过高尔基复合体。
2.在高尔基复合体上所进行的糖基化与内质网有何不同?
蛋白质的糖基化有何生物学意义?
1)不同:
在糙面内质网上进行的糖基化修饰大多为N-连接的糖基化,寡糖链与天冬酰胺的氨基基团相连,在内质网上添加上的寡糖链可分为两部分,一部分称为核心区,该区在各种寡糖链中均是相同的,且与天冬酰胺残基直接相连的第一个糖总是N-乙酰葡萄糖胺;
另一部分称为末端区,该区在各种寡糖链中是不同的。
在高尔基复合体上进行的糖基化主要是O-连接的糖基化,寡糖链与丝氨酸、苏氨酸和羟赖氨酸的羟基基团相,加工修饰只发生在寡糖链的末端区,核心区保持不变。
2)蛋白质的糖基化意义:
(1)保护蛋白质不被水解酶降解;
(2)起运输信号作用,引导蛋白质被包装到运输泡中,抵达目的细胞器;
(3)在细胞表面形成糖萼,其细胞识别和保护质膜的作用;
(4)影响蛋白质折叠成正确地构象,增大蛋白的稳定性。
3.高尔基复合体在蛋白质的加工、分拣、膜泡运输和膜转化中各承担了什么样的角色?
其间的关系又如何?
1)高尔基复合体是蛋白质的加工、分拣的细胞器之一,与内膜系统的其它成分共同参与了膜泡运输和膜转化。
2)内质网的特定区域形成的有被小泡,将所合成的正确折叠和正确组装的蛋白质运往高尔基复合体进行加工、修饰,根据蛋白质所带有的分拣信号,反面高尔基网络对蛋白质分拣,将不同命运的蛋白质分拣开来,并经膜泡运输将其运输至其靶部位。
在膜泡运输过程中完成了膜的转化。
4.高尔基复合体各部潴泡在组化反应上的差异,说明了一个什么问题?
与其生物学功能之间又有什么关系?
1)利用专一性标记酶和组织化学方法的研究结果表明,高尔基池中含有许多加工寡糖链的酶,包括甘露糖转移酶、N-乙酰半乳糖转移酶、N-乙酰葡萄糖胺转移酶、岩藻糖转移酶、半乳糖转移酶以及唾液酸转移酶;
处于不同部位的高尔基池所含有的糖基转移酶的种类不同:
(1)形成面的池含有使甘露糖和N-乙酰半乳糖糖基化酶,
(2)中部区域的池含有向寡糖链上转接N-乙酰葡萄糖胺的酶,
(3)成熟面的池则含有向寡糖链上移接唾液酸、半乳糖和岩藻糖的酶。
2)这些糖基转移酶的作用是把寡糖转移到蛋白质上,形成糖蛋白,从而可以看出,高尔基复合体的各部潴泡在功能上高度分区化,处于不同部位的高尔基潴泡所含有的加工寡糖链的糖基转移酶的种类不同,因此,从形成面到成熟面的潴泡是按照一定顺序对寡糖链进行加工的。
先参与对寡糖链加工的酶位置偏向于顺面,而后参与加工的酶偏向于反面。
这种顺序性加工可能有利于糖蛋白的分拣,从而使高尔基复合体能对不同的糖蛋白进行分别包装,使其具有不同的命运。
第八章溶酶体和微体
1.溶酶体一旦发生异常,会引起什么样的疾病?
各对机体又有什么影响呢?
1)贮积病溶酶体酶缺失和异常时,某些物质不能被消化降解,而遗留在溶酶体内,便会影响细胞的代谢功能,引发疾病(贮积病),甚至导致机体的死亡
2)类风湿关节炎(rheumatoidarthritis)该种病人的溶酶体膜的脆性增加,溶酶体酶被释放到关节处的细胞间质中,使骨组织受到侵蚀,引起炎症。
2.微体有哪些共同特点?
与溶酶体有何异同点?
1)共同特点:
(1)由一层单位膜膜包围;
(2)为一类异质性细胞器,且常常成群分布在内质网膜的附近;
(3)微体为在一定条件下可以被诱导而进行增殖的一种细胞器。
2)与溶酶体异同点:
(1)相同点:
由一层单位膜膜包围;
为一类异质性细胞器。
(2)不同点:
特征溶酶体微体
形态大小直径0.2~0.5μm,无酶晶体直径0.15~0.25μm,有酶晶体
酶的种类酸性水解酶氧化酶类
pH值~5~7
需氧与否不需要需要
功能细胞内消化主要与糖异生有关
发生酶在RER上合成,经高尔基复合体出芽形成酶在细胞质基质中合成,经分裂和组装形成
标志酶酸性水解酶过氧化氢酶
3.既然线粒体是进行细胞内氧化作用的重要细胞器,那么过氧化物酶体的存在又有什么意义
呢?
在进化过程中,当真核细胞进入需氧生活阶段时,便产生了过氧化物酶体这种细胞器。
后来,随着线粒体的出现,线粒体便开始占据进行氧化作用的主导地位,过氧化物酶体也就开始逐渐退化,其所含有酶的种类和数量减少,甚至在某些细胞类型中完全消失。
但由于其仍具有一定功能,故而在许多细胞类型中被保留下来。
细胞中过氧化物酶体的功能:
1)是细胞内糖、脂和氮的重要代谢部位。
2)参与了长链脂肪酸的降解,乙醚磷脂和胆汁酸的生物合成,胆固醇、多胺、草酸盐、植烷酸、二羧酸以及几种药物等的代谢转换。
3)在植物细胞中,过氧化物酶体是乙醇酸氧化的场所。
第九章细胞骨架与细胞运动
1.细胞骨架在细胞中仅仅起支持和形状维持功能吗?
谈谈你对细胞骨架功能的认识。
1)不是
2)细胞骨架广义上包括细胞外基质、细胞核骨架、细胞膜骨架和细胞外基质四个部分,狭义上上细胞骨架即为细胞质骨架,包括微管、纤丝和微梁网架(microtrabecularlattice)三大类纤维状成分,纤丝又可分为微丝(microfilament)中间丝(intermediatefilament)和粗丝(thickfilament)三类。
3)从狭义上讲细胞质骨架的功能也不仅仅起支持和形状维持功能,还有:
(1)维持保持内膜性细胞器的空间定位分布;
(2)胞内运输;
(3)与细胞运动有关;
(4)形成纺锤体,协助染色体运动;
(5)胞质环流;
(6)参与桥粒与半桥粒的
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