水发产品中甲醛的快速检测KJ04.docx
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水发产品中甲醛的快速检测KJ04
附件4
水发产品中甲醛的快速检测
(KJ201904)
1 范围
本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。
本方法适用于银鱼、鱿鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。
AHMT法(比色卡法)
2 原理
试样中的甲醛经提取后,在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(AHMT)发生缩合,再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4,3-b]-S-四氮杂苯的紫红色络合物,其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关,通过色阶卡进行目视比色,对试样中甲醛进行定性判定。
3 试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。
3.1 试剂
3.1.1 氢氧化钾(KOH)。
3.1.2 盐酸(HCl)。
3.1.3 亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6·3H2O)。
3.1.4 乙酸锌( C4H6O4Zn·2H2O)。
3.1.5 冰乙酸(C2H4O2)。
3.1.6 乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2O8Na2·2H2O)。
3.1.7 高碘酸钾(KIO4)。
3.1.8 4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(C2H6N6S,AHMT)。
3.1.9 氢氧化钾溶液(5mol/L):
称取280.5g氢氧化钾(3.1.1),用水溶解并定容至1000mL,混匀。
3.1.10 氢氧化钾溶液(0.2mol/L):
称取11.22g氢氧化钾(3.1.1),用水溶解并定容至1000mL,混匀。
3.1.11 盐酸溶液(0.5mol/L):
量取41mL盐酸(3.1.2),用水稀释并定容至1000mL,混匀。
3.1.12 亚铁氰化钾溶液(106g/L):
称取10.6g亚铁氰化钾(3.1.3),用水溶解并定容至100mL,混匀。
3.1.13 乙酸锌溶液(220g/L):
称取22g乙酸锌(3.1.4),加入3mL冰乙酸(3.1.5)溶解,用水稀释并定容至100mL,混匀。
3.1.14 乙二胺四乙酸二钠溶液(100g/L):
称取10g乙二胺四乙酸二钠(3.1.6),用5mol/L氢氧化钾溶液(3.1.9)溶解,并定容至100mL,混匀。
3.1.15 AHMT溶液(5g/L):
称取0.5g4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(3.1.8),用0.5mol/L盐酸溶液(3.1.11)溶解,并定容至100mL,混匀后置于棕色瓶中,有效期6个月。
3.1.16 高碘酸钾溶液(15g/L):
称取1.5g高碘酸钾(3.1.7),用0.2mol/L氢氧化钾溶液(3.1.10)溶解,并定容至100mL,混匀。
3.2 参考物质
甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1。
表1甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相对分子量
甲醛
Formaldehyde
50-00-0
HCHO
30.03
3.3 标准溶液的配制
3.3.1 甲醛标准储备液(100µg/mL):
安瓿瓶封装,冷藏、避光、干燥条件下保存。
使用前恢复至室温,摇匀备用。
安瓿瓶打开后应一次性使用完毕。
3.3.2 甲醛标准工作液(10µg/mL):
吸取甲醛标准储备液(100µg/mL)(3.3.1)1.0mL,置于10mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,临用前配制。
3.4 材料
3.4.1 甲醛快速检测试剂盒(AHMT法-比色卡法):
适用基质为水发产品及其浸泡液,需在阴凉、干燥、避光条件下保存。
3.4.2 滤纸:
中速定性滤纸。
4 仪器和设备
4.1 移液器:
200µL,1mL,5mL。
4.2 涡旋混合器。
4.3 电子天平或手持式天平:
感量为0.01g。
4.4 离心机:
转速≥4000r/min。
4.5 环境条件:
温度15℃~35℃,湿度≤80%。
5 分析步骤
5.1 试样制备
取适量有代表性试样的可食部分或浸泡液,固体试样剪碎混匀,液体试样需充分混匀。
5.2 试样的提取
准确称取试样1g(精确至0.01g)或吸取试样1.0mL,置于15mL离心管中,加水定容至10mL,涡旋提取1min,静置5min,取上清液作为提取液(如上清液浑浊,加入1mL亚铁氰化钾溶液(3.1.12)和1mL乙酸锌溶液(3.1.13),涡旋混匀,4000r/min离心5min或滤纸过滤,取上清液或滤液作为提取液)。
5.3 测定步骤
准确移取提取液2mL于5mL离心管中,加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液(3.1.14)和0.4mLAHMT溶液(3.1.15),涡旋混匀后静置10min,再加入0.1mL高碘酸钾溶液(3.1.16),涡旋混匀后静置5min,立即与标准色阶卡目视比色,10min内判读结果。
进行平行试验,两次测定结果应一致,即显色结果无肉眼可辨识差异。
5.4 质控试验
每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。
用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。
5.4.1 空白试验
称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样1.0mL,按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
5.4.2 加标质控试验
准确称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样1.0mL,置于15mL离心管中,加入0.5mL甲醛标准工作液(10µg/mL)(3.3.2),使试样中甲醛含量为5mg/kg,按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
6 结果判定要求
观察检测管中样液颜色,与标准色阶卡比较判读试样中甲醛的含量。
颜色浅于检出限(5mg/kg)则为阴性试样;颜色接近或深于5mg/kg则为阳性试样。
色阶卡见图1。
图1甲醛标准色阶卡
质控试验要求:
空白试验测定结果应为阴性,质控试验测定结果应与比色卡第二点(5mg/kg或mg/L)颜色一致。
7 结论
由于色阶卡目视判读存在一定误差,为尽量避免出现假阴性结果,读数时遵循就高不就低的原则。
当测定结果为阳性时,应对结果进行确证。
8 性能指标
8.1 检测限
5mg/kg或mg/L。
8.2 灵敏度
灵敏度应≥95%。
8.3 特异性
特异性应≥85%。
8.4 假阴性率
假阴性率应≤5%。
8.5 假阳性率
假阳性率应≤15%。
注:
性能指标计算方法见附录A。
AHMT法(分光光度法)
9 原理
试样中的甲醛经提取后,在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(AHMT)发生缩合,再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4,3-b]-S-四氮杂苯的紫红色络合物,其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关,用分光光度计在550nm处测定吸光度值,与标准系列比较定量,得到试样中甲醛的含量。
10 试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。
10.1 试剂
同3.1。
10.2 参考物质
同3.2。
10.3 标准溶液的配制
同3.3。
10.4 材料
10.4.1 甲醛快速检测试剂盒(AHMT法-分光光度法):
适用基质为水发产品及其浸泡液,需在阴凉、干燥、避光条件下保存。
10.4.2 滤纸:
中速定性滤纸。
11 仪器和设备
11.1 移液器:
200µL,1mL,5mL。
11.2 涡旋混合器。
11.3 电子天平或手持式天平:
感量为0.01g。
11.4 离心机:
转速≥4000r/min。
11.5 分光光度计或相应商品化测定仪。
11.6 环境条件:
温度15℃~35℃,湿度≤80%。
12 分析步骤
12.1 试样制备
同5.1。
12.2 试样的提取
同5.2。
12.3 测定步骤
准确移取提取液(12.2)2mL置于5mL离心管中,另准确吸取10µg/mL的甲醛标准工作液(3.3.2)0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL(相当于0µg、1µg、2µg、4µg、6µg、8µg、10µg甲醛)分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中,加水定容至2mL,涡旋混匀。
于标准管和试样管中分别加入0.4mL乙二胺四乙酸二钠溶液(3.1.14)和0.4mLAHMT溶液(3.1.15),涡旋混匀静置10min,再加入0.1mL高碘酸钾溶液(3.1.16),静置5min后用1cm比色杯,以零管调节零点,于波长550nm处测定吸光度,绘制标准曲线比较。
同时做试剂空白。
12.4 质控试验
每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。
12.4.1 空白试验
称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样1.0mL,按照12.2和12.3步骤与试样同法操作。
12.4.2 加标质控试验
准确称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样1.0mL,置于15mL离心管中,加入0.5mL甲醛标准工作液(10µg/mL)(3.3.2),使试样中甲醛含量为5mg/kg,按照12.2和12.3步骤与试样同法操作。
13 分析结果的表述
13.1 结果计算
试样中甲醛的含量按式
(1)计算:
………………………………
(1)
式中:
X——试样中甲醛的含量,单位为毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/L);
ρ——由标准曲线得到的试样提取液中甲醛的含量,单位为微克(µg);
ρ0——由标准曲线得到的空白提取液中甲醛的含量,单位为微克(µg);
V——试样定容体积,单位为毫升(mL);
V1——测定用试样体积,单位为毫升(mL);
m——试样的取样量,单位为克或毫升(g或mL);
1000——单位换算系数。
计算结果保留两位有效数字。
13.2 结果判定
当测定结果≥5mg/kg或mg/L时,判定为阳性,阳性结果的试样需要重复检验2次以上。
13.3 质量控制要求
空白试验测定结果应为阴性,加标质控试验测定结果回收率应≥60%。
14 结论
当测定结果为阳性时,应对结果进行确证。
15 性能指标
15.1 检测限
5mg/kg或mg/L。
15.2 灵敏度
灵敏度应≥95%。
15.3 特异性
特异性应≥85%。
15.4 假阴性率
假阴性率应≤5%。
15.5 假阳性率
假阳性率应≤15%。
注:
性能指标计算方法见附录A。
乙酰丙酮法(分光光度法)
16 原理
试样中的甲醛经提取后,在沸水浴条件下与乙酰丙酮发生反应,生成黄色物质,其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量成正相关,用分光光度计在413nm处测定吸光度值,与标准系列比较定量,得到试样中甲醛的含量。
17 试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。
17.1 试剂
17.1.1 无水乙酸钠(CH3COONa)。
17.1.2 乙酰丙酮(C5H8O2)。
17.1.3 乙酰丙酮溶液:
称取25.0g无水乙酸钠(17.1.1)溶于适量水中,移入100mL容量瓶中,加0.40mL乙酰丙酮(17.1.2)和3.0mL冰乙酸(3.1.5),加水定容至刻度,混匀,移至棕色试剂瓶中,2℃~8℃保存,有效期1个月。
17.2 参考物质
同3.2。
17.3 标准溶液配制
同3.3。
17.4 材料
17.4.1 甲醛快速检测试剂盒(乙酰丙酮法-分光光度法):
适用基质为水发产品及其浸泡液,需在阴凉、干燥、避光条件下保存。
17.4.2 滤纸:
中速定性滤纸。
18 仪器和设备
18.1 移液器:
200µL,1mL,5mL。
18.2 涡旋混合器。
18.3 电子天平或手持式天平:
感量为0.01g。
18.4 离心机:
转速≥4000r/min。
18.5 水浴锅。
18.6 分光光度计或相应商品化测定仪。
18.7 环境条件:
温度15℃~35℃,湿度≤80%。
19 分析步骤
19.1 试样制备
同5.1。
19.2 试样的提取
同5.2。
19.3 测定步骤
准确移取提取液(19.2)2mL置于5mL离心管中,另准确吸取10µg/mL的甲醛标准工作液(3.3.2)0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL(相当于0µg、1µg、2µg、4µg、6µg、8µg、10µg甲醛)分别置于5mL带刻度的具塞刻度试管中,加水定容至2mL,涡旋混匀。
于标准管和试样管中分别加入0.2mL乙酰丙酮溶液(17.1.3)涡旋混匀后沸水浴5min,取出冷却至室温后用1cm比色杯,以零管调节零点,于波长413nm处测定吸光度,绘制标准曲线比较。
同时做试剂空白。
19.4 质控试验
每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。
19.4.1 空白试验
称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样1.0mL,按照19.2和19.3步骤与试样同法操作。
19.4.2 加标质控试验
准确称取空白试样1g(精确至0.01g)或吸取空白试样1.0mL,置于15mL离心管中,加入0.5mL甲醛标准工作液(10µg/mL)(3.3.2),使试样中甲醛含量为5mg/kg,按照19.2和19.3步骤与试样同法操作。
20 分析结果的表述
20.1 结果计算
同13.1。
20.2 结果判定
同13.2。
20.3 质量控制要求
同13.3。
21 结论
当测定结果为阳性时,应对结果进行确证。
22 性能指标
22.1 检测限
5mg/kg或mg/L。
22.2 灵敏度
灵敏度应≥95%。
22.3 特异性
特异性应≥85%。
22.4 假阴性率
假阴性率应≤5%。
22.5 假阳性率
假阳性率应≤15%。
注:
性能指标计算方法见附录A。
23 其他
本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便,在使用本方法时不作限定。
方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前,须对其进行考察,应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比标准为SC/T3025-2006《水产品中甲醛的测定液相色谱法》或其他现行有效的甲醛检测标准。
附录A
快速检测方法性能指标计算表
表A.1性能指标计算表
试样情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性c
N11
N12
N1.=N11+N12
阴性
N21
N22
N2.=N21+N22
总数
N.1=N11+N12
N.2=N21+N22
N=N1.+N2.或N.1+N.2
显著性差异(х2)
2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度(df)=1
灵敏度(p+,%)
p+=N11/N1.
特异性(p-,%)
p-=N22/N2.
假阴性率(pf-,%)
pf-=N12/N1.=100-灵敏度
假阳性率(pf+,%)
pf+=N21/N2.=100-特异性
相对准确度,%d
(N11+N22)/(N1.+N2.)
注:
a由参比方法检验得到的结果或者试样中实际的公议值结果;
b由待确认方法检验得到的结果。
灵敏度的计算使用确认后的结果。
用于确认方法时,结果≥5mg/kg时,判定为阳性(仅用于计算性能指标);
c本方法规定:
用于计算灵敏度和假阴性率的阳性试样,由参比方法检验得到的结果回收率应≥60%。
N:
任何特定单元的结果数,第一个下标指行,第二个下标指列。
例如:
N11表示第一行,第一列,N1.表示所有的第一行,N.2表示所有的第二列;N12表示第一行,第二列。
d为方法的检测结果相对准确性的结果,与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。
本方法负责起草单位:
南京工业大学(国家轻工业食品质量监督检测南京站)
验证单位:
南京市产品质量监督检验院、厦门市食品药品质量检验研究院、江西省药品检验检测研究院
主要起草人:
熊晓辉、汪开银、聂小林、肖有玉、骆和东、章红
- 配套讲稿:
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- 特殊限制:
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- 关 键 词:
- 水发 产品 甲醛 快速 检测 KJ04