胁迫对植物生长的影响Word格式.doc
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植物在遭受强酸、强碱胁迫时,原生质膜的半透性消失,对物质的通透性发生改变,细胞内容物外渗,进入周围环境中。
若将受害的组织浸入无离子水中,其外渗液中电解质和糖的含量比正常组织外渗液中含量增加。
用电导法和糖的显色反应测定PH胁迫对小麦膜系统(膜透性及膜脂过氧化作用的影响)的伤害程度和植物抗性的强弱。
植物器官在逆境下遭受伤害时,往往发生膜脂过氧化作用。
膜脂过氧化作用的产物比较复杂,其产物之一丙二醛(MDA)从膜上产生的位置释放出来后,可以与蛋白质、核酸反应,通常利用它作为膜脂过氧化作用指标,表示细胞膜过氧化作用程度和植物对逆境条件的反应强弱。
用双组分分光光度计法测定MDA含量的方法测定了PH胁迫对植物膜脂过氧化作用的影响,从而得出植物组织对PH胁迫的反映。
电导度概念:
水的导电能力的强弱程度,电导度反映了水中含盐量的多少,是水的纯净程度的一个重要指标。
水越纯净,含盐量越少,电阻越大,电导度越小。
超纯水几乎不能导电。
电导的大小等于电阻值的倒数,即S=1/R式中R为电阻,单位Ω;
S表示电导度,电导度的单位为西门子,代号用S,或μS表示,1S=106μS.
蒽酮法测定糖的原理:
糖类在浓硫酸的存在下脱水生成糠醛或这羟甲基糠醛。
然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合,生成蓝绿色的糠醛衍生物,颜色深浅与糖浓度成正相关。
三、仪器设备及材料
仪器设备:
电导仪、722型分光光度计、电子天平、电冰箱、温箱、水浴锅、烧杯、量筒、25ml比色管、试管、紫外可见分光光度计、研钵、剪刀、镊子、石英砂、10mL离心管、TDL-5000B型低速多管离心机、10mL和2mL移液管
材料及试剂:
1.经3种PH处理过的植物材料
2.10%三氯乙酸(TCA)、1.6%硫代巴比妥酸(TBA)
3.蒽酮试剂:
取1g经过纯化的蒽酮,溶解于1000ml稀硫酸中即得。
4.稀硫酸溶液:
由760ml浓硫酸(比重1.84)稀释至1000ml而成。
四、实验步骤
(1)样品的制备:
分别取3种PH处理过的小麦幼苗各10株,用镊子除去幼苗上残留的胚乳(种子)。
先用自来水冲洗,再用去离子水漂洗数次,以除去伤口上的物质。
分成三组分别用玻棒送入三个烧杯中,在每个烧杯中各加20ml去离子水,在室温下平衡20min,其间要不断摇动,使外渗物均匀分布在溶液中。
(2)测定
平衡结束后,摇匀,将电极插入溶液中(不要贴着材料和试管壁)测电导率。
(3)电导率的再测定
将装有样品的3个烧杯(加蒸去离子水使水位一致)置沸水浴煮沸10min,以杀死细胞,使其质膜差别透性丧失,冷却至室温后,以蒸馏水补加到原来的数量。
然后取出幼苗,摇匀后再测一次电导率,按以下公式计算伤害率
伤害率=
或伤害率=
2.MDA的提取:
称取剪碎的小麦叶片0.5g,加入2mL10%TCA和少量石英砂,研磨至匀浆,加1mLTCA进一步研磨,再加4mLTCA研磨,多次冲洗研钵,转入10mL离心管,匀浆以3000g离心10min,取上清液4mL为样品提取液。
吸取离心的上清液4mL(对照加4mL蒸馏水),加入4mL0.6%TBA溶液混匀,于沸水浴上反应15min,迅速于冰水中冷却后以3000g离心10min。
取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的分光度。
3.显色反应和测定:
经过一定时间处理后,取出样品,待溶液到达室温后,吸取溶液1ml于试管中,加入蒽酮试剂5ml,用滴管充分混匀后,于沸水浴中加热15min(如果溶液变绿,说明糖类存在)。
实验现象:
1.研磨过的小麦溶液呈淡褐色。
2.离心后的上清液中加入TBA,煮沸后溶液呈红棕色。
实验结果:
处理
电导率(us/cm)
伤害率
煮死前
煮死后
表1电导率法测定活体植物根系抗逆性记载表
电导率(
电解质
渗出率
煮死前煮死后
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