脆性X综合征诊断与治疗新进展优质PPT.ppt
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逃避行为,逃避注视、孤僻症、过度兴奋、注意力不集中或多动症、动作刻板、睡眠紊乱、语言发育也常受影响,多有轻度交流障碍;
躯体特征在不同年龄、不同个体中差异较大,成年男性患者可有特殊面容:
脸型狭长、大耳朵、眉弓及下颌突出,上述表现可随年龄的增加而愈加明显。
但有时即使是受累严重的典型未成年男性患者其面部特征也可表现轻微,往往难以引起人们的注意。
1FXS临床诊断方法新进展FXS是由于FMR-1基因5端(CGG)n重复系列大量扩展的结果,如果(CGG)n重复上升到230至1000次之间,就会产生FXS。
目前对于脆性X综合征的诊断主要依赖于实验室检查。
根据根据20052005年最新年最新ACMGACMG指南对于以下几种临床情况应进行分指南对于以下几种临床情况应进行分子生物学检测:
子生物学检测:
智力缺陷智力缺陷,发育迟缓发育迟缓,性格孤僻性格孤僻,行为体征疑为脆性行为体征疑为脆性XX综合综合征者;
征者;
具有不明原因的智力障碍者;
具有脆性具有脆性XX综合征家族史者;
综合征家族史者;
具有脆性具有脆性XX综合征或不明原因智力缺陷家族史,生育前进综合征或不明原因智力缺陷家族史,生育前进行遗传咨询者;
行遗传咨询者;
脆性脆性XX综合征携带者母亲的胎儿;
综合征携带者母亲的胎儿;
卵胞刺激素升高并伴有卵巢早衰的妇女,特别是具有不明卵胞刺激素升高并伴有卵巢早衰的妇女,特别是具有不明原因智力缺陷家族史者;
原因智力缺陷家族史者;
未明原因的新发震颤未明原因的新发震颤/小脑性共济失调患者,特别是伴有小脑性共济失调患者,特别是伴有不明原因的智力缺陷家族史者。
不明原因的智力缺陷家族史者。
FXS实验室诊断方法有细胞遗传学、Southern印迹杂交、聚合酶链反应(PCR)、RT-PCR和免疫组化分析11细胞遗传学检测该方法至尽今已发展成熟。
诊断的重要指标:
培养中期细胞该方法至尽今已发展成熟。
培养中期细胞染色体染色体Xq2.7Xq2.7显示脆性位点大于显示脆性位点大于4%4%为阳性。
甲氨蝶呤或为阳性。
甲氨蝶呤或5-5-氟氟脱氧尿苷可诱导出脆性位点提高显现率,与原位杂交荧光技脱氧尿苷可诱导出脆性位点提高显现率,与原位杂交荧光技术结合可分析检测数量和结构的异常并提高图谱分辨率至术结合可分析检测数量和结构的异常并提高图谱分辨率至1010万万bpbp。
fra(Xfra(X)并不是在所有的中期细胞中都能找到,标本来并不是在所有的中期细胞中都能找到,标本来源于外周淋巴细胞、羊水、绒毛或脐血。
一般智力低下男性源于外周淋巴细胞、羊水、绒毛或脐血。
一般智力低下男性患者患者fra(Xfra(X)的表达率为的表达率为10%30%10%30%。
年龄较大、表型正常的女。
年龄较大、表型正常的女性携带者可不表达,表达常低于性携带者可不表达,表达常低于5%5%。
故不用于对表型正常。
故不用于对表型正常的女性携带者的诊断。
该法费时费力、检出率低于的女性携带者的诊断。
该法费时费力、检出率低于50%50%,且,且只能对男性患者及部分女性患者做出诊断,不能检出不全显只能对男性患者及部分女性患者做出诊断,不能检出不全显性患者及女性杂合子,对于男性患者也易产生假阴性。
所以性患者及女性杂合子,对于男性患者也易产生假阴性。
所以应用较局限。
应用较局限。
12Southern印迹杂交法FXS5端的(CGG)n的异常扩增及CpG岛异常甲基化使其上的特异性酶切位点消失,需用限制性核酸内切酶识别、结合并切割特异性序列,产生不同长度的核酸片段,用于诊断。
根据待测片段的大小选择合适内切酶。
全突变使用HindIII或EcoRI可得到很强的杂交信号,不完全突变需使用PstI方可产生清晰的高分辨条带。
目前认为应用较远侧探针(目前认为应用较远侧探针(StB12.3StB12.3)对双酶解(如)对双酶解(如EcoRI/EagIEcoRI/EagI)DNADNA样本进行杂交,可检出全部前突样本进行杂交,可检出全部前突变和全突变等位基因及嵌合体状态,同时可了解甲变和全突变等位基因及嵌合体状态,同时可了解甲基化状态,是最可靠的诊断方法。
基化状态,是最可靠的诊断方法。
SouthernSouthern印迹杂印迹杂交法缺点为:
需要交法缺点为:
需要DNADNA样品多、需要同位素标记、样品多、需要同位素标记、操作复杂、费用大、耗时长、不易推广;
若酶解不操作复杂、费用大、耗时长、不易推广;
若酶解不完全会产生杂交带,可产生错误诊断;
较难鉴别完全会产生杂交带,可产生错误诊断;
较难鉴别(CGG)nCGG)n大的正常个体和小的前突变个体;
有较大的大的正常个体和小的前突变个体;
有较大的漏诊率和约漏诊率和约5%5%的误诊率。
的误诊率。
13聚合酶链反应技术为目前快速、准确检测(为目前快速、准确检测(CGGCGG)nn重复的方法,传统的聚合酶链反应重复的方法,传统的聚合酶链反应(PolymeraseChain(PolymeraseChainReaction,PCRReaction,PCR)技术可以检测正常个体及小片段的前技术可以检测正常个体及小片段的前突变等位基因的(突变等位基因的(CGGCGG)nn重复数。
对于较长片段的前突变及全突变患重复数。
对于较长片段的前突变及全突变患者,由于高的者,由于高的GCGC含量,序列内部易于形成发夹结构不易扩增,可利用甲含量,序列内部易于形成发夹结构不易扩增,可利用甲基化敏感性聚合酶链反应(基化敏感性聚合酶链反应(methylationmethylationsensitivePolymeraseChainsensitivePolymeraseChainReaction;
ms-PCRReaction;
ms-PCR),引入特异性的引物使扩增不出来的等位基因产生),引入特异性的引物使扩增不出来的等位基因产生smearsmear条带,通过不同的探针标记引物,利用毛细管电泳法检测条带,通过不同的探针标记引物,利用毛细管电泳法检测PCRPCR扩扩增产物,可以准确的检测(增产物,可以准确的检测(CGGCGG)nn重复数。
结合普通重复数。
结合普通PCRPCR及及ms-PCRms-PCR技术,可以鉴别正常个体、前突变、全突变男性及全突变女性。
由于技术,可以鉴别正常个体、前突变、全突变男性及全突变女性。
由于PCRPCR技术优先扩增较小片段的等位基因,因此对于呈嵌合型的患者,也技术优先扩增较小片段的等位基因,因此对于呈嵌合型的患者,也会产生会产生PCRPCR扩增产物,易于产生假阴性。
扩增产物,易于产生假阴性。
PCRPCR技术是快速筛查脆性技术是快速筛查脆性XX综综合征的基因诊断方案。
难以扩增出全突变的等位基因,因此限制了它对合征的基因诊断方案。
难以扩增出全突变的等位基因,因此限制了它对于脆性于脆性XX综合征患者临床诊断方面的应用,综合征患者临床诊断方面的应用,PCRPCR技术和技术和SothernblotSothernblot技术技术的联合应用,可以弥补相互之间的缺陷。
的联合应用,可以弥补相互之间的缺陷。
14逆转录聚合酶链反应技术绝大多数绝大多数FXSFXS征男性患者无征男性患者无FMR1FMR1基因的表达,而基因的表达,而女性患者的女性患者的FMR1FMR1基因是杂合的,基因是杂合的,FMR1FMR1基因表达降基因表达降低,但可检测到。
所以低,但可检测到。
所以RT-PCRRT-PCR在男性患者、缺失在男性患者、缺失或点突变的个体是检测不到扩增引物,而对于正常或点突变的个体是检测不到扩增引物,而对于正常个体、前突变及女性可以获得扩增条带。
个体、前突变及女性可以获得扩增条带。
HmadchaHmadchaAA等用等用RT-PCRRT-PCR方法检测该方法检测该FMR1FMR1基因的表达。
基因的表达。
WuWuLQLQ等设计合成了等设计合成了22对特异性引物检测位于对特异性引物检测位于XX染色体染色体上的上的HPRTHPRT基因的转录产物,通过巢式基因的转录产物,通过巢式PCRPCR技术对技术对cDNAcDNA进行扩增、检测。
有助于进行扩增、检测。
有助于FRAXFRAX患者的诊断及患者的诊断及表型的预测,对于遗传咨询有较大的帮助,不能鉴表型的预测,对于遗传咨询有较大的帮助,不能鉴别女性患者及检测前突变状态,从而应用有限。
别女性患者及检测前突变状态,从而应用有限。
15FMRP免疫组化分析应用此方法检测应用此方法检测FMRPFMRP的表达量。
可诊断由于(的表达量。
可诊断由于(CGGCGG)nn的的扩增导致的脆性扩增导致的脆性XX综合征患者,及检出由于缺失、点突变导综合征患者,及检出由于缺失、点突变导致致FMR1FMR1基因不表达的患者,同时简便、经济、快速,适用基因不表达的患者,同时简便、经济、快速,适用于群体筛查,其敏感性于群体筛查,其敏感性100%100%,特异性,特异性97.5%97.5%。
但由于女性。
但由于女性患者体内有一定比例的活性患者体内有一定比例的活性XX染色体,且具有全突变的等位染色体,且具有全突变的等位基因多位于失活的基因多位于失活的XX染色体,大多数淋巴细胞的染色体,大多数淋巴细胞的FMRPFMRP降低降低不明显,易于形成假阴性,且由于前突变等位基因能正常转不明显,易于形成假阴性,且由于前突变等位基因能正常转录,录,FMRPFMRP表达多在正常范围内,亦不适用于前突变携带者表达多在正常范围内,亦不适用于前突变携带者的筛查,因此仅适用于男性患者的诊断。
的筛查,因此仅适用于男性患者的诊断。
RifeMRifeM等比较了等比较了PCRPCR和和FMRPFMRP免疫组化检测在人群筛检方面的差别,认为免疫组化检测在人群筛检方面的差别,认为PCRPCR是最合适、方便、省时的方法。
但对于那些是最合适、方便、省时的方法。
但对于那些PCRPCR检测失检测失败的患者,推荐应用该方法。
败的患者,推荐应用该方法。
16产前诊断2005年ACMG指南建议妊娠10-12周的FXS携带者妇女用绒毛膜绒毛标本,可显示前突变。
CVS细胞不同于外周血细胞,它不存在甲基化的X染色体失活,全突变的FMR1基因5-UTR的三核苷酸(CGG)n重复序列甲基化也可有可无。
利用FMR1基因甲基化和X染色体失活诊断全突变有失准确性。
若CVS结果阳性,应于妊娠15周抽取羊水细胞排除全突变和嵌合体状态。
2FXS治疗新进展目前无有效的治疗方法。
近来在FXS的治疗中最明显的进步就是在动物实验中认识到了FXS潜在的缺陷和发展了的可能的治疗。
2、1一般治疗叶酸可以叶酸可以“修复修复”FXSFXS细胞传代时的脆性位点细胞传代时的脆性位点,使使FMRFMR基因表
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- 脆性 综合征 诊断 治疗 进展