组织化学概论.docx
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组织化学概论
组织化学概论
〔教学内容〕
一、绪论
二、组织化学概念
三、组织化学的发展与展望
四、组织化学研究的内容
五、组织化学技术的基本要求
六、组织化学技术的注意事项
七、组织化学显示方法的种类
八、对组织化学方法的评价
九、组织化学方法的应用
〔目的要求〕
一、掌握组化概念
二、掌握组织化学技术的基本要求
三、熟悉组化研究的内容
四、熟悉组织化学技术的注意事项
五、熟悉组织化学显示方法的种类
六、熟悉对组织化学的评价
七、熟悉组织化学方法的应用
八、了解组化的发展与展望
九、了解组织化学显示方法的种类
〔复习思考题〕
一、名词解释:
组织化学
二、问答题:
1、简述组织化学研究的内容。
2、组织化学技术有哪些基本要求?
3、组织化学技术的注意事项有哪些?
4、简述组织化学方法的优缺点。
5、简述组织化学方法的应用。
细胞和组织标本制备
〔教学内容〕
一、细胞和组织标本制备
(一)标本取材
(二)固定
二、组织切片的制备
(一)石蜡切片
(二)冷冻切片
〔目的要求〕
一、掌握细胞或组织标本取材的方法和注意事项
二、掌握固定和固定剂的概念、固定的目的以及优缺点
三、掌握常用的固定方法及注意事项
四、掌握固定剂的特性和作用
五、熟悉石蜡切片和冰冻切片制备时注意事项及其优缺点
六、了解固定剂的种类和优缺点
七、了解石蜡切片和冷冻切片制备的主要步骤
〔复习思考题〕
一、名词解释:
固定固定剂糖原极化
二、问答题
1、细胞标本取材有哪些方法?
有哪些注意事项?
2、动物模型取材的方法有哪些?
对手术切取标本取材时通常采取哪些部位?
3、简述组织标本取材时的注意事项。
4、简述固定的目的及其固定的优缺点。
5、常用的固定方法有哪些?
有哪些注意事项?
6、简述固定剂的特性和作用。
7、简述石蜡切片和冷冻切片制备时注意事项及其优缺点。
酶的组织化学
〔教学内容〕
一、概述
(一)酶组织化学的概念
(二)酶的分类
(三)酶的特性
(四)酶的定位
二、酶组织化学基本原理
(一)基本反应步骤:
酶促反应;捕捉反应
(二)基本条件
(三)一般原则
三、酶组织化学主要步骤
四、酶特异性对照实验
五、主要方法介绍
(一)金属离子沉淀法
(二)偶氮偶联法
(三)联苯胺色素法
(四)四唑盐法
(五)靛蓝反应
六、酶组化的应用
〔目的要求〕
一、掌握酶组织化学的定义,了解酶的分类、特性及定位
二、掌握酶组化的基本原理
三、掌握酶组化主要方法的原理
四、熟悉酶组化的主要步骤和特异性对照实验的设置
五、了解酶组化的应用
〔复习思考题〕
一、名词解释:
酶组织化学酶促反应PRP捕捉反应FRP金属沉淀法偶氮偶联法四唑盐法
二、问答题:
1.酶组织化学的一般原则是什么
2.简述酶组织化学的基本原理
3.试述酶组织化学的主要步骤以及每一步骤的注意点
4.可设置哪些酶特异性对照实验
5.试述各类酶组织化学方法的原理
水解酶及氧化还原酶组织化学原理及方法
〔教学内容〕
一、水解酶
(一)磷酸酶类概述
1.碱性磷酸酶:
原理和方法,实验步骤,结果观察及应用
2.酸性磷酸酶:
原理和方法,实验步骤,结果观察及应用
3.其他磷酸酶(包括:
5’-核苷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、腺苷三磷酸酶):
检测方法
(二)酯酶
1.非特异性酯酶:
方法和应用
2.胆碱酯酶:
方法好应用
二、氧化还原酶
(一)脱氢酶
1.琥珀酸脱氢酶:
原理和方法,实验步骤,结果观察及应用
2.乳酸脱氢酶:
原理和方法,实验步骤,结果观察及应用
(二)过氧化物酶:
原理和方法,实验步骤,结果观察及应用
〔目的要求〕
一、掌握各类酶最适用的组化检测的方法、原理
二、熟悉各种酶组化方法的结果观察以及对照鉴别
三、了解各种酶组化方法的作用液的主要成分、配制方法和实验步骤
〔复习思考题〕
1.试述钙钴法和偶氮偶联法的原理和方法,并作一下比较
2.同样用金属离子沉淀法分别来检测组织中的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶要注意什么
3.检查组织中的胆碱酯酶可用什么方法,试述其原理
4.脱氢酶可用哪种组化方法检测,试述原理和结果判断
5.DAB法用于检查哪种酶,作用液的配制需要注意些什么
糖的组织化学
〔教学内容〕
一、常用糖类组化染色技术概述
二、PAS染色,DR-PAS染色
(一)染色原理
(二)染色材料
(三)染色方法
(四)染色注意事项
(五)染色应用
三、AB染色
(一)染色原理
(二)染色方法
四、AB-PAS染色
(一)染色方法
(二)染色应用
五、HID-AB染色法
(一)染色原理
(二)染色方法
(三)染色应用
六、HID-AB-PAS染色
(一)染色方法
(二)染色应用
七、黏液、糖蛋白及相关蛋白的免疫组织化学检测和分型
〔目的要求〕
一、掌握:
PAS染色原理;AB染色原理;HID染色原理.
二、熟悉:
胃型粘液/肠型粘液的性质和染色区别;小肠型粘液/大肠型粘液的性质和染色区别.
三、了解常见糖类染色方法;PAS/AB/HID染色过程及注意事项;胃肠道粘液的免疫组织化学显色.
〔复习思考题〕
一、名词解释:
中性粘多糖,酸性粘多糖,硫酸粘多糖,涎酸粘多糖,过碘酸,Schiff's液,PAS染色,AB染色,HID染色,DR-PAS法。
二、问答题:
1、试述PAS染色、AB染色、HID染色的染色原理
2、试比较胃型粘液、小肠型粘液和大肠型粘液的化学性质。
3、试从染色特点以及免疫组织化学特点等方面比较胃型粘液和肠型粘液。
4、举例说明PAS染色、AB染色的实际应用。
核酸和核仁组成区的组织化学
〔教学内容〕
一、核酸的染色方法
(一)核酸的分布、种类及核酸染色的应用
(二)Feulgen染色法的原理、注意事项、试剂配制、实验步骤及实验结果的判断与应用
(三)甲基绿--派洛宁法原理、注意事项、试剂配制、实验步骤及实验结果的判断与应用
二、原位末端标记技术
(一)原位末端标记技术概念、原理
(二)原位末端标记技术实验步骤,结果判断及实验过程的注意事项
三、核仁组成区嗜银染色
(一)核仁组成区概念
(二)核仁组成区检测方法与原理
(三)核仁组成区嗜银染色注意事项、试剂配制及实验步骤
(四)核仁组成区嗜银染色计数方法
〔目的要求〕
一、掌握Feulgen染色法、甲基绿--派洛宁法染色原理,注意事项及结果观察;原位末端标记技术概念、原理及注意事项;核仁组成区嗜银染色注意事项、计数方法。
二、熟悉Feulgen染色法与PAS染色法的区别;核仁组成区染色方法及原理,核仁组成区嗜银染色颗粒类型
三、了解Feulgen染色法、甲基绿--派洛宁法染色过程;原位末端标记技术染色过程;核仁组成区的组成及染色过程
〔复习思考题〕
一、名词解释:
Feulgen染色法,原位末端标记技术,核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)
二、问答题:
1、试比较Feulgen染色法与PAS染色的原理有什么异同点?
2、核仁组成区的常用染色方法是什么?
染色结果如何?
染色过程中需要注意些什么?
3、简述对核仁组成区染色结果进行计数分析时要注意些什么?
4、试述用甲基绿--派洛宁法染核酸的染色结果及其在实验过程中的注意事项。
5、简述原位末端标记技术实验过程的注意事项。
免疫组织化学概述
〔教学内容〕
一、免疫组化概述
(一)概念
(二)发展过程
(三)特点
二、免疫组织化学技术的过程
(一)抗原提取和纯化
(二)免疫动物(抗体制备)或细胞融合(单克隆抗体制备)
(三)抗体效价检测和提取
(四)细胞和组织切片标本制备
1、组织标本的取材和固定
2、玻片的处理
3、抗原修复
4、抗体稀释法
5、免疫组织化学染色方法和注意事项
〔目的要求〕
一、掌握免疫组化的概念
二、掌握免疫组化的特点
三、掌握抗原、完全抗原、半抗原、人工全抗原、抗原决定簇的概念
四、掌握制备抗体用的抗原应具备的条件
五、掌握多克隆抗体和单克隆抗体的概念
六、掌握抗原修复的概念、石蜡切片中抗原性降低的主要原因和抗原修复的方法
七、熟悉抗体稀释的目的、影响抗体稀释度的因素
八、熟悉免疫组化染色方法
九、了解免疫组化的发展过程
十、了解免疫组化技术的全过程
十一、了解抗原制备和纯化的步骤
十二、了解多克隆抗体和单克隆抗体制备的过程
十三、了解对抗原修复的评价
十四、了解抗体稀释度测定法
〔复习思考题〕
一、名词解释:
免疫组织化学抗原完全抗原半抗原人工全抗原抗原决定簇(表位)
多克隆抗体单克隆抗体抗原修复
二、问答题:
1、免疫组织化学有哪些特点?
2、制备抗体用的抗原物质应具备哪些条件?
3、抗原制备的一般步骤有哪些?
4、多克隆和多克隆抗体制备的大致步骤分别有哪些?
5、简述石蜡切片中抗原降低的主要原因。
6、简述抗原修复的方法
7、抗体稀释的目的是什么?
有哪些抗体稀释法?
简述影响抗体稀释度的因素。
8、请根据标记物分类或根据主要步骤分类分别简述免疫组化的染色方法。
免疫荧光组织(或细胞)化学技术
〔教学内容〕
一、概述
(一)概念
(二)免疫荧光组化技术基本原理
(三)特点
(四)用于标记的荧光素必须具备的条件
(五)荧光素的种类
二、荧光抗体的标记
(一)原理
(二)影响因素
(三)标记方法
(四)荧光抗体的鉴定
三、免疫荧光染色方法
(一)直接法
(二)间接法
(三)补体法
(四)双标法
四、免疫荧光染色注意事项
五、免疫荧光染色应用
六、荧光显微镜
〔目的要求〕
一、掌握荧光和荧光素、自发荧光和继发荧光、荧光效率、荧光的淬灭、荧光寿命的概念
二、掌握用于标记的荧光素具备的条件
三、掌握荧光抗体标记过程中的影响因素
四、掌握免疫荧光染色注意事项
五、熟悉免疫荧光组化技术基本原理
六、熟悉荧光素的种类及其荧光素标记抗体的原理
七、熟悉荧光抗体的标记方法和鉴定方法
八、熟悉免疫荧光染色方法和优缺点
九、了解免疫荧光组化技术的特点
十、了解免疫荧光染色的阴性对照方法
十一、了解免疫荧光染色的应用
十二、了解荧光显微镜的结构、特点、使用注意事项
〔复习思考题〕
一、名词解释:
荧光抗体法荧光抗原法荧光和荧光素自发荧光和继发荧光荧光效率
荧光的淬灭荧光寿命
二、问答题:
1、简述免疫荧光组化技术的基本原理。
2、用于标记的荧光素应具备哪些条件?
3、荧光素的种类有哪些?
简述荧光素标记抗体的原理。
4、荧光抗体标记方法有哪些?
标记过程中有哪些影响因素?
5、简述荧光抗体的鉴定方法。
6、免疫荧光染色时可设置哪些阴性对照方法?
7、请列表比较各种免疫荧光染色方法。
8、免疫荧光染色时有哪些注意事项?
9、免疫荧光染色有哪些方法?
各有哪些优缺点?
10、使用荧光显微镜应注意哪些事项?
免疫酶组织化学技术
〔教学内容〕
一、免疫酶组织化学技术概述
(一)概念
(二)免疫酶组织化学与免疫荧光技术的比较
二、酶标抗体的制备
(一)原理和制备方法
(二)偶联剂具备的基本特征
(三)标记酶的要求
(四)酶标抗体的纯化和鉴定
三、常用的标记酶及其底物的呈色反应
四、常用免疫酶染色法
(一)免疫酶标法原理及其优缺点或注意点
(二)非标记免疫酶法(酶桥法和酶免疫复合物法)原理及其优缺点或注意点
〔目的要求〕
一、掌握免疫酶组织化学技术概念
二、掌握免疫酶组织化学与免疫荧光技术的比较
三、熟悉酶标抗体的制备原理和制备方法
四、熟悉偶联剂具备的基本特征
五、熟悉标记酶的要求
六、了解酶标抗体的纯化和鉴定
七、掌握常用的标记酶及其底物的呈色反应
八、掌握常用免疫酶染色法的原理、优缺点及其注意点
〔复习思考题〕
一、名词解释:
免疫酶组化技术酶桥法HRPPAP法APAAP法
二、问答题:
1、列表比较免疫酶组化技术与免疫荧光技术。
2、对标记酶有哪些要求?
3、酶标抗体的制备方法有哪些,分别说明其原理。
4、偶联剂应具备哪些基本特征?
5、阐述常用的标记酶及其底物呈色反应原理。
6、阐述各种免疫酶染色方法的原理及其优缺点或注意点。
亲和免疫组化技术
〔教学内容〕
一、亲和免疫组化技术概述
(一)概念
(二)常用的亲和物质特性及其作用原理
二、卵白素、生物素系统
(一)生物素、卵白素的特性及其作用原理
(二)染色方法(LAB法,BRAB法和ABC法)和原理
(三)对卵白素-生物素系统的评价
(四)SP法
三、Epos法和EnVision法
四、葡萄球菌A蛋白(SPA)
〔目的要求〕
一、掌握亲和免疫组化概念
二、掌握常用的亲和物质特性及其作用原理
三、掌握生物素、卵白素的特性及其作用原理
四、掌握对卵白素-生物素系统的评价
五、熟悉几种染色方法(LAB法,BRAB法和ABC法)和原理
六、熟悉SP法基本原理
七、熟悉Epos法和EnVision法基本原理和优点
八、熟悉葡萄球菌A蛋白(SPA)概念
九、了解葡萄球菌A蛋白(SPA)特性和应用
〔复习思考题〕
一、名词解释:
亲和细胞化学亲和物质生物素(biotin)卵白素(avidin)抗生素蛋白链霉菌素
葡萄球菌A蛋白(SPA)
二、问答题:
1、简述ABC法、LBA法、BRAB法和SP法的基本原理。
2、简述常用的亲和物质特性及其作用原理。
3、简述ABC法的优点。
免疫胶体金技术
〔教学内容〕
一、免疫胶体金技术的概念
(一)胶体金的基本概念
(二)分散系的分类
(三)胶体金的一般性状
二、胶体金的制备
(一)制备方法和注意事项
(二)基本原理和常用还原剂
(三)影响溶胶稳定性的因素
三、胶体金的鉴定
四、胶体金探针的制备
(一)胶体金与蛋白质结合的原理
(二)调节PH的方法以及待标记蛋白质的和处理
(三)胶体金蛋白质最佳结合率测定方法
(四)标记过程
(五)标记探针的纯化和鉴定
五、免疫胶体金染色方法
(一)免疫金染色法基本原理和特点
(二)免疫金银染色法基本原理和优点
六、免疫胶体金技术的特点
〔目的要求〕
一、掌握免疫胶体金技术的概念
二、掌握胶体金的基本概念
三、掌握影响溶胶稳定性的因素
四、掌握免疫金染色法基本原理和特点
五、掌握免疫金银染色法基本原理和优点
六、掌握免疫胶体金技术的特点
七、熟悉胶体金的制备方法和注意事项
八、熟悉胶体金制备的基本原理和常用还原剂
九、熟悉胶体金与蛋白质结合的原理
十、熟悉胶体金蛋白质最佳结合率测定方法
十一、了解分散系的分类
十二、了解胶体金的一般性状
十三、了解胶体金的鉴定方法
十四、了解调节PH的方法以及待标记蛋白质的和处理
十五、了解胶体金探针的标记过程
十六、了解标记探针的纯化和鉴定
〔复习思考题〕
一、名词解释:
免疫胶体金技术胶体金(金溶胶)胶体分散体系粗分散体系分子-离子分散体系
二、问答题:
1、按分散相粒子大小不同,可分哪三类体系?
2、简述胶体金的制备原理和方法。
3、简述影响溶胶稳定性的因素。
4、制备胶体金时有哪些注意事项?
5、胶体金标记前需做哪些准备工作?
6、简述胶体金蛋白质最佳结合率的测定方法。
7、简述标记谈正的鉴定方法。
8、免疫胶体金染色技术有哪些方法?
简述各种染色方法的基本原理及特点。
免疫组化染色对照的设计
〔教学内容〕
一、免疫组化染色对照的设计
(一)免疫组化染色对照的目的与方法
(二)免疫组化染色对照设计注意点
二、非特异性染色及消除方法
(一)非特异性染色和特异性染色概念
(二)非特异性染色原因和消除方法
三、免疫组织化学染色结果的判断
(一)特异性染色表现
(二)免疫组化出现假阳性原因
(三)免疫组化出现假阴性原因
〔目的要求〕
一、掌握免疫组化染色对照的目的与方法
二、熟悉免疫组化染色对照设计注意点
三、掌握非特异性染色和特异性染色概念
四、了解非特异性染色原因和消除方法
五、熟悉特异性染色表现
六、掌握免疫组化出现假阳性和假阴性原因
〔复习思考题〕
一、名词解释:
特异性染色非特异性染色阳性对照阴性对照自身对照
二、问答题:
1、免疫组化染色过程中可设计哪些对照方法?
2、免疫组化的特异性染色是如何表现的?
3、免疫组化染色时如果出现假阳性结果,请分析一下可能的原因。
4、免疫组化染色如出现假阴性结果,请分析其可能的原因。
5、免疫组化染色时如果阳性对照片出现阴性结果,请分析一下可能的原因。
6、请分析免疫组化出现假阳性或假阴性的原因。
7、简述免疫组化特异性染色的概念及其特异性染色的具体表现。
原位杂交
〔教学内容〕
一、原位杂交概念
二、分子生物学技术中的杂交类型
三、原位杂交基本原理
四、原位杂交的优点
五、探针的种类及优缺点
六、探针的标记方法及原理
七、组织样品制备时的注意事项
八、原位杂交的操作流程
九、原位杂交阴性对照的方法
十、原位杂交中可能会出现的问题
十一、原位杂交特性以及与免疫组化比较
〔目的要求〕
一、掌握原位杂交概念
二、了解分子生物学技术中的杂交类型
三、掌握原位杂交基本原理和优点
四、熟悉探针的种类及优缺点
五、了解探针的标记方法及原理
六、熟悉组织样品制备时的注意事项
七、了解原位杂交的操作流程
八、熟悉原位杂交阴性对照的方法
九、掌握原位杂交中可能会出现的问题
十、掌握原位杂交特性以及与免疫组化比较
〔复习思考题〕
一、名词解释:
原位杂交杂交变性Denaturation复性(退火)探针靶核酸分子严格度
二、问答题:
1、试述原位杂交的基本原理和优点。
2、试述探针的种类以及各有哪些的优缺点?
3、原位杂交技术中对组织样本制备有哪些注意事项?
4、原位杂交实验中可能会出现哪些问题?
请分析可能的原因。
5、原位杂交有哪些特性,试比较免疫组化与原位杂交有哪些不同?
PCR及原位PCR的原理及方法
〔教学内容〕
一、PCR的基本原理和方法
(一)PCR的概念和原理
(二)PCR的基本步骤
(三)PCR的操作方法
(四)影响PCR的因素
二、原位PCR的原理和方法
(一)原位PCR的概念
(二)原位PCR的技术特点
(三)原位PCR的基本步骤
(四)原位PCR的操作方法
(五)原位PCR的应用
〔目的要求〕
一、掌握原位PCR的概念、技术特点、基本步骤。
一、熟悉PCR的概念、原理以及基本步骤。
一、了解PCR的操作方法和影响因素
二、了解原位PCR的操作方法和应用
〔复习思考题〕
一、名词解释:
原位PCR直接法原位PCR间接法原位PCR
二、问答题:
1.简述PCR有哪几个基本步骤
2.哪些因素可以影响到PCR过程
3.怎样处理好PCR实验中的污染问题
4.原位PCR的技术特点有哪些,主要有哪些技术参与
5.试述原位PCR的四个基本步骤以及每一个步骤的注意点
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