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蛋白质化学思考题
第一章 绪 论
1.基因组(genomic):
体现正常细胞功能的全套染色体中的全部基因。
蛋白质组:
一种基因组所表达的全套蛋白质,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。
功能基因组:
表达一定功能的全部基因所组成的DNA序列,包括编码基因和调控基因。
2.如何理解从基因组-蛋白质组是一个复杂而漫长的里程。
基因组研究可以通过序列预测潜在的基因,从而进行研究。
但遗传信息从DNA传递到蛋白质的过程中,存在着RNA水平和蛋白质水平上遗传信息的加工,使得许多蛋白质很难找到直接对应的ORF,为研究带来困难。
基因组不论大小,其核苷酸的数量总是很明确的。
然而,对蛋白质组来说,大部分蛋白质在合成后都进行化学修饰,如磷酸化、糖基化、酰基化等,这样蛋白质组的蛋白质种类将是基因组基因数目的几倍。
在个体发育的不同阶段或细胞的不同活动时期,细胞内产生的蛋白质种类是不一样的,而且不同蛋白质的寿命不同。
蛋白质的另一个特征是,不同的蛋白质通常分布在细胞的不同部位,它们的功能与其空间定位密切相关。
更为重要的是,许多蛋白质在细胞里不是静止不动的,它们在细胞里常常通过在不同亚细胞环境里的运动发挥作用。
不同蛋白质的相互作用导致了不同的功能,或参与信号转导,或形成蛋白质复合体,成为细胞结构或参与调节转录。
使得我们无法从基因组水平对蛋白质演绎的复杂生命活动加以描述和预测。
DNA链上只有四种碱基排列,蛋白质有20氨基酸组合(不算氨基酸修饰)。
溶解度、稳定性等性质各异。
细胞内蛋白质含量差异,蛋白质之间达106数量级,存在蛋白质类型的干扰。
使得对蛋白质研究较为困难。
虽然蛋白质组学研究的支撑技术(双向凝胶电泳、质谱技术、生物信息学技当前蛋白质组学研究的瓶颈。
所以,从基因组-蛋白质组是一个复杂而漫长的里程。
第二章 蛋白质一级结构术等)已经取得了巨大的进步并在蛋白质组学研究中发挥着决定性的作用,但不可否认,低检测力、缺乏快速、高效的手段是
1.各种氨基酸的三字母符号和单字母符号
甘氨酸(Gly,G) 亮氨酸(Leu,L) 丙氨酸(Ala,A) 异亮氨酸(Ile,I) 缬氨酸(Val,V) 脯氨酸(Pro,P)
丝氨酸(Ser,S) 苏氨酸(Thr,T) 半胱氨酸(Cys,C) 甲硫氨酸(Met,M)
天冬氨酸(Asp,D) 谷氨酸(Glu,E) 天冬酰氨(Asn,N) 谷氨酰氨(Gln,Q)
赖氨酸(Lys,K) 精氨酸(Arg,R) 组氨酸(His,H)
苯丙氨酸(Phe,F) 酪氨酸 (Tyr,Y) 色氨酸(Trp,W)
2.名词解释:
同源蛋白质(homologousprotein):
一组来自同一祖先,随着进化而分化为具有不同结构但功能相同的蛋白质。
趋异突变(divergentmutation):
来自于同一祖先的蛋白质,在进化过程中产生突变,导致蛋白质一级结构改变,使蛋白质被淘汰或形成新蛋白质。
趋同突变(convergentmutation):
进化过程中,同类蛋白质产生结构趋于类似的变异,导致产生类似的结构特征。
中性突变(neutralmutation):
在进化过程中产生突变,不影响蛋白质功能的突变。
其变异限于性质相似的氨基酸。
保守替换(conservativesubstitution):
同源蛋白质的种属差异多见于蛋白质分子表面的氨基酸残基,替换常常发生在性质相似的氨基酸残基间,称作保守替换
蛋白质家族(proteinfamily):
具有重要的一级结构相似性,或(和)显示出结构功能相似性的一组蛋白质。
蛋白质超家族(superfamily):
一级结构几乎没有相似性的两个或多家族有时也形成相同的主要折叠(fold),并具有功能上的相似性,这些家族属于超家族。
蛋白质亚家族(subfamily):
蛋白质家族中氨基酸序列差异小于20%者,可再划分为多个亚家族。
单位进化周期(unitevolutionperiod):
蛋白质在进化过程中每一个残基的变异所需时间。
蛋白质一级结构(primarystructure):
蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。
包括两个方面:
1.蛋白质分子中多肽链的数目2.多肽链中氨基酸的精确排列
第三章蛋白质空间结构
1.蛋白质构象:
蛋白质的空间结构,即蛋白质肽链的所有碳原子由于单链旋转而稳定于一定的空间排布。
蛋白质的二级结构:
在蛋白质分子中的局布区域内氨基酸残基的有规则的排列。
常见的有二级结构有α-螺旋和β-折叠。
二级结构是通过骨架上的羰基和酰胺基团之间形成的氢键维持的。
α-螺旋:
蛋白质二级结构的主要形式之一,呈棒状,多肽链主链骨架围绕中心轴螺旋式上升,螺旋走向为右手方向。
每轮卷曲的螺旋包含3.6个氨基酸残基,残基侧链伸向外侧,同一肽链上的每个残基的酰胺氢和位于它后面的第4个残基上的羰基氧彼此之间形成氢键。
这种氢键大致与螺旋轴平行。
3.613螺旋:
在α-螺旋中,氢键所封闭的环由共价键和氢键构成,包含13个原子,涉及3.6个氨基酸。
两亲α-helice:
在α-螺旋中,亲水侧链伸向一侧,疏水侧链位于相反的一侧。
使蛋白质形成亲水的表面和疏水的核心,构成紧密分子。
β-折叠:
蛋白质二级结构的主要形式之一,是一种更加伸展的多肽构象,多肽链骨架伸展呈Z字型。
两个或多个几乎完全伸展的肽链平行排列,相邻肽链间通过N–H与C=O形成规则的氢键,相邻残基的R基团向着相反的方向。
β-转角:
也是多肽链中常见的二级结构,连接蛋白质分子中的二级结构(α-螺旋和β-折叠),使肽链走向改变的一种非重复多肽区。
在β-转角中第一个残基的C=O与第四个残基的N-H氢键键合形成一个紧密的环,使β-转角成为比较稳定的结构,多处在蛋白质分子的表面。
无规卷曲:
没有确定规律性的肽链构象,但仍是紧密有序的稳定结构;通过主链间及主链与侧链间氢键维持其构象。
分为紧密环和连接条带两种。
紧密环(compactloop):
无规卷曲的一种,肽链主体结构卷曲成一端开放的环状,象希腊字母W,又称W环;肽链由6-16个残基组成。
由于亲水性氨基酸残基较多,故常位于蛋白质分子表面,残基侧链可堆积在环内,通过疏水作用或氢键等,形成紧密的结构。
连接条带:
无规卷曲的一种,在蛋白质肽链的卷曲、折叠过程中具有明确的结构作用。
常位于蛋白质分子表面,往往参与形成蛋白质的一些结合位点或酶的活性位点。
无序结构:
蛋白质分子中存在着没有确定空间结构的区域,该结构是由于其不断运动,或是该结构域具有不同的构象,以致X射线衍射得不到结构图像。
蛋白质的三级结构:
蛋白质分子或亚基内所有原子的空间排布,是多肽链折叠、卷曲的最终状态。
蛋白质的超二级结构(supersecondarystructure):
二级结构单元通过多种连接多肽组合而成的特殊几何排列的折叠类型,又称标准折叠单位(standardfoldingunits)。
模体(motif):
蛋白质分子中存在的某些立体形状或拓扑结构类似的局部区域,常有特殊的结合功能。
EF-手模体:
12个AA残基的钙结合环连接在两段α-helices之间,形似拇指与食指(E及F螺旋)直角相交,配位结合Ca2+。
HTH:
(螺旋-转角-螺旋)模体,DNA结合模体的一种,第二螺旋常在DNA双螺旋大沟中与碱基特异结合,成为识别螺旋。
HLH:
(螺旋-环-螺旋)模体,DNA结合模体的一种,存在于真核转录因子中;由5-24个残基组成的环,连接在两条α-helices之间;螺旋中疏水AA十分保守,易形成二聚体疏水核心,再参与DNA结合。
b-zip:
碱性亮氨酸拉链,DNA结合模体的一种,肽链上每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基,结果就导致这些亮氨酸残基都在α螺旋的同一个方向出现。
两个相同结构的两排亮氨酸残基就能以疏水键结合成二聚体,这二聚体的另一端的肽段富含碱性氨基酸残基,借其正电荷与DNA双螺旋链上带负电荷的磷酸基团结合紧。
邻亮氨酸拉链结构上游的富含碱性氨基酸的区域一起组成一个完整的功能域,因而称为碱性亮氨酸拉链结构。
Zn指模体:
DNA结合模体的一种,存在于真核转录因子中,两条反平行β-pleatedsheets形成β发夹结构,发夹中两个Cys残基与连接在发夹后的α-helice上两个His残基共同配位结合锌原子,形成ββα构象而具有DNA结合功能。
因呈指状,故名。
结构域(domain):
有些较大的蛋白质分子,经常组成两个或多个结构紧密的区域,这一紧密结构称为结构域。
功能域:
含一个通常是多个结构域,具有一定的生物学功能;可用蛋白酶裂解法或基因重组(或突变)法验证蛋白质的功能域。
蛋白质的四级结构:
寡聚体蛋白中各亚基的空间排部布及各亚基间的相互作用。
各种氨基酸的性质与蛋白质空间结构的关系
脂肪族氨基酸:
Gly:
无侧链;双面角可自由转动无空间位阻;任意扭曲,柔性大;常出现在需要运动或转折的肽链片段中。
Ala:
小,侧链只有一个甲基;无化学活性;在蛋白质分子中可处于内部或表面。
Val、Ile、Leu:
带有分支的支链氨基酸,产生的位阻也更大;易于在蛋白质分子中固定于一定位置,并有利于链的折叠。
Pro:
一种亚氨酸,具有固定的构型;a氨基与侧链C原子成环,很强的立体化学效应;使肽链形成一个转角而改变主链方向;对二级结构有破坏作用,但仍能出现在这些结构末端或弯曲部位,常暴露于蛋白质分子表面。
芳香族氨基酸:
Phe:
疏水作用很强;而Tyr、Trp带极性侧链,疏水性较差;Tyr酚基易解离,易形成较强的氢键,故常出现在分子内;三种氨基酸Cα与芳环之间仅有一个可转动的Cb甲烯基,从而限制了侧链的柔性,Trp有大的吲哚环,影响更大;侧链环堆积不规则,常以相互垂直的“人”字型排列,其存在形式对周围结构有很大影响。
羟基氨基酸与含硫氨基酸:
Ser、Thr:
侧链带有羟基,可形成氢键,也可通过水分子间接形成氢键;化学性质活泼,具有重要的功能。
Cys:
易氧化形成带有二硫键的胱氨酸;与金属离子如Fe、Zn、Cu等配位结合;结合蛋白质中一些非蛋白基团;在蛋白质空间结构中成簇聚集,因此,常藏在蛋白分子内部,形成特定的模体(motif)结构。
Met:
疏水性大;柔性大;常埋藏在蛋白质分子内部。
酸性氨基酸极其酰胺:
Asp、Glu:
两个-COO-带负电荷,在蛋白质内形成盐键;Glu的γ羧基带负电荷;常位于蛋白质分子表面,与钙结合;在肽段序列中成簇存在,使分子表面形成不对称电荷分布。
从而成为蛋白质分子与其他大分子物质相互作用的位点。
Asn、Gln:
侧链虽有极性,但不解离,不带电荷.;易形成氢键;酰基化调控。
碱性氨基酸:
His:
含咪唑基;参与酶促反应中的质子传递反应,为多种酶的活性中心;易与金属离子形成配位化合物,参与组成各种金属蛋白质。
Lys、Arg:
一般带正电荷,存在于蛋白质分子表面;可与酸性氨基酸残基、肽链C端、核酸中的磷酸基团形成盐键;与蛋白质活性有关;Lys长侧链可自由伸展在外,与蛋白质结合功能有关;Arg可沿着侧链卷曲成疏水表面埋藏在蛋白质分子内,也可与蛋白质分子内的氧形成氢键从而稳定蛋白质,与酶的催化功能有关。
2.稳定球蛋白构象有那些化学键
范德华力:
在于分子间的一种弱的相互作用力,在两个结构互补的大分子之间大量形成。
氢键(hydrogenbond):
与负电性大的原子(氟、氯、氧、氮等)共价结合的氢,与另一个负电性大的原子形成的化学键。
氢键多呈直线排列,键能较大,是维持蛋白质构象的重要化学键。
盐键(ionicbond):
蛋白质的酸性或碱性氨基酸侧链间,由于静电力的作用而形成;多数分布在蛋白质分子表面。
疏水作用(hydrophobicinteraction):
在水介质中,所有的非极性基团趋于聚合而减少与水的界面,从而使蛋白质形成疏水核心,降低了蛋白质在这二介质中的自由能。
是球状蛋白形成稳定构象的主要作用力。
二硫键(disulfidebond):
通过两个(半胱氨酸)巯基的氧化形成的共价键。
分子量较大的或分泌性蛋白多借二硫键维持其结构,亚基间二硫键是维持许多蛋白质功能必不可少的条件。
2.二级结构的类型有那些?
α-螺旋(α-helice),β-折叠(β-pleatedsheet),β-转角(β-turn),无规卷曲(randomcoil),无序结构
三级结构的类型
①全α类型:
各段α-helices通过反平行或近于互相垂直的状态而连接,排列成层,再平行叠起,从而形成三级结构的构象基础。
分为两种亚型:
Ⅰ.升降螺旋捆(upanddownhelixbundle):
各相邻α-helices头尾相连,反向排列,形成桶状。
Ⅱ.希腊花边螺旋捆(Greekkeyhelixbundle):
多个α-helices段近于垂直的相互连接,并卷曲成近似古希腊花瓶上的回形花边。
②平行α/β类型:
肽链中α-helices与β-pleatedsheet交替存在,卷曲成多层;通常平行β-pleatedsheet在结构域的内部,α-helices盖在外,多数卷曲成右手交叉连接,如平行β桶(parallelβbarrel),马鞍形结构。
③反平行β类型:
β-pleatedsheet反平行排列,β-链间以β转角或连接条带连接,常见的有希腊花边β桶和开面夹心(openfacesandwith)。
④不规则结构类型:
存在于小蛋白质中;正规的二级结构单元很少;富含金属元素或二硫键。
4.举例说明6种motif的结构特征
①HLH(螺旋-环-螺旋)钙结合模体:
12个AA残基的钙结合环连接在两段α-helices之间,形似拇指与食指(E及F螺旋)直角相交,配位结合Ca2+,又称EF手模体。
②DNA结合模体
亮氨酸拉链(leucinezipple):
两条α-helices由重复的七氨基酸残基形成;第1、4位氨基酸呈疏水性;肽链上每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基,结果就导致这些亮氨酸残基都在α螺旋的同一个方向出现。
两条α-helices借两排亮氨酸残基以疏水键结合成二聚体。
HLH(螺旋-环-螺旋)模体:
存在于真核转录因子中;由5-24个残基组成的环,连接在两条α-helices之间;螺旋中疏水AA十分保守,易形成二聚体疏水核心,再参与DNA结合;也可形成三链,四链,甚至更大的螺旋捆(如大肠杆菌的延胡索酸酶C和天冬氨酸受体)。
HTH(螺旋-转角-螺旋)模体:
第二螺旋常在DNA双螺旋大沟中与碱基特异结合,成为识别螺旋。
锌指模体(zincfingermotif):
两条反平行β-pleatedsheets通过2~5个残基连接而形成β发夹结构;发夹中两个Cys残基与连接在发夹后的α-helice上两个His残基共同配位结合锌原子,形成ββα构象而具有DNA结合功能。
③β螺旋(βhelix)模体:
许多平行的β-pleatedsheets在肽链中依次卷曲形成宽大的螺旋圆柱构象。
球状蛋白质构象的运动
①肽链合成时不断的折叠及构象的不断调整②酶催化活性的调节③离子通道的开闭④配体与受体的结合
第四章 蛋白质分离纯化
1.名词解释:
等电点沉淀:
分子电荷为零,蛋白质分子间的静电排斥消失,蛋白质分子间的亲和力加强,蛋白质出现聚集沉淀。
盐溶:
蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升。
原因是盐在蛋白质与水之间形成盐键,从而更易形成水化膜,使蛋白质和溶剂的亲和力上升。
盐析:
当盐浓度增高到一定数值时,其溶解度又逐渐下降,直至蛋白质析出。
原因是盐和蛋白质争夺水分子,使水化膜破坏,蛋白质与溶剂的亲和力下降,而分子间亲和力上升,从而析出。
SDS-PAGE:
SDS是阴离子洗涤剂,几乎能破坏天然蛋白质中所有的非共价键,从而使多亚基蛋白质解聚,并使多肽链呈伸展状态,消除了蛋白质形状对迁移率的影响;SDS以1:
2的比例与肽链中的氨基酸残基结合,使变性蛋白质带上大量的净负电荷,而且电荷量与蛋白质分子量(即肽链长度)成正比。
所以分子量成为决定蛋白质迁移率的唯一因素。
聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体,在催化剂的作用下聚合形成长链,聚丙烯酰胺链在交联剂甲叉双丙烯酰胺参与下,聚丙烯胺链与链之间交叉联接而形成凝胶。
具有分子筛效应。
SDS-PAGE能分离分子量差异小于10%的蛋白质,可用于蛋白质纯化和分子量近似值测定。
等电聚焦(isoelectricfocusing,IEF):
在凝胶上加入一种两性电解质,电泳时会形成连续的pH梯度。
电泳后,各种蛋白质停留在与其等电点(pI)相同的位置。
亲和层析:
利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。
当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与特异配体具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。
那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液,改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
浓缩效应:
通电后,电极槽缓冲液中的甘氨酸进入浓缩胶,遇到pH6.7的凝胶缓冲液,甘氨酸解离度明显降低,负电荷减少,向正极移动速度变慢,称为尾随离子或慢离子;C1-在任何pH下都处于解离状态,所以泳动速度最快,称为前导离子或快离子;而蛋白质在pH6.7条件下,大部分以负离子形式存在,带较多的负电荷,泳动速度居于上述两者之间。
结果在浓缩胶中,3种离子的泳动速度为C1->蛋白质离子>甘氨酸离子。
C1-迅速向前移动,在它后面形成一个低离子浓度的低电导区域,电导与电势梯度成反比,所以低电导区就有较高的电势梯度。
这种高电势梯度迫使蛋白质离子和甘氨酸离子在此区域内加速前进,追赶快离子,夹在快慢离子中间的蛋白质就在这种追赶过程中被逐渐压缩成一条狭窄的区带。
当样品进入分离胶后,pH由6.7变为8.9,甘氨酸的解离度增加,负电荷增多,泳动加快,超过蛋白质的泳动速度,此时凝胶中高电势梯度区域消失,蛋白质样品在均一的电势梯度和均一pH条件下,在分离胶中按分子筛效应和电荷效应进行分离。
电荷效应:
当样品进入分离胶后,由于每种蛋白质所带的电荷多少不同,因而迁移率也不同。
电荷多的,分子小的泳动速度快,反之,则慢。
于是,各种蛋白质在凝胶中得以分离。
分子筛效应:
分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时,受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率,此即分子筛效应。
蛋白质分子越大,阻力越大,移动的速度越慢:
蛋白质分子越小,阻力越小,移动的速度越快。
电泳:
带电颗粒在电场的作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象。
故在一定条件下,蛋白质分子量不同,pI不同,所以在电场中移动的速度也不同,从而得以分开。
2.如何理解分子筛分离蛋白质的原理
分子筛层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶作为固定相,对混合物中各组分按分子大小进行分离的层析技术。
不同规格的凝胶其网孔直径范围不同,只允许分子量在一定范围的蛋白质分子进入,大的蛋白质分子被排阻在外,故形象地称为分子筛。
当蛋白质混合溶液从凝胶柱顶进入后,小分子蛋白质能进入凝胶颗粒的微孔中,其路程长,受到的阻力较大,而大分子蛋白质而大分子被排阻在外部,只能从凝胶颗粒的间隙向下移动,路程短,阻力小。
这样大分子最先流出,小分子根据分子量从大到小流出,从而将不同大小的蛋白质分开。
3.有机溶剂分级分离蛋白质的基本原理
一些有机溶剂的介电常数比水小,而且可与水混容,当蛋白质溶液中加入预冷的有机溶剂时,降低了溶液的介电常数,从而减小了蛋白质分子中R侧链基团的离解,蛋白质分子间亲和力提高,就会聚集沉淀。
4.据支持物的不同,电泳可分为哪几种类型
线丝电泳,自由界面电泳,区带电泳(凝胶电泳:
PAGE,SDS-PAGE,聚焦电泳,琼脂胶,淀粉胶等)
5.那些物质可作用蛋白质亲和层析的配体
抑制剂、效应物、酶的辅助因子、类似底物、抗体或其他物质(如外源凝集素、金属离子等)
6.测定蛋白质分子量有那些方法
渗透压,沉降平衡,凝胶过滤层析,SDS-PAGE,激光解吸电离飞行时间质谱
7.如何理解蛋白质电泳中的浓缩效应,电荷效应及分子筛效
浓缩效应主要在浓缩胶中完成,浓缩胶的pH6.8,在这个pH条件下,缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离,Gly的等电点为6.0,仅少数解离为负离子,在电场中移动速度很慢。
酸性蛋白质在此pH下解离为负离子,三类离子的迁移速率为Cl>一般蛋白质>Gly,电泳开始后,Cl离子泳动快,在其后留下一个低离子浓度区。
Gly在电场中移动很慢,造成移动离子的缺乏,于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区,在高压区内所有的负离子都会加速移动,当移到Cl离子区域时,高电压消失,蛋白质的移动速度慢下来,当以上稳定状态建立后,蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层,并按蛋白质所带负电荷量的多少依次排列成带,浓缩样品,从浓缩胶进入分离胶后,胶的pH升高,Gly的离解度增大,泳动率上升,又因为它分子小,故超过所有的蛋白质分子,紧跟在Cl离子后,Cl离子迁移后,低离子浓度不再存在,形成了恒定的电场强度,因此,蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质,分子大小和形状,分离胶的孔径有一定大小,对不同相对质量的蛋白质来说,通过时收到的滞阻作用不同,即使静电荷相等的颗粒,也会由于这种分子筛的效应,把不同大小的蛋白质相互分开。
8.聚焦法测定蛋白质PI的基本原理
等电聚焦法主要依赖两性电解质的载体,在电场中可形成一个稳定和平滑连续的pH梯度,每种蛋白质都有其特定的pI,当溶液中的pH低于它的pI时,蛋白质带正电荷,向电场的负极移动,直到pH=pI时,蛋白质就不再移动。
反之,则向正极移动,最终也将停留在与其pI相同的pH区域内,从而测出蛋白质的pI。
9.可用哪些方法来分离蛋白质N-末端和C-末端氨基酸
N-末端测定:
化学法【二硝基氟苯法(DNFB),丹磺酰氯法(DNS-Cl),异硫氰酸苯酯法(PITC)】
酶法【氨肽酶法(aminopeptidase)】
C-末端测定:
化学法【肼解法(hydrazinolysis)】 酶法【羧肽酶法(carboxypeptidase)】
10.如何理解凝胶过滤层析中kd=0时,kd=1时,0 颗粒外的外水体积记为Vo,颗粒内体积称内水体积记为Vi,颗粒中胶的体积记为Vg,因而,凝胶上柱后,总的柱床体积(Vt),Vt=Vo+Vi+Vg,Vg可忽略。 Vt=Vo+Vi。 当进行洗脱时,某一溶质的洗脱体积(Ve)就取决于Vo,Vi和在两相中的分配系数(kd): Ve=Vo+kd•Vi 用凝胶过滤层析来分离蛋白质可用以下述三种形式来描述: ①当kd=0时,Ve=Vo,溶质全从Vo出来,无分配。 ②当kd=1时,Ve=Vo+Vi,溶质全进筛子,各物质尽管有分配,但各物质不能分开。 ③当0
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