基于苏州健雄职业技术学院食堂卫生纸中菌落总数的测定论文.docx
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基于苏州健雄职业技术学院食堂卫生纸中菌落总数的测定论文
毕业设计(论文)
题目:
基于苏州健雄职业技术学院食堂卫生纸
的菌落总数含量测定
学生姓名:
学号:
院(系):
专业班级:
指导教师:
职称:
2017年12月
中文题目:
基于苏州健雄职业技术学院食堂卫生纸的菌落总数含量测定
外文题目:
ABRIEFDISCUSSIONONTHETOTALAMOUNTOFCOLONYTOILETPAPEROFSUZHOUJIANXIONGXOCATIONALTECHNICALCOLLEGE
目录
前言…………………………………………………………1
1实验仪器、材料及方法……………………………………2
1.1实验仪器与材料…………………………………………2
1.1.1实验仪器………………………………………………2
1.1.2实验材料………………………………………………2
1.1.3实验试剂…………………………………………………2
1.1.4实验样品…………………………………………………2
1.2实验方法…………………………………………………3
1.2.1试剂配置………………………………………………3
1.2.2取材前的准备工作……………………………………3
1.2.3卫生纸的取材、处理和菌落培养………………………4
1.2.4实验步骤………………………………………………5
1.3菌落计数与报告…………………………………6
1.3.1菌落计数方法……………………………………………6
1.3.2菌落计数数据选择方法…………………………………6
1.3.3菌落计数稀释度的选择…………………………………6
2结果………………………………………………7
2.1菌落计数依据…………………………………………7
2.2菌落计数数据记录及平板展示………………………7
3讨论…………………………………………………8
3.1菌落测定原理……………………………………………8
3.2空白实验分析…………………………………………8
3.3结果分析………………………………………………8
4结论………………………………………………………9
致谢…………………………………………………………10
参考文献……………………………………………………11
摘要
随着改革开放的发展,在日常生活中,人们对卫生纸的需求量是很可观的,但质量令人担忧,引起广大消费者忧虑和担心。
我们选取了苏州健雄职业技术学院两座食堂的卫生纸为样品,通过平板计数的方法来检验两座食堂中卫生纸微生物菌落总数的含量,根据国家标准GB20810-2006《卫生纸(含卫生纸原纸)》[1]中的实验步骤进行操作。
按照国家标准规定.在有氧状态.37℃培养48h,得至细菌菌落总数。
通过实验检测发现,北食堂1楼卫生纸中菌落总数含量为336CFU/g,南食堂1楼卫生纸中菌落总数含量为496CFU/g。
其中,北食堂1楼的卫生纸品牌为春竹,为优等品;南食堂1楼的卫生纸品牌为凝点,为合格品。
关键词:
卫生纸;微生物;菌落总数;国家标准
Abstract
Alongwiththedevelopmentofthereformandopeningup,indailylife,people'sdemandtotoiletpaperisverysignificant,butthequalityconcern,causedthegeneralconsumeranxietyandworrywechosesuzhouinstituteoftechnologyofprofessionofthehealthymaletwodiningroomtoiletpaperforsample,byplatecountmethodtotesttwodiningroomtoiletpaperinthecontentoftotalmicrobialcolony,accordingtothenationalstandardGB20810-2006toiletpaper(includingtoiletpaperbasepaper)[1]theexperimentstepsinoperationinaccordancewiththestandardregulationsofthestate.Inaerobiccondition.37train48h,tothetotalnumberofbacterialcolonies,measuredbytheexperimentofnorthcanteencolonytotalcontentinthe1stfloortoiletpaperof336cfu/g,1/f,souththecanteencolonytotalcontentinthetoiletpaperof496cfu/g,1/f,northcanteenoftoiletpaperbrandasthespringbamboo,asaclassyarticle;Thetoiletpaperbrandonthe1stfloorofthesouthdininghallisthefreezingpointforthequalityproducts
Keywords:
Toiletpaper.Microbes;Totalnumberofcolonies;Nationalstandard
前言
微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。
在人类疾病中有50%是由病毒引起。
世界卫生组织公布资料显示:
传染病的发病率和病死率在所有疾病中占据第一位。
微生物导致人类疾病的历史,也就是人类与之不断斗争的历史。
在疾病的预防和治疗方面,人类取得了长足的进展,但是新现和再现的微生物感染还是不断发生,像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。
在日常生活中,人们对卫生纸的需求量是很可观的,使用量巨大,但质量直接关系着人类的健康,引起广大消费者忧虑和担心。
菌落总数(coloniesmumber),指的是特定的条件下(例如需氧情况、营养条件、PH、培养温度和时间等)每克(每毫升)所检测物所生长出来的细菌茵落总数。
这是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量的重要依据,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣,还可以用来预测食品的存放期限。
食品中细菌数量越少.食品存放的时间就越长.反之就越短。
但是菌落总数井不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数、需氧菌数。
我们选取了苏州健雄职业技术学院两座食堂的卫生纸为样品,本实验采用平板计数的方法.根据国家标准GB20810-2006《卫生纸(含卫生纸原纸)》[1]中的实验步骤进行操作。
按照国家标准规定.在有氧状态.37℃培养48h,得至细菌菌落总数。
部分不满足它们生理要求的细菌,难以繁殖生长,放不在其中。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数。
本次试验对卫生纸采集样品2份,分别来自南食堂1楼和北食堂1楼,对其中微生物菌落总数做了测定。
1实验仪器、材料及方法
1.1实验仪器与材料
1.1.1实验仪器
使用拍击式均质器进行样品击碎、混匀,利用单子天平准确称量卫生纸的用量以及准确称量培养基进行制备,通过立式压力蒸汽灭菌锅进行制备无菌水以及试管、锥形瓶等玻璃仪器的灭菌工作,利用无菌培养皿进行细胞的倒平板技术,通过HH数显恒温水浴锅进行培养基的保温,利用智能生化培养箱进行细胞的培养,利用移液枪进行稀释液的移取。
表1-1实验仪器设备
仪器名称
规格及型号
生产厂家
拍击式均质器
DL-1-15
上海汉诺仪器有限公司
电子天平
jY-302
上海浦青计量仪器有限公司
力式压力蒸汽灭菌锅
BXM-392
上海博远实业有限公司医疗设备厂
培养皿
120mm
上海五一玻璃厂
台式电炉
JB25-C
天津豢斯特仪器有限公司
HH数显恒温水浴锅
RCT
上海浦青计量仪器有限公司
双人双面净化工作台
SW-CJ-2F
慧科电子有限公司
智能生化培养箱
SHP-160FE
上海三发科学仪器有限公司
振荡器
TH2-82A
上海浦青计量仪器有限公司
移液枪
100-1000μL
上海浦青计量仪器有限公司
1.1.2实验材料
75%的酒精棉球,纱布,报纸,250mL锥形瓶:
4个,PH试纸,10mL吸量管,试管4根,9个120mm细胞培养皿个表面皿,烧杯、移液枪、蒸馏水
1.1.3实验试剂
表1-2PCA琼脂培养基溶液
原料
生产厂家
牛肉膏
国药集团化学有限公司
蛋白胨
国药集团化学有限公司
氯化钠
国药集团化学有限公司
琼脂
国药集团化学有限公司
蒸馏水
自配
1.1.4实验样品
卫生纸:
南食堂1楼(春竹)为合格品、北食堂1楼(凝点)为优质品
主要成分:
原木浆
1.2实验方法
1.2.1试剂配置
1.2.1.1PCA琼脂培养基的配制
用电子天平称取1g胰蛋白胨,0.3g牛肉膏、0.5g葡葡糖、3g琼脂,溶于100mL蒸馏水中。
放在电炉上进行加热,待微沸取下用PH试纸测其PH值并用NaOH调其PH在7.0左右,移到250mL锥形瓶中,放入高压蒸汽灭菌锅灭菌30min。
1.2.1.2生理盐水的配制
用电子天平称取NaCl 2.125g,溶入到200mL 蒸馏水中,并移至250mL锥形瓶中,放入高压蒸汽灭菌锅灭菌。
1.2.1.375%的酒精溶液
量取98%的酒精溶液75mL.加水稀释至100mL
1.2.2 取材前的准备工作
1) 水浴锅进行消毒处理(提前一天或当天)
2) 将准备好的6个培养皿洗净用报纸好,试管洗净用棉花塞住用报纸包好以及装有225mL生理盐水的锥形瓶,封好进行灭菌
3) 按照5S要求整理实验室并保持
4) 对于手和超净工作台进行酒精消毒
5) 将超净台中的紫外灯打开灭菌15min,再用鼓风机吹15~20min,
6) 将灭菌后的仪器和试剂放入超净台
7) 将配置好的营养琼脂放在水浴锅中恒温46oC
1.2.3 卫生纸的取材、处理和菌落培养
1.2.3.1样品前处理
将两种不同品牌的卫生纸在超净工作台中用酒精棉消毒外包装以及取材的镊子,并对手部进行酒精消毒,充分保证在无菌情况下进行操作。
1.2.3.2样品稀释
无菌称取样品各3g,加入到盛有100mL生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1-2min,制成1:
10的样品匀液,即10-1稀释液。
用无菌吸管或微量移液器吸取1:
10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注入盛有9mL稀释液的无菌试管中震摇试管使其混合均匀,制成10-2样品稀释液
在进行10倍递增稀释时,吸取1mL10-1、10-2稀释液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿,同时,吸取1mL无菌生理盐水空白液加入平皿内作空白对照,根据卫生纸的菌落总数为≦500cfu/mL,所以做两组稀释梯度。
及时将15-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
1.2.3.2培养
待琼脂凝固后,将平板翻转,放入(36±1)℃恒温培养箱培养(48±2)h
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖-薄层琼指培养基(4mL),凝固后翻转平板,然后按上述步骤操作。
两天后取出,用肉眼观察。
1.2.4 实验步骤
1)制备PCA琼脂培养基以及生理盐水,并将所有玻璃器具放入高压灭菌锅中进行灭菌
2)用酒精棉球将超净工作台进行消毒并打开紫外灯进行灭菌
3)拿出准备的样品于超净工作台中用灭菌好的镊子打开。
4)称取样品各3g于100mL的生理盐水中,拍打均质后制成10-1稀释液
5)用移液枪移取1mL10-1稀释液于装有9mL生理盐水的无菌试管中,制成10-2稀释液。
6)吸取两个梯度的稀释液各1mL于平皿中,每个稀释度做两个平皿,用记号笔做好标记并做一组空白对照实验
7)倒平板,分别向上述9个培养皿中加入20mL培养基。
加入完成后,轻轻摇晃.使其均匀,放于工作台中凝固。
8)待凝固后倒置放入37℃的生化培养箱中,培养
9)48h后取出,进行菌落计算
1.3菌落计数与报告
1.3.1 菌落计数方法
作平皿菌落计数时,从恒温培养箱中,取出培养平皿。
用肉眼观察,必要时用放大镜检查,三个人同时数平皿,减小误差。
数出各平皿的菌落总数后,求出同稀释度的各平皿平均菌落数。
到达规定培养时间,应立即计数。
菌落计数以菌落形成单位(colonyformingunits,cfu)表示[2]。
如果不能立即计数,应将平板放置于0-4℃,但不要超过24h。
1.3.2菌落计数数据选择方法
①选取菌落数在30-300之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落计数。
低于30的平板记录具体菌落数,大于300的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
②其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
③当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
1.3.3菌落计数稀释度的选择
●应选取平均菌落数在30-300之间的稀释度报告。
●若所有稀释度均>300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
●若所有稀释度均<30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数进行报告。
●若所有稀释度均无菌落生长,则应按<1乘以最低稀释倍数进行报告。
●若所有稀释变均不在30-300之内,有的>300,有的又<30,则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
●菌落数在1-100时,按实有数字报告,如大于100时,则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算,为了缩短数字后面的零数,也可以10的指数表示。
2结果
2.1菌落计数依据
根据国家标准GB20810-2006《卫生纸(含卫生纸原纸)》规定卫生纸中微生物的菌落总数含量不能超出500CFU/g。
图2-1卫生纸和卫生纸原纸微生物指标
2.2菌落计数数据记录及平板展示
表2-1菌落生长数量
稀释度
春竹(优等品)
凝点(合格品)
10-1
编号1
336
496
编号2
402
480
10-2
编号1
243
377
编号2
305
342
空白对照
0
经检测南食堂1楼和北食堂1楼的卫生纸微生物含量符合要求
图2-2第一列为空白对照,第二列为春竹10-1、10-2,第三列为凝点10-1、10-2
3讨论
3.1菌落测定原理
菌落总数(coloniesnumber),指的是特定的条件下(例如需氧情况、营养条件、PH、培养温度和时间等)每克(每毫升)所检测物所生长出来的细菌菌落总数。
这是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量的重要依据,它反映食品在生产过程中是否符合:
卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价[3]。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣,还可以用来预测食品的存放期限。
食品中细菌数量越少,食存放的时间就越长,反之越短。
但是,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数、需氧菌数[4]。
3.2空白实验分析
本次实验我们小组做的很好,根据不同稀释度的4个平板,菌落生长的很均匀,以往做实验时空白对照板子有时也长了菌,跟这次成功的实验对比,总结的原因有下几种情况:
1、培养基有可能没有灭菌彻底,
2、做空白时灭菌水和生理盐水没分清
3、培养基配制可能有问题
4、无菌操作时如果手没有灭菌碰了培养皿内部边缘
5.平皿未灭菌彻底
6.操作时,无菌操作可能出现问题
3.3结果分析
根据国家标准GB20810-2006《卫生纸(含卫生纸原纸)》规定卫生纸中微生物的菌落总数含量不能超出500CFU/g。
经检测,春竹(优等品)和凝点(合格品)两种品牌的纸微生物的含量均符合国家卫生部门的要求。
但优等品的微生物含量与合格品的微生物含量均有显著的差异,因此可以看出北食堂1楼对卫生质量要求要比南食堂1楼餐厅要高的多。
4结论
通过本次试验对南食堂1楼和北食堂1楼中常见卫生纸的分析,可以看出:
同类产品不同样品中微生物指标有较大差异,这也说明现在市场中卫生纸存在着质量差异,虽然我们不能通过这次试验证明哪些产品的质量不合格,但是却可以看出这种质量的差异及可能存在的安全隐患问题[5]。
合格品的质量与优等品的质量存在显著的不同,因此,建议大家以后尽量购买优等品的卫生纸,其微生物的含量大大低于合格品的微生物细菌数量,对人体的危害也比较小。
致谢
本论文是在方月琴老师和企业老师的的悉心指导下完成的,老师毕业于新加坡南洋理工大学,其渊博的专业知识,严谨的治学态度,精益求精的工作作风,诲人不倦的高尚师德,严以律己、宽以待人的崇高风范,朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远。
不禁使我树立了远大的学术目标、掌握了基本的研究方法,还是我明白了许多待人接物与为人处事的道理。
本论文从课上小组选题到完成,每一步都是在导师的指导下完成的,倾注了导师大量的心血。
在此,谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢!
参考文献
1国家标准GB20810-2006《卫生纸(含卫生纸原纸)》
2沈萍,范秀容,李广武.微生物学试验.北京:
高等教育出版社,1999.214-215.
3中华人民共和国国家标准:
食品卫生检验方法微生物学部分.北京:
中国标准出版社,1995.147-155.
4中华人民共和国国家标准:
食品卫生检验方法微生物学部分.北京:
中国标准出版社,1995.10-11.
5王小菊.一次使用性卫生用品微生物污染检测[D].西北师范大学,2015.
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