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1.将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。
2.将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
3.计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。
然后按公式计算:
细胞数/mL=四大格细胞总数/4×
104
说明:
公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:
1.0mm(长)×
1.0mm(宽)×
0.1mm(高)=0.1mm3
而1ml=1000mm3
(注意:
镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液)
细胞计数与存活测试
1.原理:
1.1.计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。
1.2.血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber中细刻9个1mm2大正方形,
其中4个角落之正方形再细刻16个小格,深度均为0.1mm。
当chamber上方
盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为1mm2x0.1mm=1.0x10-4ml。
使用时,计
数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以104,即为每ml中之细胞
数目。
细胞计数要点:
①进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于1×
107L-1,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。
②要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。
③取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确。
④数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照1个细胞计算。
如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计右线,不计左线。
⑤操作时,注意盖片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。
初学者易犯的错误:
计数前未将待测悬液吹打均匀。
滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。
滴入悬液时的量太多,至使细胞悬液流入旁边的槽中。
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