LC20ATvp高效液相色谱仪验证方案.docx
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LC20ATvp高效液相色谱仪验证方案
LC-20A高效液相色谱仪
验证方案
1.主题内容与适用范围
本方案规定了LC-20A高效液相色谱仪验证的内容、进程和方式。
本方案适用于LC-20A高效液相色谱仪验证。
2.相关文件
《岛津LC-20A高效液相色谱仪利用说明书》
《中国药典》2010年版二部
《药品查验仪器操作规程》2010年版
岛津LC-20A高效液相色谱仪的操作及保护保养SOP编号:
EMO-R35
3.验证目的
为确认LC-20A高效液相色谱仪能够达到仪器性能指标,能符合查验产品需求,特制订本验证方案,对高效液相色谱仪进行验证。
4.职责
验证小组成员
工作内容
组长
解斌
负责验证的实施、组织及协调工作
成员
熊仁清
负责按验证计划组织实施验证工作
熊仁清
负责验证方案、验证报告编写及实施工作
熊仁清
负责验证的实施及不符合项目的整改工作
动力设备部
负责验证中涉及计量器具的校验工作
质量管理部
负责验证质量检验项目的检验、出具报告工作
5.验证内容与方式
.预确认
.设备大体情形
本仪器由日本岛津公司生产,由2台LC-20AT泵、1台SPD-20A检测器、1台CBM-20A操纵器,1台CTO-10ASvp柱温箱,岛津LCsolution双通道色谱工作站组成。
要紧用于各类进厂原料、成品药的含量测定及新方式的开发及其验证。
设备名称:
高效液相色谱仪
型号:
LC-20A
生产厂家:
日本岛津公司
安装日期:
利用部门:
研究开发中心
.安装确认
项目要求:
充分通风,周围无火源(当利用易燃或有毒的溶剂作为流动相时,房间应充分通风;当利用易燃溶液时,严禁室内利用明火或其它火源);
安装场所环境温度4-35℃,日温度转变要小(不超过2℃);
湿度维持在45~85%,无尘埃及侵蚀性气体;
没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调;
电源功率220±10V,50HZ;
供电电源应有良好的接地;
线路连接各接口连接正确;
管线连接各接口连接正确。
.硬件认证
硬件认证检查LC系统是不是运转正常,仪器是不是适用于预备进行的分析,在LC安装、操作和性能鉴定过中进行认证,尔后还要按期检查,随着时刻的推移,由于易损部件的磨损,LC系统的性能会下降。
因此,从系统安装时起直到系统报废时止,必需按期进行硬件认证。
.柱温箱温度准确度检查
检查温度是不是操纵在设定的温度,专门是,测量柱箱内部热传感器周围的温度,并与设定温度相较较。
在没有特殊要求下,设定温度利用50℃。
.1.设备连接:
利用热电偶固定架将热传感器(热电偶)固定在柱箱内,将热传感器(热电偶)的导线连接到数字万用表的输入端。
.2.检查进程:
打开电源开关,显示初始屏幕,按func键,屏幕显示SETTEMP,利用▲/▼键设定温度为50℃,按oven键,启动温度操纵,当ready指示灯亮后,等待10min,运行TEMPERAGURETEST。
能够接收的标准(温度操纵精度为Dt≤℃(设定温度为50℃))。
为了检查温度,输入由数字万用表测量的温度,观看显示结果,屏幕如显示“ACCURACYGOOD”表示结果知足要求。
若是显示结果不知足要求,需要进行纠正设定温度错误,具体操作如下:
重复按VP键直至屏幕显示CALIBRATION(校正功能VP组);重复按func键直至屏幕显示TEMPCAL-IB(此为校正设定温度);输入作为校正温度的T值,该值显示在上述温度准确度检查进程中运行TEMPRATURETEST功能后所显示的屏幕上;重复按func键直至屏幕显示CALIB(用于设定温度校正参数);利用▲/▼键设定一温度数值作为校正参数,该值是用热传感器测量的数值,按▲键以℃步长升高校正值,按▼键以℃步长降低校正值;按Enter键确认新的设定值,当电源关闭后,此值保留在内存中。
5.2.2.柱温箱漏液传感器的功能检查
打开电源ON,屏幕显示初始屏幕,运行LEAKSENSORTEST功能,若是屏幕显示SENSORGOOD,传感器通过测试。
可同意的标准为屏幕必需显示“SENSORGOOD”。
..泵的检查
.、RAM自检:
检查内存功能是不是正常。
检查步骤:
打开电源开关。
按VP四次以显示VALIDATION,按func三次以显示MEMORYCHECK,按enter,检查内存MEMORYCHECK。
检查评判标准:
屏幕显示ROMOK/RAMOK。
.2.固件版本检查:
检查固件的版本。
检查步骤:
从初始屏幕按VP两次,显现PRODUCTINFO;按func两次显示版本号,显示软件版本号S/WID。
检查评判标准:
显现版本号。
版式本号与所治理的号码相同。
.3.显示、LED测试:
检查显示和LED的操作。
操作步骤:
打开电源开关,检查打开电源后屏幕上的所有点和键盘上的LED都亮。
检查评判标准:
屏幕上的所有点和LED都亮。
.4.流速的操纵参数:
检查操纵流速的参数。
检查步骤:
从初始屏幕按VP五次,显现CALIBRATION,按func一次以显示InputPASSWORD,输入00000并按enter,输入密码后显现FLOWCOMPFACT,记下FLOWCOMPFACT(ALPHA)R的显示值,设定流速补偿参数(ALPHA);按func一次,记下显示的两个PRESSCOMPFACT值(1:
PRS-1和5:
PRS-5),设定压力传感器灵敏度补偿因子(PRESSCOMPFACT)。
检查评判标准:
显现参数。
.5.送液稳固性测试:
检查压力波动幅度没有超出额定值。
检查步骤:
将电阻管连接到泵出样口,而不是HPLC色谱柱;在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相;重复按func直到显现PARAMETER并按enter;重复按func或back直到显现COMP,记下当前值。
按将值设定为。
按CE两次返回初始屏幕,按VP四次以显示VALIDATION,按func四次以显示PULSECHECK,按将CRITERIA设定为,按enter,泵以1ml/min的速度运行,测定在一分钟后开始。
在测量进程中,显示设定流速、测量压力、压力波动和剩余时刻。
测量后,显示压力波动幅度的测量值和通过/失败状态。
检查脉动PULSECHECK,按enter,测量结果和日期保留在仪态器的内存中。
检查评判标准:
压力波动幅度的测量结果不超过。
检查后重设:
重复按func直到显现PAEAMETER并按enter,重复按func或back直到显现COMP。
记下当前值,改回检查的第4步中记录的值。
.6.压力限制器测试:
检查压力限制器在压力上限或压力下限时是不是操作正常。
检查步骤:
将电阻管连接到泵出样口,而不是HPLC色谱柱。
在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相,打开电源开关,显现初始屏幕,按func激活流速的设定。
按1和enter将流速设定为1ml/min,按func两次以激活的输入。
按20和enter将设定为。
按func三次以激活的输入,按0和enter将设定为。
按pump开始送液1分钟。
泵指示灯将在送液时亮,这时,屏幕上既不该显现ERRORP-MAX,也不该显现ERRORP-MIN。
观看屏幕确认它们都没有显现;在送液时按如下所述更改和:
=实际压力+,=实际压力,例如,当实际压力值是时,将设定为,为。
将流速更改成min并观看压力,当实际压力超过所设定的值时,应该显现ERRORP-MAX;按CE清除ERRORP-MAX,将流速重设为1ml/min,并再次按下pump从头开始送液,当压力稳固后,将流速更改成min。
实际压力应该下跌至低于所设定的值,并在几秒钟后显现ERRORP-MIN。
按CE清除ERRORP-MIN。
检查评判标准:
显现ERRORP-MAX和ERRORP-MIN。
.7.漏液传感器测试:
检查漏液传感器的操作。
检查步骤:
从初始屏幕按VP四次,出VALIDATION,按back一次以显示LEAKSENSORTEST,检查漏液传感器LEAKSENSORTEST,用充满水的注射器弄湿漏液传感器底部的湿度传感器,约10秒钟左右,按enter显示测试结果。
检查评判标准:
屏幕上显现SENSORGOOD。
(注意:
在弄湿漏液传感器后,清完全擦干漏液托盘上的水。
.8.流速准确度测试:
利用容量瓶检查流速准确度。
检查步骤:
将电阻管连接到泵出样口,而不是HPLC色谱柱。
在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相,在初始屏幕上按func以激活流速的设定,按1和enter将流速设定为1ml/min,重复按func直到显现PARAMETER并按enter,重得按func直到显现COMP,然跋文录下当前的COMP值。
按和enter将COMP设定。
按pump送液至少5分钟。
在送液进程中,泵指示灯亮;从初始屏幕按VP四次,显现VALIDATION,按func五次直到显现FLOWCHECK并按enter。
在预备好进行测量时再按enter,将管路的结尾插入容量瓶或量筒,然后开始测量。
关于容量瓶:
在第一滴水一开始此刻进入容量瓶的管路结尾就开始计时。
在注入5ml水时停止计时表。
关于量筒:
使管路的结尾进入量筒并接触筒壁,确信量筒内一个适合的水平面,在该位置达到确信的开始平面时开始计时,在注入5ml水时停止计时表。
(注意:
在整个测量进程中,务必使管路的结尾维持在量筒的水面以上。
)通过数字键盘输入已经测量的时刻并按enter,显示流速准确度(%)和通过/失败状态。
检查评判标准:
±%之内。
检查后重设:
重复按func直到显现PARAMETER,然后按enter。
重复按func或back直到显现COMP,改回第6步中记录的值。
.9.高压梯度系统的梯度浓度准确度测试:
检查高压梯度系统的梯度浓度准确度。
检查步骤:
在混合器出样口()和检测器之间连接电阻管,关于流动相,预备纯化水作为流动相A,预备咖啡因溶液(10mg/L)作为流动相B(各500ml)。
流动相脱气,打开排液阀并按泵A和B的purge以改换每一个泵的流路,按如下所述设定送液条件,并按pump开始送液至检测器基线稳固。
总流速=3ml/min,流动相B浓度=50%;按如下所述设定操纵设备的参数,并送液至基线稳固:
泵系统送液模式
流速min
流动相B的浓度%
UV检测器波长272nm
RESPONSE3
AUXRANGE2V)
LCsolution时自动设定强度轴
输入表中给出的时刻程序,该程序将产生如右图所示的操作模式。
利用了系统操纵器或LC工作站,应从每一个菜单都选择时刻程序成立该程序。
TIMEFUNCVALUE
STOP
VP功能的GETESTPROGRAM能够将时刻程序自动复制到指定的文件。
设定不时刻程序以检查梯度模式的浓度准确度GETESTPROGRAM。
将基线归零,开始进行梯度时刻程序。
在以下浓度位置记录吸光度级别,并用该数据计算实际的浓度。
(注意:
在基线稳固时测定信号级别)
计算方式:
10%的实际浓度
=
50%的实际浓度
=
90%的实际浓度
=
若是高压梯度系统利用3种液体,那么用流动相C(泵C)替换流动相B(泵B),并一样测试。
检查评判标准:
设定值的±%之内
.系统认证:
LC系统由许多单独的组件组成,系统认证是为了确认每一组件的功能及整个系统的性能,在安装时进行系统认证,以后应该按期进行。
5.3.1.等度LC系统认证:
进行分析以获取每次峰的保留时刻和峰面积。
检查获取的数据以检查系统可重现性。
可重现的数据用于认证系统。
通常,同意认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统操纵器和数据处置机(或色谱工作站)。
5.3.1.
5.3.1.检查LC系统中的所有缆线连接是不是正常。
5.3.1..检查LC系统管路
并短于300mm,使色谱柱外的死体积尽可能小。
5.3.1..利用下面一种方式清洗系统流路
在清洗流路前,从系统中取下色谱柱,并利用二通连接色谱柱的进样口和出样口,关于新系统第一用异丙醇清流行流路,然后用水清洗,在每种情形下,使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。
关于利用水溶液与有机溶剂的混合剂,或水与易溶于水的有机溶剂(如甲醇、乙腈)作为流动相系统用水清洗流路。
使水以2ml/min的流速流动10分钟。
5.3.1..清洗完成后,将流动相(水与甲醇的混合剂(3/2,V/V)注入贮液瓶,然后将色谱柱从头连接到LC系统。
5.3.1.
5.3.1..将送液流速设定为1ml/min,色谱柱柱温箱的温度设定为40℃。
5.3.1..按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven,开始送液和温度调剂。
5.3.1..设定检测器参数(272nm),进样器参数(进样体积),数据处置参数。
5.3.1..监视基线,基线平稳后,按检测器zero键,然后注入20ul流动相并确认没有观看到峰。
5.3.1..注入测试标准样(20mg/L的咖啡因溶液)6次,并分析获取的数据。
利用手动进样器时,样品的进样量应为定量管体积的5倍。
5.3.1..从6次分析得出峰数据中,计算出保留时刻和峰面积和相对标准误差
RSD=
其中:
SD为标准误差,X为平均值
5.3.1.3.检查评判标准:
保留时刻的RSD绝不能超过%;峰面积的RSD绝不能超过%;峰高的RSD绝不能超过%。
5.3.2.认证梯度LC系统
进行分析以获取每次峰的保留时刻和峰面积。
检查获取的数据以检查系统可重现性。
可重现的数据用于认证系统。
通常,同意认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统操纵器和数据处置机(或色谱工作站)。
5.3.2
5.3.2..检查LC系统中的所有缆线连接是不是正常。
5.3.2..检查LC系统管路
并短于300mm,使色谱柱外的死体积尽可能小。
5.3.2..利用下面一种方式清洗系统流路。
在清洗流路前,从系统中取下色谱柱,并利用二通连接色谱柱的进样口和出样口,关于新系统第一用异丙醇清流行流路,然后用水清洗,在每种情形下,使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。
关于利用水溶液与有机溶剂的混合剂,或水与易溶于水的有机溶剂(如甲醇、乙腈)作为流动相系统用水清洗流路。
使水以2ml/min的流速流动10分钟。
5.3.2..清洗完成后,将流动相(A:
水,B:
乙腈)注入贮液瓶,然后将色谱柱从头连接到LC系统。
5.3.2.2.认证步骤
5.3.2.将送液流速设定为1ml/min,流动相B的浓度参数设定为50%;色谱柱柱温箱的温度设定为40℃。
梯度洗脱时刻程序如下:
TIMEFUNCVALUE
50
100
100
50
STOP
5.3.2..按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven,开始送液和温度调剂,检查流经检测器出样品管路的液体流,确认所有连接处都没有漏液。
5.3.2..设定检测器参数(254nm),进样器参数(进样体积),数据处置参数。
5.3.2..监视基线,基线平稳后,按检测器zero键,然后注入20ul流动相并确认第二次没有观看到峰。
5.3.2..注入测试标准样(含1mg/100ml的吡啶和1mg/100ml的蒽乙腈溶液)6次,并分析获取的数据。
5.3.2..从6次分析得出峰数据中,计算出保留时刻和峰面积和相对标准误差
RSD=
其中:
SD为标准误差,X为平均值
5.3.1.3.检查评判标准:
保留时刻的RSD绝不能超过%;峰面积RSD绝不能超过%;峰高的RSD绝不能超过%。
.若是系统不能达到系统认证的标准,或某一硬件没能达到硬件认证标准,要进行如下处置:
5.4.1.检查是不是有达到其利用寿命的消耗件,若是必要,检查而且改换这些消耗件。
5.4.2.排除故障
可能是由于一些小问题如气泡致使系统不能达到认证标准,排除故障的目的确实是检查这种故障,而且采取适当方法排除所发觉的故障。
3.若是不能确信缘故民,请与岛津公司本地办事处或代理商联系。
6.校正
.检测器的波长准确度度校正
测量由水银灯和氘灯产生的发射谱线光谱中的峰波长,并对波长进行校正以将波长变更最小化。
.用泵传送水、甲醇或乙腈通过流通池,或用注射器和注射器适配器将三种液体之一注入流通池。
确保流通池中没有气泡,然后再流通池装入检测器中。
.按CE直到显示初始屏幕,重复按VP直到显示CALIBRATION,按func显现密码输入屏幕,输入密码(00000),重复按func直到显示WAVECALIB,按enter,波长准确度校正自动运行。
.校正终止后屏幕上显现Calibrated,确认校正已经成功完成。
.吸光度准确度校正
校正吸光度准确度,以便最小化屏幕上显示的吸光度值(当存在测试的吸光度校正过滤器时)与过滤器的吸光度值之间的不同。
.重复按CE直到显示初始屏幕,设定仪器为单波长模式,按func,显现PARAMETER,重复按func直到显示LAMP,按1,这将打开氘灯。
.重复按CE直到显示CALIBRATION,按func,显现密码输入屏幕,输入密码(00000),重复按func直到显示ABSCALIB。
.ABSCALIBSetFILHOLDER和ABSCALIBEntertoCalib将交替显示,取下标准流通池,将过滤器固定座安装到检测器上,并用盖盖住过滤器固定座。
.按enter,大约10秒后,ABSCALIBInsertFilter和ABSCALIBInputClibValue将交替显示,插入吸光度校正过滤器并用盖盖住。
.输入245nm处的6nm带宽吸光度值0.***,该值印在吸光度过滤器附带的合格证明上,按enter,2分钟后Calibrating标识更改成Calibrated,校正完成。
.遵循以下步骤确认校正已经完成:
从过滤器固定座下取下吸光度校正过滤器,并装上过滤器固定座盖,设定波长245nm,按CE两次返回初始屏幕,按zero,确保显屏幕上显示的吸光度是0;插入吸光度校正过滤器,然后装上盖子,记录初始屏幕上显示的吸光度值;确认显示的吸光度值和245nm处6nm带宽吸光度值间的不同,印制在吸光度校正过滤器的合格证明上。
.吸光度线性度校正
当充满具有极高吸光度溶液的流通池,测量传送通过流通池的光强度并更正吸光度线性度。
.设定检测器为单波长模式,波长为272nm,AUXRANGE为4(4AU/FS),RESPONSE为10(2sec.)而且LAMP为1(氘灯).
.用泵传送甲醇通过流通池,确保基线已稳固,并按zero,重复按CE直到显示初始屏幕,重复按VP直到显示CALIBRATION。
.按func显现密码输入屏幕,输入密码(00000),重复按func直到显示LINERCALIB,按1,然后按enter,显示Calibrated后,按func或back以更改显示。
.重复按func或back直到显示LINERCALIB,注入咖啡因+甲醇溶液(浓度:
90mg/L)到流通池中,利用工具为注射器和注射器适配器,按2,然后按enter。
.屏幕上显现Calibrated后,关闭电源开关并再次打开,检测重视新启动而且补偿开始生效。
.传送甲醇通过流通池,完全清洗掉咖啡因+甲醇溶液,确认校正已经完成。
7验证结果评定与结论
QC负责搜集各项验证、实验结果记录,起草验证报告,报验证小组。
验证小组负责对验证结果进行综合评审,做出验证结论。
8.验证周期及拟订再验证项目
质量部负责依照设备仪器情形,确信再验证周期项目及周期(6个月或1年),报验证小组审核。
如仪器因显现严峻故障而改换零部件,那么需要进行再验证。
验证内容包括:
以上内容。
LC-20A高效液相色谱仪
验证记录目录
附表1:
仪器安装条件检查记录
附表2:
硬件检查记录
附表3:
检测器校正记录
附表4:
等度LC系统认证记录
附表5:
梯度LC系统认证记录
附表1
仪器安装条件检查记录
设备名称
型号
安装条件要求
实际安装条件
温度
4~35℃
湿度
45-85%
电
220±10V,50HZ
其它条件
1.充分通风,附近无火源(当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时,房间应充分通风;当使用易燃溶液时,严禁室内使用明火或其它火源);
-35℃,日温度变化要小(不超过2℃);
5~85%,无灰尘及腐蚀性气体;
4.没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调。
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表2
硬件件认证检查记录
检查项目
检查评判标准
结果
结论
柱温箱温度准确度检查
屏幕如显示“ACCURACYGOOD”表示结果满足要求。
柱温箱漏液传感器的功能检查
可接受的标准为屏幕必须显示“SENSORGOOD”。
泵的ROM、RAM自检
屏幕显示ROMOK/RAMOK。
泵的.固件版本检查:
出现版本号。
版式本号与所管理的号码相同。
泵的显示、LED测试
屏幕上的所有点和LED都亮
泵的流速的控制参数
出现参数。
泵的送液稳定性测试
压力波动幅度的测量结果不超过。
泵的压力限制器测试
出现ERRORP-MAX和ERRORP-MIN。
泵的漏液传感器测试
屏幕上出现SENSORGOOD
泵的流速准确度测试
±%以内。
泵的高压梯度系统的梯度浓度准确度测试
设定值的±%以内
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表3
SPD-20A检测器的校正记录
设备名称
型号
温度:
湿度:
波长准确度校正
吸光度准确度度校正
吸光度线性度校正
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表4
等度LC系统认证记录
设备名称
型号
测试项目
标准规定
实测结果
结论
保留时间的RSD
≤%
峰面积的RSD
%
峰高的RSD
%
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表4
梯度LC系统认证记录
设备名称
型号
测试项目
标准规定
实测结果
结论
保留时间的RSD
≤%
峰面积的RSD
%
峰高的RSD
%
检查人
复核人
检查日期
年月日
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