最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx
- 文档编号:1334168
- 上传时间:2022-10-20
- 格式:DOCX
- 页数:35
- 大小:3.25MB
最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx
《最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx(35页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程
AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程
文件名称
AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程
使用维护标准操作规程
颁发部门
制订人:
复核人:
批准人:
质保部
制订日期:
复核日期:
批准日期:
执行日期
版本
1.0
编号
SOP04006
制作份数
_____份
发送部门
修订记录
修订人
修订原因
修订内容
版本
修订日期
1.目的:
确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用,保证扩增及结果分析的标准化、标准化。
2.范围:
适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。
3.定义:
无
4.职责:
荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。
质保部对本规定的有效执行承当监督检查责任。
5.内容:
5.1室内温度控制在15~30℃,相对湿度45~75%。
5.2仪器操作
5.2.1依次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入Windows界面。
5.2.2接着翻开AB7500仪器电源开关,预热10分钟。
5.2.3点击7500Softwarev2.3图标,翻开软件。
5.2.4按压仪器托盘上的按压位,待托盘弹出后,将所需检测的8联PCR反响管或者96孔PCR反响板放入检测孔位,记下放置位置。
检测8联PCR反响管用**反响孔模块,检测96孔PCR反响板用**反响孔模块。
〔检测8联PCR反响管需放入盖紧管盖的空8联PCR反响管配平,检测96孔PCR反响板无需配平〕
5.2.5再次按压托盘使其滑入仪器。
5.2.6新建扩增参数模板:
例如新建一个UG-63-62的模板,扩增参数是95°,10′;〔95°,10″;63°,45″〕×5cycles;〔95°,10″;62°,35″〕×40cycles,在62°时收集荧光信号〔HEX、FAM信号〕,20μl反响体系。
5.2.6.1在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples中,将TargetName下的Target1改成FAM;点击AddNewTarget,将新增的Target1改成HEX,点击Reportee下拉菜单,选择VIC。
5.2.6.2在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20
5.2.8在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置,全部勾选Sample1;UGT1A1*6勾选HEX,UGT1A1*28勾选FAM。
5.2.9在Run-AmplificationPlot中点击STARTRUN,命名为20220221-1〔当日日期+当日上机次数,例:
2022年1月1日第1次上机编号为20220221-1〕,保存在默认文件夹中,开始运行。
5.2.10结果分析
5.2.10.1PCR反响结束后自动保存结果,对扩增曲线进行分析。
5.2.10.2也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以〔用户可根据实际情况自行调整,Start值可以在3~15、End值可设在5~20〕,Threshold值〔Rn〕推荐设定为5000~15000,点击Analyze进行分析,然后到Plate窗口下记录每个反响的Ct值。
5.2.11实验结束后取出反响管〔切勿翻开管盖〕,顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源,关闭电脑。
5.3仪器维护
5.3.1每周维护
5.3.1.1检查计算机磁盘空间。
如需要,将实验文件归档或备份。
•至少每周检查一次计算机磁盘空间。
•如果硬盘的可用空间缺乏其总容量的20%,应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。
5.3.1.2关闭控制7500Instrument的计算机,30秒后再次开启计算机。
5.3.1.3用无绒布块〔不脱毛〕蘸取75%酒精清洁7500Instrument的外表。
〔注:
切勿使用有机溶剂清洁7500Instrument。
〕
5.3.1.4使用75%酒精浸泡反响管托架〔晾干后放回仪器内〕。
5.3.2每月维护
5.3.2.1执行背景校准。
〔可执行一次背景校准以检查是否存在污染物〕
5.3.2.2运行磁盘清理和磁盘碎片整理。
•至少每月一次。
•当Windows®操作系统显示消息提示执行碎片整理时。
•切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500Real-TimePCRSoftware。
5.3.3每半年〔6个月〕维护
5.3.3.1检查灯具状态。
①在7500Software中,选择Instrument→LampStatus/Replacement以确定卤素灯的状态。
显示LampStatus/Replacement对话框:
•Condition–表示以下其中一种状况:
–Good–灯具工作良好,不需要更换。
单击Close。
–Failed–必须更换灯具。
单击Close,然后按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。
–ChangeSoon–灯具使用超过2000小时;生产商建议将其更换。
单击Close,然后决定是否更换灯具。
如果断定更换,请按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。
•Usage(Hours)–灯具已照明的总小时数。
•LampCurrent–灯具的输出电流,以安培为单位(A)。
低电流意味着灯具可能将要失效。
•DateLastReplaced–上次更换灯具的日期。
②在执行一次运行之前或期间,7500Software可能显示以下警告:
消息
描述
Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.
在运行开始时,灯具电流低于可接受水平。
在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前,无法继续该运行。
Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.
7500Software停止了该次运行,因为在运行中灯具电流下降到可接受水平之下。
在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前,无法继续该运行。
在消息框中单击OK,检查仪器日志,然后更换灯具。
Warning-Thelampusagehasexceeded2000hr.Werecommendreplacingthelampsoontoensureoptimalassayperformance.
在运行开始时,灯具使用时间超过2000小时。
单击CancelRun,然后更换灯具,或者单击ContinueRun。
重新运行ROI、背景、光学和染料校准。
5.3.3.2执行目标区〔ROI〕校正。
5.3.3.3执行背景校准。
5.3.3.4执行光学校准。
5.3.3.5执行染料校准。
5.3.3.6执行RNaseP仪器验证试验。
5.3.4其它维护任务〔需要时执行〕
5.3.4.1样本块污染去除。
执行以下程序,去除7500Instrument样本块的荧光污染。
荧光污染是导致背景运行失败的常见原因,在此情况下,一个或多个反响孔会持续表现出异常的高信号。
注意!
切勿移去设备上的盖板。
7500Instrument中没有用户可平安维修的组件。
如果疑心存在问题,请联系生产商效劳代表。
①全程戴上一次性无粉手套操作。
②找到样本块中受污染的反响孔〔参阅5.4.2.13“如何确定污染〞〕。
③从7500Real-TimePCRInstrument中取出反响板和托盘支架。
a.按压托盘门,将其翻开。
b.取出反响板和托盘支架。
c.关闭托盘门。
以一定角度向托盘右侧施加压力。
④手动降低样本块:
a.在7500Software中,选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager。
b.在InstrumentMaintenanceManager的ROI选项卡中,单击StartManualCalibration。
c.在ROIInspector对话框中,单击MoveBlock。
d.当ROIInspector对话框显示“BlockDown〞时,单击Done。
⑤关闭7500Real-TimePCRInstrument,然后拔下其电源电缆。
允许仪器冷却15分钟。
⑥翻开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。
a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔内,然后推动以解开门栓。
b.翻开仪器前门。
⑦抬起门栓,然后将受热的护盖门推到仪器的反面。
⑧使用少量的双蒸水,清洁样本块中被污染的反响孔:
a.用移液管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反响孔中。
b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次,以冲洗反响孔。
c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。
d.使用棉花拭子,擦试每个被污染的反响孔的内壁。
e.使用无绒布料,吸出剩余的双蒸水。
⑨7500Real-TimePCRInstrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。
抬起门栓,然后将受热的护盖门紧固到交叉杆。
⑩翻开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。
⑪插上电源插头并开启7500Instrument。
⑫通过执行背景校准运行确认已消除污染〔参阅5.4.2“背景校准〞〕。
⑬如果污染仍然存在,重复步骤②至⑦,然后使用95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反响孔:
a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反响孔中。
b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次,以冲洗反响孔。
c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。
重要!
使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后,应始终使用双蒸水冲洗反响孔。
⑭重复步骤⑧至⑫,以冲洗样本块的反响孔,并验证已去除掉污染物。
⑮如果污染仍然存在,重复步骤②至⑦,然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反响孔:
a.用移液管吸取少量10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反响孔中。
b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次,以冲洗反响孔。
c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。
重要!
使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后,应始终使用去离子水冲洗反响孔。
⑯重复步骤⑧至⑫,以冲洗样本块的反响孔,并验证已去除掉污染物。
如果仍有污染,请与生产商技术支持联系。
⑰确保受热盖门完全关闭并上闩。
如果没有,那么7500Software显示错误消息。
5.3.4.2移动PCR仪。
〔更换或移动光学器件的任何部件后,必须执行ROI校准、背景校准、光学校准、染料校准以及RNaseP仪器验证。
〕
5.3.4.3更换卤素灯。
①全程戴上一次性无粉手套操作。
②关闭7500Instrument,然后拔下其电源电缆。
允许仪器冷却15分钟。
a.注意!
灼热。
7500Instrument和灯具灼热!
灯具在使用中会变得非常灼热。
在处理灯具之前,应允许灯具冷却15分钟,并戴上无粉防护手套。
b.重要!
为防止灼伤及缩短新灯具的使用寿命,处理灯具时请戴上一次性无粉手套。
c.注意!
7500Instrument按设计仅可使用12V、75
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 最新 AB7500 荧光 定量 PCR 使用 维护 校准 标准 操作规程
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)